Name: Double imagerie de bioluminescence de la progression tumorale et de langiogenèse (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-08-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 56 s
Description: Découvrez l'imagerie de bioluminescence double pour suivre la progression tumorale et l'angiogenèse en temps réel chez la souris. Cette méthode utilise les luciférases Firefly et Renilla pour visualiser simultanément la croissance cancéreuse.

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Cette recherche a été appuyée par le National Key R-D Program of China (2017YFA0103200), la National Natural Science Foundation of China (81671734) et les principaux projets du Programme de soutien scientifique et technologique de Tianjin (18YFZCSY00010), les fonds de recherche fondamentale pour les Universités centrales (63191155). Nous reconnaissons les révisions de Gloria Nance, qui ont été utiles pour améliorer la qualité de notre manuscrit.

Les expériences doivent être conformes aux réglementations nationales et institutionnelles concernant l'utilisation des animaux à des fins de recherche. Les autorisations pour réaliser des expériences doivent être obtenues. Le traitement des animaux et les procédures expérimentales de l'étude adhèrent aux lignes directrices du Comité des soins et de l'utilisation des animaux de l'Université de Nankai qui sont conformes aux Lignes directrices pour les soins aux animaux approuvées par les National Institutes of Health (NIH).
1. LV-Rluc-RFP (RR) et LV-Rluc-RFP-HSV-ttk (RRT) emballage et production lentivirale
REMARQUE : Le pLV-RR porte les séquences génétiques de renilla luciferase (Rluc) et de protéine fluorescente rouge (RFP) sous le promoteur EF1MD, tandis que le pLV-RRT porte les séquences génétiques codant Rluc, RFP, et le virus de l'herpès simplex tronqué thymidine kinase (HSV-ttk) ( Figure 2).
<ol><li>Seed 1 x 106 de 293T cellules par puits dans une plaque de 6 puits et la culture pendant la nuit dans un incubateur humidifié avec 5% CO2 à 37 oC avec le milieu d'aigle modifié de Dulbecco (DMEM) contenant 10% de sérum bovin fœtal (FBS).</li>
	<li>Préparer la suspension liposome : mélanger 7,5 ll de liposome et 0,25 ml de milieu essentiel minimal (MEM) dans un tube de 1,5 ml après l'incubation pendant 5 min à température ambiante (RT) pour disperser les liposomes également.</li>
	<li>Préparer la solution DesNAs (DNAs-RR) : séparément, ajouter le vecteur pLV-RR et les plasmides d'aide à 0,25 ml de MEM dans un tube de 1,5 ml tel que décrit dans le tableau 1.</li>
	<li>Obtenir le composé liposome/DNAs-RR : ajoutez doucement la solution DNAs-RR dans la suspension liposome préparée goutte à goutte et incubez pendant 20 min à RT ainsi les liaisons d'ADN à la membrane lipidique.</li>
	<li>Remplacer le milieu des cellules 293T par 1 ml de DMEM contenant 10% de FBS et ajouter le composé liposome/DNAs-RR au milieu des cellules 293T doucement.</li>
	<li>Après avoir couve dans un incubateur humidifié avec 5 % de CO2 à 37 oC pendant 12 à 16 h, remplacez le composé liposome/DNAs-RR contenant le milieu des cellules 293T par 1 mL de DMEM contenant 10 % de FBS et 100 u/mL de pénicilline-streptomycine.</li>
	<li>Continuer à cultiver les cellules 293T dans l'incubateur humidifié pendant 48 h après la transfection. Ensuite, recueillir le supernatant des cellules 293T et centrifuger le milieu à 300 x g pendant 5 min pour granuler les cellules 293T. Transférer le supernatant contenant du lentivirus-RR (LV-RR) dans des tubes de stockage stériles de 1,5 ml de polypropylène et entreposer à -80 oC. REMARQUE : Une installation de niveau de biosécurité 2 (BSL-2) est nécessaire pour travailler avec le lentivirus recombinant.</li>
