Name: Chirurgie de lhémisection de la moelle épinière thoracique et évaluation locomotrice à champ ouvert chez le rat (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-06-26T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 44 s
Description: Apprenez l'hémisection thoracique de la moelle épinière chez le rat pour étudier les mécanismes de récupération locomotrice. Cette méthode chirurgicale permet d'évaluer les déficits moteurs unilatéraux et leur amélioration post-lésion.

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Ces travaux ont été appuyés par les Instituts de recherche en santé du Canada (IRSC; MOP-142288) à M.M. M.M. a été appuyé par une bourse salariale du Fonds de Recherche Québec Santé (FRQS), et A.R.B a été soutenu par une bourse de FRQS.

Les expériences décrites dans cet article ont été réalisées conformément aux lignes directrices du Conseil canadien de protection des animaux et ont été approuvées par le comité d'éthique de l'Université de Montréal.
1. Chirurgie de l'hémisection thoracique
<ol><li>Portez l'équipement de protection approprié (gants, masque et robe) pour maintenir un environnement aseptique pour la chirurgie. Nettoyez la zone chirurgicale avec des lingettes d'alcool, et placez des rideaux chirurgicaux stériles sur le champ chirurgical. Stériliser les outils chirurgicaux et les placer sur le terrain chirurgical.</li>
	<li>Anesthésiez le rat sous un mélange de gaz isoflurane (3 % d'induction, 0,5 à 3 % d'entretien) et d'oxygène (1 L/min). Confirmer la profondeur anesthésique chirurgicale appropriée en vérifiant l'absence de pincement d'orteil et de réponses réflexes cornéennes. Surveillez continuellement le rat pendant toute la procédure, et ajustez la quantité de livraison anesthésique au besoin pour maintenir la profondeur anesthésique chirurgicale.</li>
	<li>Raser le tronc dorsal entre la hanche et le cou, placer le rat sur le champ chirurgical, désinfecter le site d'incision avec des lingettes d'alcool et une solution de proviodine, et maintenir la température corporelle du noyau à 37 oC à l'aide d'un coussin chauffant contrôlé par rétroaction surveillé par rectal thermomètre.</li>
	<li>Placez l'onduleur ophtalmique sur les yeux pour les garder hydratés et réappliquer tout au long de la chirurgie au besoin.</li>
	<li>Faire une incision de 2,5 cm dans la peau en superposant les vertèbres T6-T10 avec un scalpel. Retirez la peau et la graisse superficielle à l'aide de ciseaux de dissection émoussés. REMARQUE : Les segments vertébraux T6-T10 peuvent être identifiés soit rostally par palpation douce des segments spinaux dorsaux de la base du crâne à partir de la protubérance notable de la vertèbre thoracique24, ou caudally par palpation de la nervure flottante la plus postérieure qui induira le mouvement dans les vertèbres thoraciques 13 e.</li>
	<li>Séparez les muscles paravertbral en insérant sur l'aspect dorsal des vertèbres T7-T9 à l'aide de ciseaux de dissection émoussés et d'un rétracteur auto-retenu. Débrider et effacer tout tissu restant à l'aide de forceps fins et d'applicateurs à pointe de coton pour exposer les processus spinous et lalamines vertébrales. REMARQUE : Ceci, et les étapes suivantes sont grandement aidés par la visualisation microscopique (5 à 15x).</li>
	<li>Couper soigneusement les facettes (articulations zygapophysiales) bilatéralement sur les vertèbres T7 et T8 avec des coupe-os délicats. Couper le tissu conjonctif dorsal entre les lamelles vertébrales T8 et T9 superficiellement avec un scalpel (1 mm de profondeur) en prenant soin de ne pas blesser le cordon de sous-pose.</li>
	<li>Enlever le processus spinous de la vertèbre T8 avec des coupe-os. Avec des forceps hémostatiques courbes soigneusement serrés sur le processus pieux T7, faites pivoter l'extrémité caudale de la lamée T8 légèrement rostalement (20 degrés), insérez les coupe-os sous la lame T8, et faites une coupe de ligne médiane s'étendant le long de la lame. Continuer la laminectomie en répétant les coupures sur le côté gauche et droit de la lame vertébrale médiale aux processus transversaux pour exposer la moelle épinière. REMARQUE : Veillez à enlever tous les fragments d'os créés à partir de la laminectomie.</li>
