Un protocole de stress d'immobilisation chronique pour induire un comportement de dépression chez les souris
15 mai 2019
Cet article fournit un protocole simplifié et normalisé pour l'induction du comportement dépressif-comme dans les souris chroniquement immobilisées en utilisant un restrainer. En outre, le comportement et les techniques physiologiques pour vérifier l'induction de la dépression sont expliqués.
Commencez par mettre la pièce en lumière à 200 lux à l’aide d’un luxmètre numérique. Abritez la souris dans une cage séparée au moins une semaine avant le test et placez la souris dans la salle d’essai pendant au moins 30 minutes avant l’expérience. Maintenez doucement la queue de la souris pour éviter de crisper la souris, puis placez-la soigneusement sur une surface rugueuse.
Couvrir le restrainer d’une petite serviette blanche, puis placer délicatement la souris à l’ouverture du restrainer, de sorte que la souris entre volontairement dans le restrainer. Ensuite, placez la fermeture pour retenir la souris aussi serré que possible, en prenant soin d’éviter les dommages au corps, tels que la queue, les pieds et les testicules. Enfin, pendant l’exposition au restrainer, mesurez le poids corporel et l’apport alimentaire toutes les 48 heures.
Avant de les tester, habituez les souris à la présence de deux bouteilles à boire, l’une contenant 0,1 saccharose molaire et l’autre contenant de l’eau ordinaire pendant 48 heures. Changez les positions des deux bouteilles après 24 heures pour réduire toute confusion produite par un biais latéral. Le troisième jour, priver les souris d’eau pendant 24 heures.
Puis le jour de l’expérience exposer les souris à deux bouteilles à boire pendant six heures. Après trois heures, changer la position des bouteilles d’eau. Enregistrez le volume en millilitres de solution saccharose et d’eau consommée, puis calculez l’affinité de l’animal avec le saccharose.
Enfin, calculer la préférence du saccharose en pourcentage du volume de consommation de saccharose par rapport à la consommation totale de liquide pendant l’essai. Commencez par amener les souris induites par le stress de retenue chronique dans la salle d’essai au moins 30 minutes avant de commencer le test de suspension de la queue. Réglez la lumière de la pièce dans des conditions sombres à 50 lux.
Ensuite, placez la caméra à environ 40 centimètres de la souris. Suspendre fermement la souris de la barre horizontale à l’aide de ruban adhésif. Après que la souris est positionnée au milieu de la boîte de suspension commencer l’enregistrement, et d’observer les modifications comportementales en continu pendant six minutes.
Si la souris tente d’escalader sa queue, utilisez un bâton ou un bouchon de montée pour l’empêcher de le faire. À la fin de l’expérience déplacer la souris à sa cage d’origine et soigneusement enlever le ruban de sa queue. Enfin, utilisez un logiciel de suivi vidéo pour analyser le temps accumulé des périodes immobiles.
Les résultats indiquent une diminution du poids corporel pour le groupe de la CEI et beaucoup moins d’apport alimentaire au quatrième jour. Comparé aux contrôles, une diminution a été montrée pour la préférence de saccharose dans le groupe de CIS, alors qu’il y avait une augmentation significative du temps d’immobilité et de la corticosterone. En outre, un régime complété par glutamine améthère les comportements dépressifs comme, comme indiqué pour le poids corporel, la prise de nourriture, la préférence de saccharose, l’immobilité, et la corticostérone.
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Aperçu
Cet article fournit un protocole standardisé pour induire un comportement similaire à la dépression chez des souris immobilisées de manière chronique à l’aide d’un dispositif de contention. Il décrit des techniques comportementales et physiologiques permettant de vérifier l’induction de la dépression.
Composantes clés de l'étude
Domaine scientifique
- Neurosciences
- Sciences du comportement
- Modèles animaux de la dépression
Contexte
- La dépression est un trouble de santé mentale important.
- Les modèles animaux sont essentiels à l'étude des mécanismes de la dépression.
- L'immobilisation chronique est une méthode courante pour induire un comportement de type dépressif.
- Les protocoles standardisés améliorent la reproductibilité et la fiabilité des résultats.
Objectif de l'étude
- Fournir un protocole clair pour induire un comportement de type dépressif chez la souris.
- Décrire des méthodes permettant de vérifier l'induction d'un état dépressif.
- Faciliter la recherche dans le domaine de la dépression en utilisant des modèles animaux.
Méthodes utilisées
- Régler l'environnement de test à un éclairement de 200 lux.
- Loger les souris séparément pour l'acclimatation.
- Utiliser un dispositif de contention pour induire l'immobilisation.
- Surveiller le poids corporel et la consommation alimentaire toutes les 48 heures.
Résultats principaux
- Induction réussie d'un comportement similaire à la dépression chez les souris.
- Modifications comportementales observées pendant la période d'immobilisation.
- Les mesures physiologiques corrélées aux résultats comportementaux.
- Le protocole a démontré une reproductibilité entre les essais.