	<li>Répétez les étapes 1.1-1.7 et utilisez le vecteur pLV-RRT au lieu du vecteur pLV-RR à l'étape 1.3 pour obtenir le lentivirus-RRT (LV-RRT). Entreposer le LV-RRT à -80 oC. REMARQUE : Le stock lentiviral non purifié peut inhiber la croissance cellulaire dans certains cas. Le stock lentiviral peut avoir besoin d'être purifié. Les stocks de lentiviraux contenant des particules LV-RR ou LV-RRT doivent être divisés en tubes de 1,5 ml (1 ml par tube) pour le stockage afin d'éviter de multiples cycles de dégel libre.</li>
</ol>2. Transduction lentivirale LV-RR et LV-RRT pour l'expression génique dans les cellules 4T1
<ol><li>Seed 4T1 cellules dans une plaque de 6 puits (5 x 105 cellules / puits) et la culture avec Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 milieu contenant 10% FBS nuit dans un incubateur humidifié avec 5% CO2 à 37 oC.</li>
	<li>Retirez le milieu de la plaque de culture et remplacez-le par un RPMI 1640 moyen frais de 1 ml ainsi que 1 ml de bouillon lentiviral (LV-RR ou LV-RRT) à chaque puits. Ajouter 8 polybrenes g/mL et mélanger délicatement le milieu contenant des particules lentivirales en faisant monter et descendre. REMARQUE : Sachez que le milieu contient des particules lentivirales, qui pourraient transduire les cellules humaines.</li>
	<li>Solution de transduction de spin dans une centrifugeuse à 1 000 g pour 60 min à RT pour aider à augmenter l'efficacité de la transduction. Après centrifugation, la culture des cellules 4T1 pendant 4 à 12 h et la maintenance dans un incubateur humidifié avec 5 % de CO2 à 37 oC. REMARQUE : Pour certaines lignées cellulaires, le polybrene peut être toxique pour la culture à long terme. Par conséquent, le temps d'incubation pour transduire différentes cellules peut être modifiable. Vérifiez l'état de la cellule plusieurs fois pour trouver le temps d'incubation approprié.</li>
	<li>Rafraîchissez le milieu des cellules 4T1 transducées avec 2 mL de rpMI 1640 milieu contenant 10% FBS et 100 U/mL pénicilline-streptomycine pour enlever les particules lentivirales et le polybrene.</li>
</ol>3. Dépistage et identification des cellules 4T1 transduiseurs 4T1 par drogue
<ol><li>Sélectionnez les cellules cédées avec le moyen contenant le blasticidin (BSD) selon le gène de résistance BSD porté par LV-RR ou LV-RRT comme étapes suivantes décrites. REMARQUE : Alternativement, les cellules transductées qui sont RFP-positives pourraient être choisies par cytométrie de flux selon le gène de RP porté par LV-RR ou LV-RRT.</li>
	<li>48 h après transduction, passage des cellules 4T1 au rapport de 1:3 à 1:4 avec le milieu de sélection (RPMI 1640 milieu contenant 10% FBS, 100 U/mL pénicilline-streptomycine, et 5 'g/mL BSD). Changer de moyen tous les 2 ou 3 jours. REMARQUE : La concentration optimale de BSD peut varier d'une lignée cellulaire à l'autre. Par conséquent, une expérience pilote de la courbe de mise à mort devrait être effectuée pour déterminer la concentration optimale de BSD avant l'expérience initiale.</li>
	<li>7 jours de dépistage post-drogue, observez les cellules 4T1 transducées LV-RR (4T1-RR) et les cellules 4T1 transduisantes lvà-RRT (4T1-RRT) sous le microscope à contraste de phase inversé de fluorescence. Comptez le nombre de cellules DeP 4T1 et de toutes les cellules 4T1 dans trois champs de vision pour estimer le rapport RFP-positif, respectivement (figure 2). REMARQUE : Alternativement, le rapport RP-positif des cellules 4T1 transducées pourrait être identifié par cytométrie d'écoulement.</li>
