Utilisation de la tomographie calculée par rayons X micro avec préparation d'acide phosphotungstic pour visualiser le tissu fibromusculaire humain

Nous mettons en œuvre microCT avec de l’acide phosphotungstic pour améliorer le contraste des tissus mous dans l’enquête non invasive de l’orbicularis humain soutènement ligament, une structure délicate dans la zone de l’orbite. Ce protocole a été optimisé pour aider les chercheurs dans l’investigation non invasive des tissus mous humains et est simple à exécuter avec un montant raisonnable de dépenses. Pour obtenir les échantillons, utilisez d’abord un crayon de couleur pour indiquer la zone de coupe sur la peau pour la récolte de l’échantillon.

Confirmez que la ligne marquée s’étend médiocrement à un campus médial, latéralement à un campus latéral, supérieure à une bordure supérieure de la paupière inférieure, et inférieurement à un centimètre au-dessous de la ligne de la jante orbitale. Ensuite, utilisez une lame pour couper les tissus faciaux le long de la ligne marquée, en s’assurant que la coupe est suffisamment profonde pour que la pointe de la lame touche l’os. L’échantillon récolté doit inclure la peau, les tissus sous-cutanés, les muscles, les graisses et le périoste.

Lors de la collecte, fixez immédiatement l’échantillon à 10 % de formaline pendant cinq à sept jours à température ambiante. À la fin de la période de fixation, couper l’échantillon en trois morceaux de cinq à sept millimètres d’épaisseur. Utilisez une aiguille et un fil noir pour coudre le côté superolateral de chaque échantillon de sorte que la direction de l’échantillon puisse être déterminée à des moments ultérieurs.

Déshydratez l’échantillon dans une série ascendante de concentration d’éthanol pour une journée par concentration, laissant les échantillons dans la solution d’éthanol à 70 % jusqu’à ce qu’ils soient contaminés. Une semaine avant la tonte du microordinateur, ajouter 2,1 grammes de PTA à 210 millilitres de 70% d’éthanol et placer la solution sur un shaker à 55 à 60 rotations par minute. Préparer trois contenants en plastique de 70 millilitres pour chaque pièce tranchée.

Lorsque le colorant s’est dissous dans la solution d’alcool, remplissez les contenants de la solution. Placez un spécimen dans chaque contenant de 1 % de PTA et secouez les échantillons à 55 à 60 rotations par minute pendant cinq à sept jours. Lorsque la coloration est terminée, conserver les échantillons dans de l’éthanol frais à 70 % pendant une semaine pour se préparer à la numérisation.

Pour la numérisation microCT, envelopper les échantillons dans Parafilm pour éviter le séchage et placer un échantillon sur le plateau du scanner. Réglez la tension source du scanner à 70 kilovolts, le courant source à 114 microampes, le filtre en aluminium à 0,5 millimètres, la taille du pixel d’image à 20 micromètres carrés, les pixels à 2 240 par 2 240, l’exposition à 500 millisecondes et l’étape de rotation à 0,3 degré. Ensuite, lancez la numérisation.

Lorsque la numérisation est terminée, ouvrez le logiciel de reconstruction et sélectionnez Actions et Open Dataset pour lancer les fichiers numérisés. Sélectionnez l’onglet Paramètres et réglez la réduction des artefacts de l’anneau à sept et la correction de durcissement du faisceau. Pour commencer la reconstruction, sélectionnez Démarrer.

Les données finales seront stockées dans le dossier désigné. À la fin de la reconstruction, ouvrez le logiciel de resizing de fichier et sélectionnez l’ensemble de données Source pour lancer les fichiers reconstruits. Sélectionnez jpg sur l’onglet ensemble de données Destination et sélectionnez l’option de resizing 1/2 avec l’option Qualité de Pas d’interpolation Puis ajustez la barre de diapositives à 100 dans l’onglet de compression d’image et démarrez la conversion.

Pour la reconstruction 3D, ouvrez le logiciel de rendu de volume 3D et sélectionnez actions et données de volume de charge. Pour ajuster la luminosité et le niveau de contraste, modifiez la fonction de transfert de forme dans l’histogramme de l’onglet Éditeur de fonction de transfert. Sélectionnez ensuite options et éclairage, et sélectionnez les icônes Ombres et Éclairage de surface pour obtenir un ton de modélisation réaliste.

Cliquez et faites glisser, et cliquez à droite et faites glisser pour déplacer et faire pivoter l’image 3D pour trouver la meilleure vue, défilement pour zoomer ou sortir comme vous le souhaitez. Cliquez sur Décalage et faites glisser pour faire glisser l’endroit pour afficher les images sectionnelles. Allumez l’icône Lumière et ajustez la barre d’indication d’éclairage pour trouver le meilleur éclairage pour la visualisation, puis éteignez l’icône Lumière et fermez l’onglet Éclairage.

Dans l’onglet Options, sélectionnez Afficher et couper la boîte pour masquer la case pour l’image finale. Ensuite, sélectionnez Actions et Enregistrer l’image pour stocker l’image. Cette reconstruction détaillée de l’ORL a été réalisée par microCT avec la préparation de PTA comme démontré, permettant la visualisation d’une structure fibromusculaire ligamentaire s’étendant obliquement entre le derme et le périoste.

Dans la vue coronale, la quantité et la complexité des fibres augmente latéralement. Dans la vue horizontale, on observe un maillage élaboré avec une formation arborisée. Dans la vue sagittale, les épaisseurs des fibres ORL diminuent de façon inférieure.

Dans l’ensemble, cette observation multidirective prouve que l’ORL est composé d’un maillage multicououche de plaques continues avec des variations dans le nombre et l’épaisseur des fibres en fonction de leur emplacement. Lorsque la durée de la coloration est insuffisante par rapport au volume d’un spécimen, l’image finale peut inclure un trou vide dans la zone centrale du spécimen. D’autres agents à côté de PTA peuvent être utilisés et différents agents ont des mérites différents ou des intérêts de caractéristiques de coloration.

Par conséquent, il est utile d’optimiser la région de coloration en fonction de votre expérience.