	<li>Drip lidocaïne (2%, 0.1 ml) dans le canal spinal exposé et enlever la dura superposant le segment spinal de T8 utilisant les forceps fins et les ciseaux d'iridectomy. Répétez l'administration de la lidocaïne au cordon exposé et identifiez la ligne médiane du cordon par visualisation d'une ligne centrale créée entre les processus spinous s'étendant entre les vertèbres T7-T9 exposées. REMARQUE : Avec les processus spinous sur T7 et T9, les ganglions de racine dorsale exposés sur T8 peuvent également être employés pour aider à identifier la ligne médiane et une aiguille de 30 G peut être placée dans la ligne médiane du cordon pour aider avec l'hmisection suivante.</li>
	<li>Hémiquer la moelle épinière de la ligne médiane vers un côté avec un couteau de dissection. Veillez à ne pas couper à travers l'artère spinale antérieure sur le côté ventral (ne pas appliquer de pression ferme sur le corps vertébral). À l'aide de ciseaux d'iridectomy, coupez soigneusement par n'importe quel tissu restant sur le côté lesionné de la moelle épinière pour s'assurer que le quadrant ventrolatéral est convenablement transecté.</li>
	<li>Placer l'éponge hémostatique stérile imbibée de saline (6 x 2 mm) dans la cavité exposée au-dessus de la moelle épinière et suturer les couches musculaires (4-0 polyglactin 910). Ensuite, suturer la peau autour du site d'incision.</li>
	<li>Fournir un analgésique adéquat (buprénorphine 0,05 mg/kg sous-cutané [s.c.]), un antibiotique (enrofloxacine, 10 mg/kg s.c.), et reconstituer les liquides perdus avec la solution de la sonnerie lactée de 5 cc (intrapéritoné [i.p.]) immédiatement après la chirurgie.</li>
	<li>Retirer le rat de l'anesthésie. Placer le rat dans un environnement chaud sous un coussin chauffant ou une lampe (33 oC) jusqu'à ce que l'animal soit complètement éveillé.</li>
	<li>Fournir une analgésie supplémentaire tous les jours au cours des 3 premiers jours post-chirurgicaux et de surveiller continuellement les signes de douleur, perte de poids, micturition incorrecte, infection, problèmes de cicatrisation des plaies, ou autophagie.</li>
</ol>2. Procédure d'essai en plein champ et notation des performances locomotrices
<ol><li>Manipulez les rats tous les jours pendant 1 semaine et habituez-les à l'aréna pendant deux séances de 5 minutes avant les essais pour s'acclimater à être ramassés, doucement à partir du milieu du tronc, tandis que dans le champ ouvert et pour assurer la fiabilité de mesure pendant les essais.</li>
	<li>Placez une caméra au niveau du sol face à l'arène circulaire en plexiglas en champ ouvert pour enregistrer les séances d'essai pour l'analyse hors ligne (30 à 60 images/s minimum).</li>
	<li>Commencez l'enregistrement vidéo et placez le rat au centre de l'arène dans des conditions de faible luminosité pour encourager l'activité locomotrice.</li>
	<li>Continuer la séance d'essai pendant 4 min pour assurer une quantité suffisante de combats locomoteurs pour l'analyse. Ramassez et remplacez les rats au centre de l'arène lorsqu'ils restent immobiles pendant plus de 20 s pour favoriser la locomotion.</li>
	<li>Score locomotor performance de la session d'essai enregistrée en complétant la rubrique fournie dansTableau 1selon les paramètres des sous-sections suivantes. REMARQUE : Il est utile de marquer chaque paramètre séparément en visualisant à plusieurs reprises la session de test enregistrée à l'aide d'un logiciel qui permet une vitesse de lecture variable et une analyse image par image (p. ex., lecteur multimédia VLC).<ol><li>Pour les mouvements articulaires des membres, marquer les mouvements articulaires des membres postérieurs pendant la locomotion spontanée séparément pour la cheville, le genou et la hanche comme normal (plus de la moitié de l'aire de répartition du mouvement, score attribué 2), léger (moins de la moitié de l'aire de répartition, score attribué 1), ou absent (score attribué 0).</li>