	<li>Mesurer les signaux renilla des cellules 4T1-RR et 4T1-RRT en utilisant un système d'imagerie vivante pour détecter la relation linéaire entre les nombres cellulaires et les signaux de renilla (figure 3).</li>
	<li>Élargir les cellules 4T1-RR et 4T1-RRT d'alendur le BSD avec un milieu de sélection à des rapports fractionnés entre 1:3 et 1:4 et entreposez les stocks de lignée cellulaire dans de l'azote liquide.</li>
</ol>4. Souris Vegfr2-Fluc-KI et modèle de souris tumeur-portant
REMARQUE : Les souris transgéniques Vegfr2-Fluc-KI, âgées de 6 à 8 semaines et femelles, sont utilisées dans cette expérience pour surveiller l'angiogenèse in vivo non invasive par BLI.
<ol><li>Culture 4T1-RR cellules et 4T1-RRT cellules dans des plats Petri 60 mm dans un incubateur humidifié avec 5% co2 à 37 oC, respectivement. Lorsque les cellules sont à 80% de confluence, retirer le milieu et rincer avec du phosphate tamponné saline (PBS).</li>
	<li>Retirez le PBS et ajoutez 2 ml supplémentaires de 0,25 % trypsine-0,53 mM edTA solution respectivement. Conserver le plat à RT (ou à 37 oC) jusqu'à ce que les cellules se détachent.</li>
	<li>Ajouter 5 à 10 ml de milieu frais contenant 10 % de FBS, puis aspirer et distribuer des cellules pour resuspendre les cellules 4T1-RR et 4T1-RRT dans des tubes centrifugeurs de 15 ml, respectivement. Comptez deux types de cellules 4T1 à l'aide d'une chambre de comptage et préparez les suspensions cellulaires à une concentration de 1 x 106 pour 100 L dans le milieu RPMI 1640.</li>
	<li>Anesthésiez les souris Vegfr2-Fluc-KI avec 1% à 3% d'isoflurane en oxygène à 100% à la chambre d'induction d'anesthésie avec un débit de 1 L/min. Surveillez la réponse de pincement des orteils de la souris pour confirmer l'état de l'anesthésie. Ensuite, appliquez l'onudation ophtalmique sur les yeux de la souris pour prévenir la déshydratation.</li>
	<li>Retirer la souris de la chambre et la placer dans le cône de nez. Enlevez entièrement les cheveux de l'épaule de la souris en utilisant le shaver électrique et la crème d'épilation, qui pourrait fournir une bonne vue du champ chirurgical et éviter de bloquer les signaux BLI dans les expériences de suivi.</li>
	<li>Injecter sous-cutanée les cellules 4T1-RR (1 x 106 cellules à un volume total de 100 l) et les cellules 4T1-RRT (1 x 106 cellules à un volume total de 100 l) dans les épaules gauches et droites de chaque souris, respectivement (enregistrement comme jour 0). Placez les souris dans la zone de récupération avec un support thermique jusqu'à ce qu'elles soient complètement récupérées.</li>
	<li>Après l'implantation des cellules 4T1-RR et 4T1-RRT, touchez les masses tumorales pour vérifier que les souris portent une tumeur tous les jours (Figure S1). Au jour 7 post-implantation, l'intrapéritoronnel injecte 50 mg/kg de ganciclovir (GCV) aux souris porteuses de tumeurs deux fois par jour jusqu'à la fin de l'expérience. REMARQUE : Avant cette expérience, le cytotoxique de GCV sur les cellules 4T1-RRT doit être détecté. L'efficacité de mise à mort de GCV pourrait être évaluée par l'évaluation de comptage cellulaire avec une concentration différente de GCV (Figure S2).</li>
	<li>Le jour 0, 3, 7, 14 et 21 après l'implantation 4T1, surveillez la croissance tumorale et l'angiogenèse des souris porteuses de tumeurs et évaluez par l'imagerie de Rluc et de Fluc (figure4).</li>
</ol>5. Imagerie double bioluminescence de la tumeur (Rluc) et de l'angiogenèse (Fluc)