Conclusions
- Le protocole est efficace pour induire un comportement semblable à la dépression.
- Les techniques comportementales et physiologiques sont validées pour la recherche sur la dépression.
- Cette étude contribue à la compréhension de la dépression dans les modèles animaux.
Questions fréquemment posées
Pertinence professionnelle pour l'industrie
Le stress chronique d'immobilisation (CIS) fournit un modèle évolutif et fondé sur des mécanismes permettant d'induire des phénotypes de type dépression chez la souris, soutenant ainsi la validation de cibles en découverte de médicaments neuropsychiatriques. En combinant des mesures comportementales (préférence pour le saccharose, test de suspension par la queue) avec des biomarqueurs physiologiques (corticostérone), ce protocole permet de réduire les risques mécanistiques liés aux cibles du SNC grâce à un criblage phénotypique dans un système pertinent pour la maladie. Cette approche renforce la fiabilité prédictive en phase précoce de découverte en reliant des interventions moléculaires à des réponses comportementales et neuroendocriniennes validées.
Applications stratégiques en recherche et développement en biopharmaceutique
Début de la découverte et validation de la cible
- Valeur scientifique : Permet l'interrogation d'hypothèses thérapeutiques liées à la modulation des voies du stress et à la symptomatologie dépressive.
- Valeur opérationnelle : Soutient la validation fonctionnelle des cibles grâce à des modifications quantifiables de la préférence pour le saccharose et du comportement d'immobilité.
- Valeur prédictive : Facilite le tri du portefeuille en corrélant les effets du composé avec l'inversion des déficits comportementaux et physiologiques induits par le CIS.
Développement de criblages et de tests
- Préparation du test : Prépare des systèmes biologiques validés pour le criblage de composés en aval en utilisant une induction standardisée du stress.
- Résultats quantitatifs : Génère des lectures reproductibles et multimodales (comportementales, hormonales) adaptées à la standardisation des tests.
- Extensibilité : Permet la réutilisation de la plateforme dans divers programmes de découverte du SNC en raison d'exigences minimales en équipement et de critères d'évaluation clairs.
Recherche translationnelle et préclinique
- Pertinence pour la maladie : Modélise des troubles de type dépressif avec une validité apparente par l'anhédonie (préférence réduite pour le saccharose) et le désespoir comportemental (immobilité accrue).
- Continuité translationnelle : Établit un lien entre la modulation de cibles en phase de découverte et la validation préclinique grâce à des biomarqueurs conservés de la réponse au stress.
- Décisions ajustées au risque : Permet de définir des critères d'engagement ou de rejet fondés sur la normalisation des niveaux de corticostérone et des paramètres comportementaux.
Intégration des pipelines et des flux de travail
Le protocole CIS s'inscrit dans le continuum de découverte allant du test d'hypothèses sur une cible à l'identification de composés précurseurs, puis à l'évaluation de l'efficacité préclinique, en particulier pour les composés modulant le SNC.
- Biologie de la découverte : Permet la vérification d'hypothèses sur des composés neuroactifs en induisant un phénotype de stress reproductible.
- Tri : Assure la préparation des tests grâce à une immobilisation standardisée et à l'établissement d'une ligne de base constante.
- Analytique : Fournit des variables dépendantes quantitatives (préférence pour le saccharose en %, durée d'immobilité, corticostérone en ng/mL) permettant des comparaisons entre groupes.
- Recherche translationnelle : S'aligne sur la validation préclinique par l'inversion mesurable des biomarqueurs et comportements induits par le stress.
- Réutilisation en entreprise : Fonctionne comme une plateforme phénotypique réutilisable couvrant plusieurs classes de cibles dans la recherche sur la dépression.
Impact opérationnel et organisationnel
- Valeur scientifique : Accroît la confiance prédictive en réduisant l'ambiguïté mécanistique liée à l'engagement des cibles du SNC.
- Valeur opérationnelle : Assure une standardisation et une reproductibilité entre laboratoires grâce à des périodes d'exposition au stress et des intervalles de mesure définis.
- Valeur stratégique : Améliore l'efficacité du capital en permettant une détection précoce des risques associés aux cibles neuropsychiatriques.
- Impact sur le portefeuille : Favorise une priorisation ajustée au risque en se basant sur des profils de récupération comportementale et physiologique.
Considérations relatives à la mise en œuvre
- Nécessite une expertise dans la manipulation des rongeurs, les tests comportementaux et la physiologie du stress.
- Dépend d'instruments permettant la surveillance de l'éclairement, le suivi vidéo et la détection de la corticostérone par ELISA ou méthode équivalente.
- Exige une standardisation inter-équipes concernant l'utilisation du dispositif d'immobilisation, le positionnement des bouteilles et le moment des tests afin de réduire la variabilité.
- Implique des ajustements à prévoir lors de l'application à différentes souches de souris ou à des durées de stress variables.
- Les limitations pratiques incluent la variabilité de la sensibilité au stress et la nécessité de contrôles d'habituation pour isoler les effets de l'immobilisation.