		<li>Pour le soutien du poids, évaluer la capacité des muscles extenseurs de l'arrière-pays à se contracter et soutenir le poids corporel chargé lorsque le membre est au sol séparément pour quand le rat est stationnaire ainsi que pendant la locomotion active. Attribuez une note de 1 lorsque le soutien du poids est présent et un score de 0 lorsque le soutien du poids est absent. REMARQUE : Le support de poids stationnaire est considéré comme un perquisite pour le soutien de poids actif.</li>
		<li>Pour la position des chiffres, évaluer la position des chiffres postérieurs pendant que le rat est stationnaire et pendant la locomotion. Attribuez une note de 2 lorsque les chiffres de l'arrière-membre sont étendus, espacés les uns des autres, et tonique pendant la locomotion dans plus de 50% de la période d'essai (considéré comme normal). Attribuer une note de 1 lorsque les chiffres restent principalement fléchis et un score de 0 lorsque les chiffres restent principalement atoniques.</li>
		<li>Pour le pas, complétez ce paramètre seulement si le rat peut soutenir son poids corporel pendant l'étape. Évaluer l'étape en évaluant l'orientation du placement de la patte postérieure au moment du premier contact et au décollage du sol en plus de la fluidité de la phase d'oscillation pendant l'étape. REMARQUE : Il y a 3 scores pour ce paramètre décrits dans les sous-sections suivantes évaluant séparément : 1) l'orientation axiale du placement de patte au contact de membre (placement dorsal/plantaire), 2) l'orientation longitudinale du placement de patte au contact initial et pendant la portance (parallèle à l'axe du corps ou en rotation interne/externe), et 3) la qualité du mouvement des membres pendant l'oscillation (régulière ou irrégulière).<ol>
<li>Pour le placement de patte au contact de membre, marquez l'orientation axiale du placement de patte au contact de membre comme 0 quand les placements dorsaux se produisent dans plus de 50% d'étapes. REMARQUE : Le placement plantaire est considéré comme un perquisite pour marquer l'orientation de la patte au contact et à l'ascenseur (étape 2.5.4.2), le mouvement d'oscillation (étape 2.5.4.3) et la coordination de l'avant-membre -hindlimb (étape 2.5.5).</li>
			<li>Pour l'orientation de la patte au contact et à l'ascenseur des membres, accordez une note de 2 lorsque les axes longitudinals de la patte et du corps sont parallèles et un score de 1 lorsque le membre est tourné à l'extérieur ou à l'intérieur, séparément pour le contact et l'ascenseur des membres.</li>
			<li>Pour le mouvement de balançoire, attribuez une note de 2 lorsque les articulations des membres postérieurs se déplacent de façon harmonieuse et régulière pendant la balançoire et un score de 1 lorsque des mouvements saccadés ou spasmodiques des articulations se produisent pendant la balançoire.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Pour la coordination avant-membre-hindlimb, complétez ce paramètre seulement si 4 étapes consécutives se produisent pendant l'essai et si les membres peuvent soutenir activement le poids corporel. Attribuer une note de 3 lorsque la coordination est cohérente (90 % des étapes), 2 lorsqu'elles sont fréquentes (50 à 90 % des étapes), 1 occasionnelle (50 % des étapes) ou 0 en cas d'absence (0 % des étapes). REMARQUE : La coordination de l'avant-garde est définie comme une alternance régulière entre le membre postérieur marqué et le membre antérieur du même côté du corps.</li>
		<li>Pour la position de la queue, évaluez la position de la queue pendant la locomotion comme étant soit en place (hors du sol, score attribué à 1) ou vers le bas (toucher le sol, score attribué 0). REMARQUE : Une position élevée de la queue pendant la locomotion est un indicateur de stabilité du tronc chez le rat. Après l'hémisection, la queue est normalement tenue près du sol ou en touchant le sol, car la stabilité du tronc est altérée.</li>
		<li>Ajouter les scores individuels de chaque paramètre pour fournir un total pour chaque membre postérieur d'un maximum de 20 points. REMARQUE : Un score de 20 indique la performance locomotrice normale. Les scores de lt;20 représentent des quantités croissantes de déficience locomotrice et un score de 0 indique la paralysie des membres.</li>
	</ol></li>
</ol>