<ol><li>Ouvrez le système d'imagerie vivante, initialisez le logiciel d'imagerie vivante, puis initialisez le système. REMARQUE : L'initialisation du système prendra quelques minutes pour refroidir la caméra couplée à la charge (CCD) à -90 oC avant de pouvoir commencer l'imagerie. La température deviendra verte lorsque la caméra CCD sera refroidie.</li>
	<li>Utilisez les paramètres de la caméra suivants : Vérifiez la Luminescence et la Photographie. Vérifiez la pose. Paramètres de luminescence: Temps d'exposition définit AUTO dans des conditions normales. Binning ensembles 8. F/Stop s'installe à 1. Filtre d'émission ouvre. Paramètres de la photographie: Binning ensembles à moyen. F/Stop s'installe 8. Paramètres du système IVIS : Champ de vision : vue de souris C-1, vue de souris D-5. La hauteur du sujet fixe 1,5 cm.</li>
	<li>Peser et enregistrer les souris et calculer le volume de coelenterazine (CTZ; 2,5 mg/kg) et De-luciferin (150 mg/kg) nécessaire.</li>
	<li>Anesthésiez la souris tumorale de 1% à 3% d'isoflurane dans 100% d'oxygène à la chambre d'induction d'anesthésie avec un débit de 1 L/min. Surveillez la réponse de pincement d'orteil de la souris pour confirmer l'état de l'anesthésie. Ensuite, distribuez une goutte d'onduleur lubrifiant sur les deux yeux pour éviter les dommages cornéens.</li>
	<li>Injecter 2,5 mg de CTZ (3,33 mg/mL) par kilogramme de poids corporel dans le rétrobulbar de la souris (p. ex., pour une souris de 20 g, injecter 15 oL pour délivrer 50 g de CTZ) à l'aide d'une aiguille à seringue sinistique.</li>
	<li>Déplacez la souris porteuse de tumeurs dans la chambre de la caméra avec son nez dans le cône d'anesthésie doucement et acquérir plusieurs photos de la souris dorsal immédiatement pour obtenir les signaux Rluc de cellules 4T1 jusqu'à ce que les signaux BLI s'estompent. REMARQUE: La demi-vie de CTZ est très courte et les signaux de Rluc chutent précipitamment de 30 s. Pour s'assurer que tout signal résiduel de Rluc s'est dissipé et que l'intervalle entre l'imagerie Rluc et Fluc devrait être supérieur à 10 min.</li>
	<li>Injecter par voie intrapéritone 150 mg/kg de D-luciferin (30 mg/mL) à l'aide d'une aiguille à seringues à insuline (p. ex., pour une souris de 20 g, injectez 100 l pour délivrer 3 mg de D-luciferin). Gardez la souris à RT pendant 10 minutes avant l'imagerie Fluc.</li>
	<li>Déplacez cette souris dans la chambre de caméra avec son nez dans le cône d'anesthésie à nouveau et acquérir plusieurs photos de la souris dorsal pour obtenir les signaux Fluc de l'angiogenèse. REMARQUE : Le moniteur cinétique Fluc doit être effectué pour chaque souris jusqu'à ce que les signaux atteignent le maximum, puis s'estompent.</li>
	<li>Répétez les étapes des procédures 5.4-5.8 pour chaque souris.</li>
	<li>Après l'imagerie, maintenir les souris dans un environnement chaud jusqu'à ce que les animaux se réveillent.</li>
	<li>Au moment désiré (jour 3, 7, 14 et 21), répétez au-dessus des procédures (étape 5.3-5.10) pour détecter la progression de tumeur et l'angiogenèse de tumeur au fil du temps.</li>
	<li>Analyser les données de signaux De Rluc et Fluc pour étudier la relation entre la croissance tumorale et l'angiogenèse dans la progression de tumeur. REMARQUE : Les régions d'intérêt (ROI) qui couvrent le site de signal BLI sont utilisées pour analyser les données. Mesurer l'éclat total (Photons) du retour sur investissement dans l'unité de Photons/secondes/cm2/steradian (p/s/cm 2/sr) pour chaque point de temps.</li>
	<li>Analyser les signaux Rluc et Fluc du retour sur investissement à l'aide d'un logiciel graphique (Figure 4).</li>
</ol>

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</ol>

Les auteurs n'ont rien à révéler.

Dans ce protocole, une approche double BLI non-invasive est décrite pour surveiller le développement de tumeur et l'angiogenèse. Le système de journaliste BLI est d'abord développé, contenant le gène de suicide DeSV-ttk/GCV pour suivre la progression et la régression de tumeur in vivo par l'imagerie de Rluc. Pendant ce temps, l'angiogenèse tumorale est évaluée à l'aide de souris Vegfr2-Fluc-KI via l'imagerie Fluc. Ce modèle de souris tumeur-portant est capable de fournir une plate-forme pratique pour le développement con...

L'angiogenèse est un processus essentiel dans la progression du cancer de petits néoplasmes localisés à de plus grandes tumeurs potentiellement métastatiques1,2. La corrélation entre la croissance tumorale et l'angiogenèse devient l'un des points d'emphase dans le domaine de la recherche en oncologie. Cependant, les méthodes traditionnelles de mesure des changements morphologiques ne parviennent pas à surveiller la progression de tumeur et l'angiogenèse simultanément chez les animaux vivants en utilisant une approche visualisée.
L'imagerie de bioluminescence (BLI) des cellules de tumeur est une méthode expérimentale particulièrement appropriée pour surveiller la croissance de tumeur en raison de sa non-invasiveness, sensibilité, et spécificité3,4,5,6 . La technologie BLI est basée sur le principe que la luciferase peut catalyser l'oxydation d'un substrat spécifique tout en émettant la bioluminescence. La luciférase exprimée dans les cellules tumorales implantées réagit avec le substrat injecté, qui peut être détecté par un système d'imagerie vivant, et les signaux reflètent indirectement les changements dans le nombre de cellules ou la localisation cellulaire in vivo6,7.
À l'exception de la croissance tumorale, l'angiogenèse tumorale (l'étape critique de la progression du cancer) peut également être visualisée par la technologie BLI à l'aide de souris transgéniques Vegfr2-Fluc-KI8,9,10. Le facteur de croissance endothéliale vasculaire (Vegf) récepteur 2 (Vegfr2), un type de récepteur Vegf, est principalement exprimé dans les cellules endothéliales vasculaires des souris adultes11. Chez les souris transgéniques Vegfr2-Fluc-KI, la séquence d'ADN de la luciferase Firefly (Fluc) est frappée dans le premier exon de la séquence endogène Vegfr2. En conséquence, le Fluc est exprimé (qui apparaît sous forme de signaux BLI) d'une manière identique au niveau d'angiogenèse chez la souris. Pour se développer au-delà de quelques millimètres de taille, la tumeur recrute de nouvelles vascularisations à partir de vaisseaux sanguins existants, qui expriment fortement le Vegfr2 déclenché par des facteurs de croissance des cellules tumorales1. Ceci ouvre la possibilité d'utiliser des souris transgéniques vegfr2-Fluc-KI pour surveiller non-invasivement l'angiogenèse de tumeur par BLI.
Dans ce protocole, un modèle de souris tumeur-portant est établi pour surveiller la progression de tumeur et l'angiogenèse dans une souris simple par le luciferase de Luciferase de Feu (Fluc) et la luciferase de Renilla (Rluc) image, respectivement (figure 1). Une lignée cellulaire 4T1 (4T1-RR) est créée qui exprime de façon stable le Rluc et la protéine fluorescente rouge (RP) pour retracer la croissance cellulaire par imagerie Rluc. Pour étudier plus avant les changements dynamiques de l'angiogenèse dans la progression et la régression de la tumeur, une autre lignée cellulaire 4T1 (4T1-RRT) est créée qui exprime le virus de l'herpès simplex de gène de suicide tronqué thymidine kinase (HSV-ttk), Rluc, et RFP. Par administration de ganciclovir (GCV), les cellules exprimant hSV-ttk sont sélectivement ablated. Basé sur ces lignées cellulaires, un modèle tumoral-portant dans les souris de Vegfr2-Fluc-KI est construit qui sert de modèle expérimental reliant la progression de tumeur et l'angiogenèse de tumeur in vivo.