Les auteurs n'ont rien à révéler.

Une force majeure de la technique d'hémisection est la sélectivité et la reproductibilité de la lésion qui conduit à une variabilité réduite dans les phénotypes histologiques et comportementaux entre les animaux25. Afin d'assurer une lésion unilatérale au niveau spinal approprié, l'identification précise du segment vertébral approprié et de la ligne médiane de moelle épinière est critique. Comme il peut y avoir une tendance pour la moelle épinière à tourner dans la direction de la coupe au cours d...

Les dommages de moelle épinière (SCI) sont associés aux perturbations graves dans la fonction motrice, sensorielle, et autonome. Les modèles animaux expérimentaux de SCI sont des outils précieux pour comprendre les événements anatomiques et physiologiques impliqués dans la pathologie de SCI, pour étudier les mécanismes neuronaux dans la réparation et la récupération, et pour dépister l'efficacité et l'innocuité de la thérapeutique potentielle Interventions. Le rat est l'espèce la plus couramment utilisée dans la recherche SCI1. Les modèles de rat sont peu coûteux, faciles à reproduire, et une grande batterie de tests comportementaux sont disponibles pour évaluer les résultats fonctionnels2. Malgré quelques différences dans l'emplacement des voies, la moelle épinière du rat partage des fonctions sensorimotrices similaires globales avec les grands mammifères, y compris les primates3,4. Les rats partagent également des conséquences physiologiques et comportementales analogues à l'ICS qui se rapportent aux humains5. Les primates non humains et les grands modèles animaux peuvent fournir une approximation plus proche de l'homme SCI6 et sont essentiels pour prouver l'innocuité et l'efficacité du traitement avant l'expérimentation humaine, mais sont moins couramment utilisés en raison de l'éthique et le bien-être animal considérations, dépenses et exigences réglementaires7.
Les modèles de SCI de transection de rat sont exécutés par l'interruption ciblée de la moelle épinière avec une lésion sélective utilisant un couteau de dissection ou des ciseaux d'iridectomy après une laminectomy. Comparé à une transection complète, la transection partielle dans le rat a comme conséquence des dommages moins graves, le soin postopératoire plus facile d'animal, le rétablissement locomoteur spontané, et plus étroitement des modèles SCI chez l'homme qui est principalement incomplet avec l'épargnant partiel de tissu reliant la moelle épinière et les structures supraspinales8. Une hémisection unilatérale perturbe toutes les voies ascendantes et descendantes d'un seul côté, et produit des déficits locomoteurs quantifiables et hautement reproductibles, améliorant l'exploration des mécanismes biologiques sous-jacents. La conséquence fonctionnelle la plus importante de l'hémisection est une paralysie initiale de membre du même côté et au-dessous du niveau de la lésion avec le rétablissement spontané gradué de la fonction locomotrice sur plusieurs semaines9,10, 11 Ans, états-unis ( , 12. Le modèle d'hémisection est particulièrement utile pour étudier la plasticité neuronale des voies et circuits endommagés et résiduels liés à la récupération fonctionnelle9,11,12, 13,14,15,16,17,18. Plus précisément, l'hémisection effectuée au niveau thoracique, c'est-à-dire au-dessus des circuits spinaux qui contrôlent la locomotion de l'arrière-pays, est particulièrement utile pour étudier les changements dans le contrôle locomoteur. Comme une relation non linéaire existe entre la sévérité des lésions et la récupération locomotrice après SCI19, des tests comportementaux appropriés pour évaluer les résultats fonctionnels sont primordiaux dans les modèles expérimentaux.
Une batterie complète de tests comportementaux sont disponibles pour évaluer les aspects spécifiques de la récupération locomotrice fonctionnelle chez le rat2,20. Beaucoup de tests locomoteurs ne fournissent pas de mesures fiables tôt après SCI que les rats sont trop handicapés pour soutenir leur poids corporel. Une mesure de la performance locomotrice spontanée qui est sensible aux déficits tôt après une blessure, et ne nécessite pas de formation préopératoire ou d'équipement spécialisé, est bénéfique afin de surveiller la récupération locomotrice pour les points de temps appropriés dans lesquels compléter les tests comportementaux spécialisés. Le score d'évaluation en champ ouvert10de Martinez, initialement développé pour évaluer la performance locomotrice après l'IC cervicale chez le rat, est un score ordinal de 20 points évaluant la performance locomotrice globale pendant la locomotion spontanée au-dessus du sol dans un champ ouvert. La notation est effectuée séparément pour chaque membre à l'aide d'une rubrique qui évalue les paramètres spécifiques d'une gamme de mesures locomotrices, y compris le mouvement des membres articulaires, le soutien du poids, la position des chiffres, les capacités de pas, la coordination avant-membre et le membre postérieur, et la queue position. Le score d'évaluation est dérivé de l'échelle d'évaluation en champ ouvert de Basso, Beattie et Bresnahan (BBB) conçue pour évaluer les performances locomotrices après contusion thoracique21. Il est adapté pour évaluer avec précision et fiabilité à la fois la fonction locomotrice des membres antérieurs et des membres postérieurs, permet une évaluation indépendante des différents paramètres de notation qui ne sont pas adaptés à la notation hiérarchique du BBB, et fournit une récupération linéaire profil10. En outre, par rapport à la BBB, le score d'évaluation est sensible et fiable dans les modèles de blessures plus graves10,11,20,22. Le score d'évaluation a été utilisé pour évaluer l'affaiblissement locomoteur chez le rat suivant cervical10,12 et thoracique9 SCI seul et en combinaison avec des lésions cérébrales traumatiques23.
Nous présentons ici un protocole détaillé étape par étape pour effectuer une sCI d'hémisection thoracique au niveau vertébral de T8 dans le rat long-Evans femelle, et pour évaluer la récupération locomotrice de membre arrière dans le champ ouvert.

<table><tbody><tr><td>Baytril</td><td>CDMV</td><td>11242</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux de dissection émoussée</td><td>World Precision Instruments</td><td>503669</td><td></td></tr><tr><td>Buprénorphine hydrochlorure</td><td>CDMV</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Objectif de caméra</td><td>Pentax</td><td>C31204TH</td><td>12.5-75mm, f1.8, format 2/3", monture C</td></tr><tr><td>Caméra vidéo CMOS</td><td>Basler</td><td>acA2000-165uc</td><td>Format 2/3", 2048 x 1088 pixels, jusqu’à 165 ips, monture C, USB3</td></tr><tr><td>Gaz d’oxygène comprimé</td><td>Praxair</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Applicateurs à embout en coton</td><td>CDMV</td><td>108703</td><td></td></tr><tr><td>Coupe-os délicats</td><td>Outils de science fine</td><td>16109-14</td><td></td></tr><tr><td>Couteau à dissection</td><td>Outils de science fine</td><td>10055-12</td><td></td></tr><tr><td>Pince fine Dumont</td> <td>Outils de science</td> <td>fine11254-20</td><td></td></tr><tr><td>Ethicon Vicryl 4/0 Violet Tressé FS-2 suture (J392H)</td><td>CDMV</td><td>111689</td><td></td></tr><tr><td>Coussin chauffant contrôlé par rétroaction</td><td>Harvard Apparatus</td><td>55-7020</td><td></td></tr><tr><td>Rats Long-Evans femelles</td><td>Charles River Laboratories</td><td>Code de souche : 006</td><td>225-250g</td></tr><tr><td>Gelfoam</td><td>CDMV</td><td>102348</td><td></td></tr><tr><td>Pince à hémostatique incurvée</td><td>Fine Science Tools</td><td>13003-10</td><td></td></tr><tr><td>Stérilisateur à billes chaudes</td><td>Fine Science Tools</td><td>18000-45</td><td></td></tr><tr><td>Hydrogel</td><td>70-01-5022</td><td>Clear H20</td><td></td></tr><tr><td>Isofluorane</td><td>CDMV</td><td>118740</td><td></td></tr><tr><td>Lactate Ringer’s solution</td><td>CDMV</td><td>116373</td><td></td></tr><tr><td>Lidocaïne (2 %)</td><td>CDMV</td><td>123684</td><td></td></tr><tr><td>Aiguille 30 ga</td><td>CDMV</td><td>4799</td><td></td></tr><tr><td>Aire ouverte</td><td>Circulaire sur mesure</td><td></td><td>Arène en plexiglas 96 cm de diamètre, hauteur de paroi 40 cm</td></tr><tr><td>Pommade ophtalmique</td><td>CDMV</td><td>110704</td><td></td></tr><tr><td>Ordinateur personnel&nbsp ;</td><td></td><td></td><td>Avec connectivité USB3 pour enregistrer des vidéos avec la caméra répertoriée</td></tr><tr><td>Saline physiologique</td><td>CDMV</td><td>1399</td><td></td></tr><tr><td>Proviodine</td><td>CDMV</td><td>4568</td><td></td></tr><tr><td>Rongeurs diététiques liquides</td><td>Bioserv</td><td>F1268</td><td></td></tr><tr><td>Lame de scalpal #11</td><td>CDMV</td><td>6671</td><td></td></tr><tr><td>Enrouleur auto-rétracteur</td><td>World Precision Instruments</td><td>14240</td><td></td></tr><tr><td>Vannas iridectomie ciseaux à ressort</td><td>Fine Science Tools</td><td>15002-08</td><td></td></tr><tr><td>Machine d’anesthésie vétérinaire et vaporisateur d’isofluarane</td><td>Dispomed</td><td>975-0510-000</td><td></td></tr><tr><td>VLC lecteur multimédia</td><td>VideoLAN</td><td></td><td>videolan.org/vlc</td></tr></tbody></table>

chirurgie de l'hémisection de la moelle épinière thoracique et évaluation locomotrice à champ ouvert chez le rat

Thoracic Spinal Cord Hemisection Surgery and Open-Field Locomotor Assessment in the Rat