<table><tbody><tr><td>0,25 % Trypsine-0,53 mM EDTA</td><td>Gibco 25200072</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tubes de 1,5 mL</td><td>Axygen Scientific</td><td>MCT-105-C-S</td><td></td></tr><tr><td>Tubes de 15 mL</td><td>Corning Glass Works</td><td>601052-50</td><td></td></tr><tr><td>293T</td><td>ATCC</td><td>CRL-3216</td><td></td></tr><tr><td>4T1</td><td>ATCC</td><td>CRL-2539</td><td></td></tr><tr><td>Plat de 60 mm</td><td>Corning Glass Works</td><td>430166</td><td></td></tr><tr><td>Plaque à 6 puits</td><td>Corning Glass Works</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>Enceinte de biosécurité</td><td>Shanghai Lishen Scientific</td><td>Hfsafe-900LC</td><td></td></tr><tr><td>Chlorhydrate de blasticidine S (BSD)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>15205</td><td></td></tr><tr><td>Kit de comptage de cellules-8</td><td>MedChem Express</td><td>HY-K0301</td><td></td></tr><tr><td>CO2 Incubateur tégulé</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>4111</td><td></td></tr><tr><td>Coelenterazine (CTZ)</td><td>Technologie NanoLight</td><td>479474</td><td></td></tr><tr><td>D-luciférine Sel de potassium</td><td>Pied à coulisse Sciences de la vie</td><td>119222</td><td></td></tr><tr><td>DMEM Medium</td><td>Gibco</td><td>C11995500BT</td><td></td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin (FBS)</td><td>BIOIND</td><td>04-001-1A</td><td></td></tr><tr><td>Microscope à fluorescence</td><td>Nikon</td><td>Ti-E/U/S</td><td></td></tr><tr><td>Ganciclovir (GCV)</td><td>Logiciel graphique Sigma-Aldrich</td><td>Y0001129</td><td></td></tr><tr><td>Logiciel</td><td>GraphPad</td><td>Graphpad Graphpad Prism 6</td><td></td></tr><tr><td>Aiguilles pour seringue à insuline</td><td>Becton Dickinson</td><td>328421</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Baxter</td><td>691477H</td><td></td></tr><tr><td>Système d’emballage lentiviral</td><td>Biosettia</td><td>cDNA-pLV03</td><td></td></tr><tr><td>Liposome</td><td>Invitrogen</td><td></td><td></td>11668019</tr><tr><td>Logiciel d’imagerie vivante</td><td>Pied à coulisse Sciences de la vie</td><td>Logiciel d’imagerie vivante 4.2</td><td></td></tr><tr><td>Système d’imagerie vivante</td><td>Pied à coulisse Sciences de la vie</td><td>IVIS Lumina II</td><td></td></tr><tr><td>MEM Medium</td><td>Invitrogen</td><td>31985-070</td><td></td></tr><tr><td>Pénicilline-streptomycine</td><td>Invitrogen</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline (PBS)</td><td>Corning Verrerie</td><td>R21031399</td><td></td></tr><tr><td>Polybrène</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H9268-1G</td><td></td></tr><tr><td>RPMI1640 Medium</td><td>Gibco</td><td>C11875500BT</td><td></td></tr><tr><td>SORVALL ST 16R Centrifugeuse</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Thermo Sorvall ST 16 ST16R</td><td></td></tr><tr><td>Réfrigérateur ultra-basse température</td><td>Haier</td><td>DW-86L338</td><td></td></tr><tr><td>XGI-8 Système d’anesthésie gazeuse</td><td>XENOGEN Société</td><td>7293</td><td></td></tr></tbody></table>