Les lésions de la moelle épinière (SCI) causent des perturbations dans la fonction motrice, sensorielle et autonome au-dessous du niveau de la lésion. Les modèles animaux expérimentaux sont des outils précieux pour comprendre les mécanismes neuronaux impliqués dans la récupération locomotrice après SCI et pour concevoir des thérapies pour les populations cliniques. Il existe plusieurs modèles expérimentaux de SCI, y compris la contusion, la compression et les blessures par transsection qui sont utilisés dans une grande variété d'espèces. Une hémisection implique la transection unilatérale de la moelle épinière et perturbe toutes les voies ascendantes et descendantes d'un seul côté. L'hémisection spinale produit une blessure fortement sélective et reproductible par rapport aux techniques de contusion ou de compression qui est utile pour étudier la plasticité neurale dans les voies épargnées et endommagées liées à la récupération fonctionnelle. Nous présentons un protocole étape par étape détaillé pour effectuer une hémisection thoracique au niveau vertébral de T8 dans le rat qui a comme conséquence une paralysie initiale du membre postérieur sur le côté de la lésion avec le rétablissement spontané gradué de la fonction locomotrice au-dessus de plusieurs Semaines. Nous fournissons également un protocole de notation locomoteur pour évaluer la récupération fonctionnelle dans le champ ouvert. L'évaluation locomotrice fournit un profil de récupération linéaire et peut être effectuée à la fois tôt et à plusieurs reprises après les blessures afin de filtrer avec précision les animaux pour les points de temps appropriés dans lesquels effectuer des tests comportementaux plus spécialisés. La technique d'hémisection présentée peut être facilement adaptée à d'autres modèles et espèces de transection, et l'évaluation locomotrice peut être utilisée dans une variété de SCI et d'autres modèles de blessures pour marquer la fonction locomotrice.

Des lésions reproductibles avec un degré élevé de cohérence peuvent être générées avec la technique d'hémisection. Pour évaluer et comparer des tailles de lésions entre les groupes expérimentaux, la zone maximale de la lésion en pourcentage de la section transversale totale de la moelle épinière peut être facilement calculée avec la coloration histologique des sections de moelle épinière. La figure 1 montre une lésion représentative de l'hémicorde gauche et une couche de la proportion de la ...

L'hémisection spinale thoracique de rat est un modèle valable et reproductible des dommages unilatéraux de moelle épinière pour étudier les mécanismes neurals de la récupération locomotrice et de l'efficacité de traitement. Cet article comprend un guide détaillé étape par étape pour effectuer la procédure d'hémisection et d'évaluer les performances locomotrices dans une arène de champ ouvert.

Chirurgie de l'hémisection de la moelle épinière thoracique et évaluation locomotrice à champ ouvert chez le rat

Spinal cord injury (SCI) causes disturbances in motor, sensory, and autonomic function below the level of the lesion. Experimental animal models are ...

L’hémisection spinale produit des déficits locomoteurs quantifiables et reproductibles idéaux qui peuvent être capturés avec l’échelle de la locomotive que nous avons développée. Le principal avantage de cette technique est la sélectivité et la reproductibilité de la lésion, ce qui conduit à une variabilité réduite des phénotypes comportementaux entre les animaux. Après avoir confirmé un manque de réponse à la pincement des pieds chez un rat adulte anesthésié, faire une incision de 2,5 centimètres dans la peau rasée au-dessus des vertèbres T-6 à T-10 et utiliser des ciseaux contondants pour rétracter la peau et la graisse superficielle.Utilisez des ciseaux de dissection contondants et un rétracteur auto-retenant pour séparer les muscles paravertébraux, en insérant sur l’aspect dorsale des vertèbres T-7 à T-9 et utilisez des forceps fins et des applicateurs à pointe cotonnière pour débrider et effacer tout tissu restant pour exposer les processus épineux et le lamina vertébral. Placez le taux sous un microscope stéréo et utilisez des taille-os délicats pour couper soigneusement les facettes bilatéralement sur les vertèbres T-7 et T-8. Utilisez un scalpel pour faire une coupe superficielle d’un millimètre dans le tissu conjonctif dorsal entre les laminaires vertébraux T-8 et T-9, en prenant soin de ne pas blesser le cordon sous-jacent et d’utiliser des taille-os pour enlever le processus épineux de la vertèbre T-8.Avec des forceps hémostatiques incurvés soigneusement serrés sur le processus épineux T-7, faites pivoter l’extrémité caudale de la laminae T-8 légèrement rostrally approximativement 20 degrés et insérez les taille-os sous le lamina T-8. Faire une coupe médiane s’étendant le long de la lamina, en continuant la laminectomie en répétant les coupures sur le côté gauche et droit de la médiale vertébrale lamina aux processus transversaux pour exposer la moelle épinière. Égoutter 100 microlitres de 2% de lidocaïne dans le canal rachidien exposé et utiliser des forceps fins et ciseaux iridectomy pour enlever le dura superposant le segment spinal T-8.Répétez l’administration de lidocaïne au cordon exposé et identifiez la ligne médiane du cordon par visualisation d’une ligne centrale créée entre les processus épineux s’étendant entre la vertèbre T-7 à T-9 exposée. À l’aide de forceps fins pour stabiliser la moelle épinière, utilisez un couteau dissecting pour hémisquer la moelle épinière de la ligne médiane vers un côté de l’animal, en prenant soin de ne pas couper à travers l’artère spinale antérieure sur le côté ventral. À l’aide de ciseaux iridectomy, couper soigneusement tous les tissus restants du côté de lésion de la moelle épinière pour s’assurer que le quadrant ventral-latéral est correctement transected et placer un stérile, environ six par deux millimètres éponge hémostatique trempée dans la cavité exposée au-dessus de la moelle épinière.Ensuite, utilisez des sutures 4-O polyglactine 910 pour fermer les couches musculaires et la peau autour du site d’incision et placer le rat dans un environnement chaud sous une lampe thermique avec surveillance jusqu’à une récupération complète. Au moment expérimental approprié pour les tests comportementaux, après que les rats ont été habitués à l’arène, commencer l’enregistrement vidéo et placer un rat au centre de l’arène, dans des conditions de faible lumière pour encourager l’activité locomotrice. Laissez le rat explorer pendant au moins quatre minutes, en déplaçant le rat vers le centre de l’arène quand il reste stationnaire pendant plus de 20 secondes pour promouvoir la locomotion.Ensuite, marquez les performances locomotrices de la session de test enregistrée. Pour les mouvements des membres articulaires, marquer les mouvements articulaires postérieurs pendant la locomotion spontanée séparément pour la cheville, le genou et la hanche, comme étant normaux, légers ou absents. Pour le soutien du poids, évaluez la capacité des muscles extenseurs de l’interurbe à se contracter et à soutenir le poids corporel chargé lorsque le membre est au sol pour le moment où le rat est stationnaire, ainsi que pendant la locomotion active.Pour la position numérique, évaluez la position des chiffres de l’arrière-corps pendant que le rat est stationnaire et pendant la locomotion. Remplissez le paramètre de marche seulement si le rat peut soutenir son poids corporel pendant le pas en adjugeant l’orientation du placement de la patte arrière au moment du contact initial et au décollage du sol en plus de la fluidité de la phase de balançoire pendant le pas. Remplissez le paramètre de coordination avant/postérie seulement si quatre étapes consécutives se produisent pendant l’essai et si les membres peuvent soutenir activement le poids corporel.Évaluez la position de la queue pendant la locomotion comme étant à la hausse ou à la baisse. Ajoutez ensuite les scores individuels de chaque paramètre pour fournir un total pour chaque limite arrière à un maximum de 20 points. Pour évaluer et comparer des tailles de lésion entre les groupes expérimentaux, la zone maximale de la lésion en pourcentage de la section transversale totale de la moelle épinière peut être facilement calculée avec la coloration histologique des sections de moelle épinière.Par exemple, cette lésion représentative de l’hémicord gauche avec une superposition de la proportion de zone maximale de lésion partagée entre les rats a démontré la taille moyenne de lésion d’approximativement 47% de la zone transversale de corde. Ces changements représentatifs dans la performance locomotrice dans l’état intact au cours des cinq premières semaines après l’hémisection gauche démontrent une affaiblissement significative de locomotion dans l’arrière gauche de l’animal pendant les trois premières semaines après la chirurgie. Une amélioration du niveau de locomotion est observée dans l’arrière-plan droit par deux semaines après la procédure.Les choses les plus importantes à retenir sont qu’une identification précise de la ligne médiane spinale pour l’hémisection et le soin et la surveillance appropriés d’animal post-chirurgical sont essentiels pour un protocole réussi. Cette évaluation comportementale fournit un protocole idéal pour dépister les indices parétrecorviaux supérieurs pour compléter avec des tests spécialisés pour répondre à une question spécifique d’intérêt sur la récupération locomotrice.

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Un examen longitudinal de la perte osseuse dans les fémurs et les tibias des souris adultes a été réalisée suite à une blessure de la moelle épinière en utilisant séquentielle faible dose de rayons X scanne. La perte osseuse du tibia a été détecté pendant l'étude, tandis que la perte osseuse dans le fémur n'a pas été détecté jusqu'à 40 jours après la lésion.

Évaluation longitudinale des souris Limb perte osseuse Hind après un traumatisme médullaire utilisant Novel, In vivo Méthodologie

Cette vidéo montre la procédure chirurgicale pour effectuer une hémisection de la moelle épinière thoracique chez le rat. Il décrit les étapes à suivre pour exposer le segment T8 de la moelle épinière, effectuer l’hémisection pour perturber les voies neurales d’un côté et fournir des soins postopératoires.