double imagerie de bioluminescence de la progression tumorale et de l'angiogenèse

Dual Bioluminescence Imaging of Tumor Progression and Angiogenesis

L'angiogenèse, comme un processus crucial de progression tumorale, est devenue un point chaud de recherche et la cible de la thérapie anti-tumorale. Cependant, il n'y a aucun modèle fiable pour tracer la progression et l'angiogenèse de tumeur simultanément d'une manière visuelle et sensible. L'imagerie par bioluminescence montre sa supériorité unique dans l'imagerie vivante en raison de ses avantages de sensibilité élevée, de forte spécificité et de mesure précise. Présenté ici est un protocole pour établir un modèle de souris tumeur-portant en injectant une renilla luciferase-étiquetée ligne de cellules de cancer du sein de monourine 4T1 dans la souris transgénique avec l'expression de luciferase de Firefly angiogenèse-induite. Ce modèle de souris fournit un outil valable pour surveiller simultanément la progression de tumeur et l'angiogenèse en temps réel par la double imagerie de bioluminescence dans une souris simple. Ce modèle peut être largement appliqué dans le criblage de drogue antitumoral et la recherche d'oncologie.

Dans cette expérience, un modèle de souris de cancer du sein a été établi utilisant des cellules 4T1 pour étudier la relation entre la croissance de tumeur et l'angiogenèse de tumeur (figure 1). Tout d'abord, deux lentivirus ont été emballés, qui portaient des séquences génétiques exprimant Rluc/RFP (LV-RR) et Rluc/RFP/HSV-ttk (LV-RRT), respectivement, comme indiqué précédemment7. Ensuite, deux lignées cellulaires 4T1 différentes, nomm...

Ce protocole décrit l'établissement d'un modèle de souris tumeur-portant pour surveiller la progression de tumeur et l'angiogenèse en temps réel par la formation image double de bioluminescence.

Double imagerie de bioluminescence de la progression tumorale et de l'angiogenèse

Angiogenesis, as a crucial process of tumor progression, has become a research hotspot and target of anti-tumor therapy. However, there is no reliable ...

L’angiogenèse joue un rôle important dans la métastase et la progression tumorales. Dans ce protocole, nous utiliserons la méthode d’imagerie de bioluminescence double pour surveiller la progression dynamique de tumeur et l’angiogenèse dans un modèle de souris du cancer du sein. Dans ce modèle, nous pouvons suivre la croissance de tumeur et l’angiogenèse simultanément dans la souris simple par luciferase de Firefly et imagerie de luciferase de Renilla, respectivement.Ce modèle peut être largement appliqué dans le dépistage des médicaments antitumorals et la recherche en oncologie. Ce modèle de double bioluminescence peut être utilisé pour suivre la progression tumorale et la régression et pour détecter les processus moléculaires liés aux tumeurs en réponse aux stratégies thérapeutiques. L’angiogenèse est un processus crucial de progression tumorale.Par conséquent, la surveillance de la progression tumorale et de l’angiogenèse d’une manière visuelle et sensible est nécessaire pour développer des traitements tumoraux efficaces. Les procédures seront démontrées par Kaiyue Zhang, Chen Wang et Shang Chen, étudiants de notre laboratoire. Pour l’emballage du lentivirus et les semences de

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Cellules mammaires tumorales exprimant la luciférase sont implantés sous la peau chez la souris et visualisées à l'aide d'imagerie optique pour surveiller la croissance des tumeurs et le développement de façon non invasive dans une étude longitudinale.