Réalisation d’une chirurgie de l’hémisection de la moelle épinière thoracique chez le rat

Les lésions graves de la moelle épinière entraînent souvent des anomalies tissulaires. Deux possibilités sont décrites pour combler avec succès ces lacunes afin de promouvoir l’adaptation tissulaire, les réponses régénératives et l’amélioration fonctionnelle chez le rat via l’implantation d’un système de microconnecteur mécanique après une lésion aiguë et cinq semaines après une transsection complète de la moelle épinière.

Stratégies expérimentales pour combler les lacunes de tissus grandes dans la moelle épinière lésée après aiguë et chronique Lésion

Ici nous présentons une combinaison de laser Doppler l’imagerie de perfusion (LDPI) et laser Doppler perfusion surveillance (LDPM) pour mesurer la colonne vertébrale du cordon débits sanguins locaux et la saturation en oxygène (SO2), ainsi qu’une procédure normalisée pour l’introduction de la moelle épinière traumatisme chez le rat.

À l’aide de Laser Doppler d’imagerie et de surveillance pour analyser la Microcirculation de la moelle épinière chez le Rat

Ici nous décrivons des procédures chirurgicales pour produire une hémisection latérale fiable de moelle épinière (HX) au niveau thoracique de 9e dans les rats adultes et évaluations neurocomportementales conçues pour détecter des déficits asymétriques après une telle blessure unilatérale.

Hémisection latérale de la moelle épinière et évaluations comportementales asymétriques chez les rats adultes

Ce protocole illustre notre modèle de formation axée sur l’activité locomotrice tapis roulant pour les rats avec de la moelle épinière (SCI). On trouve des groupes fois quadrupèdes et patte avant uniquement, en plus de deux types distincts de groupes témoins non formés. Les enquêteurs sont en mesure d’évaluer les effets de la formation sur des rats SCI utilisant ce protocole.

La formation axée sur l’activité sur un tapis roulant avec la moelle épinière blessée des Rats Wistar

Ce protocole décrit comment créer une laminectomie précise pour l’induction de lésions stables de la moelle épinière de type transection dans le modèle de souris, avec des dommages collatéraux minimes pour la recherche sur les lésions médullaires.

Induction d’une lésion complète de la moelle épinière de type transection chez la souris

L’analyse automatisée de démarche est un outil faisable pour évaluer la récupération fonctionnelle dans les modèles de rongeur des dommages périphériques de nerf et des dommages de contusion de moelle épinière. Bien qu’il ne nécessite qu’une seule configuration pour évaluer la fonction locomotrice dans divers modèles expérimentaux, l’ajustement méticuleux des marchandises dures et douces et la formation des animaux est très important.

Analyse automatisée de la démarche pour évaluer la récupération fonctionnelle chez les rongeurs ayant des lésions périphériques du nerf ou de la contusion de la moelle épinière

Nous décrivons ici une nouvelle technique rapide de modélisation des lésions ouvertes de la moelle épinière chez le rat qui élimine la laminectomie. L’hémisection latérale est réalisée lors d’une visualisation au microscope. La technique est polyvalente et peut également être utilisée dans les régions cervicales, thoraciques et lombaires de la moelle épinière d’autres animaux.

Une technique d’hémisection latérale rapide et mini-invasive de la moelle épinière pour modéliser les lésions ouvertes de la moelle épinière chez le rat

Les complications respiratoires sont la principale cause de décès chez les personnes atteintes d’une lésion de la moelle épinière cervicale (SCI). Les modèles animaux de SCIc sont essentiels pour les évaluations mécanistes et les études précliniques. Ici, nous introduisons une méthode reproductible pour évaluer la récupération fonctionnelle de l’activité du muscle du diaphragme (DIAm) après une hémisection spinale unilatérale C2 (C2SH) chez le rat.

Évaluation de la récupération fonctionnelle de l’activité du diaphragme eupnéique après une hémisection unilatérale de la moelle épinière cervicale chez le rat

Ce protocole chirurgical est un guide étape par étape pour insérer un cathéter intrathécal dans l’espace sous-dural de la colonne vertébrale d’un rongeur afin d’administrer un traitement ciblé.

Accès à l’espace sous-dural de la moelle épinière des rongeurs pour l’administration du traitement

Apprenez l'hémisection thoracique de la moelle épinière chez le rat pour étudier les mécanismes de récupération locomotrice. Cette méthode chirurgicale permet d'évaluer les déficits moteurs unilatéraux et leur amélioration post-lésion.

Chirurgie de l'hémisection de la moelle épinière thoracique et évaluation locomotrice à champ ouvert chez le rat

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