In vivo Bioluminescent imagerie des tumeurs mammaires qui utilisent des fréquences IVIS

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Établir intracrânienne xénogreffes tumorales du cerveau avec analyse ultérieure de la croissance tumorale et la réponse à la thérapie à l&#39;aide d&#39;imagerie par bioluminescence

Un modèle expérimental chez la souris des métastases osseuses a été établie suivant la livraison de la luciférase intracardiaque de cellules exprimant la tumeur mammaire. Développement de la tumeur et a entraîné des lésions ostéolytiques ont été suivis longitudinalement avec la bioluminescence et la micro imagerie CT.

Surveillance des métastases tumorales et les lésions ostéolytiques avec bioluminescence et Micro CT Imaging

L'imagerie par bioluminescence des inducible factor-1α activité hypoxie est appliqué pour surveiller le développement intracrânienne hypoxie tumorale dans un modèle de cancer du sein métastatique cerveau de souris.

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Ici, nous décrivons les méthodes pour construire, visualiser et quantifier les réactions bioluminescentes à la fois luciole et la luciférase Renilla enzymes exprimées en cellules cancéreuses mammaires métastatiques au cours de leur croissance et les...

In vivo double Substrat Bioluminescent Imaging

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Implantation intracrânienne avec 3D ultérieures In Vivo Bioluminescent imagerie des gliomes murin

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Source:Marina Arantes Radicchi1, Victor Carlos Mello1,Victória Paz Machado1, Márcia Cristina Oliveira da Rocha1, Jaqueline Vaz de Oliveira1, Luana Cristina Camargo1,2, Luís Alexandre Muehlmann1, Ricardo Bentes Azevedo1, Sônia Nair Bao1, João Paulo Figueiró Longo11Institut des sciences biologiques, Université de Brasília, 2Département des processus psychologiques fondamentaux, Institut de psychologie, Université de BrasíliaCette vidéo montre la procédure de suivi de la progression tumorale in...

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Source : Ciraku, L., et. al. Un modèle ex vivo de tranche de cerveau pour étudier et cibler la croissance tumorale métastatique du cancer du sein. J. vis. exp. (2021). Cette vidéo démontre l’imagerie de cellules tumorales exprimant la luciférase dans une tranche de cerveau de souris organotypique. La luciférine est ajoutée au milieu et la plaque est placée à l’intérieur de la chambre du système d’imagerie in vivo. Les paramètres de capture d’image sont ajustés et la forme et la taille de la...

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Une meilleure compréhension de la biologie du cancer du pancréas est critique nécessaire pour permettre le développement de meilleures options thérapeutiques pour traiter le cancer du pancréas. Pour répondre à ce besoin, nous démontrons un modèle orthotopique de cancer du pancréas qui permet une surveillance non invasive de la progression du cancer à...

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l'imagerie par bioluminescence est un outil bien connu pour la localisation de tumeurs et les métastases, mais la quantification de ces images nécessite souvent des calculs complexes et des instruments particuliers. Nous décrivons la méthode luminoscore-utilisation facile, en fonction des conditions d'acquisition précises, ne nécessitant pas de calculs, et en permettant la charge tumorale et la réponse au traitement à surveiller dans les modèles de souris.

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Découvrez l'imagerie de bioluminescence double pour suivre la progression tumorale et l'angiogenèse en temps réel chez la souris. Cette méthode utilise les luciférases Firefly et Renilla pour visualiser simultanément la croissance cancéreuse.

Double imagerie de bioluminescence de la progression tumorale et de l'angiogenèse

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