Fluorescence Angiography for Evaluation of Aneurysm Perfusion and Parent Artery Patency in Rat and Rabbit Aneurysm Models Fluorescence Angiography for Evaluation of Aneurysm Perfusion and Parent Artery Patency in Rat and Rabbit Aneurysm Models Fluorescence Anorescence Angiography for Evaluation of Aneurysm Perfusion and Parent Artery Patency in Rat and Rabbit Aneurysm
24 juillet 2019
Nous présentons un protocole pour évaluer efficacement la perfusion d'anévrisme et la patency de navire de l'aneurysm latéral chez les rats et les lapins, utilisant l'angiographie vidéo fluorescence fluorécéine à base de fluorénémine (FVA). Avec une valeur prédictive positive de 92,6 %, il s'agit d'une méthode simple mais très efficace et économique, sans équipement spécial requis.
Cette méthode est une technique fiable et facile pour visualiser le flux sanguin en temps réel dans les anévrismes et les vaisseaux et peut être utilisée dans différents modèles animaux. Le principal avantage de cette technique est qu’elle facilite la visualisation de la circulation sanguine pendant la chirurgie sans nécessiter d’appareils coûteux ou de chirurgie extensive. Avant de commencer la procédure, utilisez du ruban noir pour fixer un filtre bandpass vert pour agir comme filtre d’excitation sur une lampe de poche.
Et vérifiez que la lampe de poche n’émet que de la lumière bleue. Équipez la caméra d’un filtre à bande vert pour fonctionner comme un filtre à lumière d’émission. Seul le feu vert devrait maintenant pouvoir passer.
Ensuite, désinfectez l’espace de travail avec une solution désinfectante et couvrez la table de rideaux stériles pour éviter la contamination. Pour effectuer l’angiographie vidéo de fluorescéine ou FVA dans un lapin confirment que l’animal anesthésié ne répond pas au stimulus de douleur avant de positionner le lapin dans la position de supine. Raser le cou autour du muscle sternocleidomastoic.
Concentrez la caméra sur l’artère disséquée et utilisez du papier d’aluminium pour couvrir une seringue de cinq millilitres contenant 100 milligrammes/millilitre de fluorescéine de sodium. Éteignez les lumières autant que possible et injectez 0,3 millilitres/kilogramme de fluorescéine de sodium par voie intraveineuse dans le port d’injection du cathéter. Ensuite, rincer la seringue avec 0,5 millilitres de solution saline pour s’assurer que tout le colorant a été injecté.
Et illuminez immédiatement le champ chirurgical avec la lampe de poche modifiée. Dès que la lumière est allumée commencer à filmer avec la caméra modifiée. Le flux sanguin doit être visible dans les quelques secondes qui ont après l’injection.
Pour l’analyse macroscopique du navire après angiographie réséquer les anévrismes et le complexe d’artère parentale chez les animaux de suivi, ou effectuer la confirmation visuelle du flux en observant le remplissage de l’anévrisme et / ou de contournement après l’enlèvement des clips temporaires. Dans cette étude représentative, fva a pu être exécuté dans huit lapins sur 10. Des 16 anévrismes identifiés chez les huit lapins, deux anévrismes ont démontré une perfusion persistante de l’artère mère, tandis que fva a identifié cinq cas de perfusion résiduelle.
14 aneurysms de lapin n’ont montré aucune perfusion résiduelle macroscopically, alors que 11 ont été plus tard détectés utilisant FVA. La perfusion résiduelle a été observée macroscopiquement chez 23 des 48 rats, et les 25 autres rats n’ont montré aucun signe macroscopique de perfusion résiduelle. 22 des 23 anévrismes sans perfusion macroscopique ont été alors confirmés utilisant FVA.
Dans l’ensemble, 25 des 27 cas combinés de lapin et de rat ont pu être confirmés, ce qui a donné lieu à une valeur prédictive positive de 92,6 %, à un taux de sensibilité de 100 % et à une spécificité de 94,1 %, les choses les plus importantes lors de la tentative de cette procédure sont de disséquer correctement les vaisseaux et de travailler dans une pièce sombre lors de l’administration et de la visualisation de la fluorescéine. Cette procédure peut être utilisée dans n’importe quel modèle animal pour évaluer le flux sanguin dans n’importe quel vaisseau visible.
Consultez la transcription complète et accédez à des milliers de vidéos scientifiques
Aperçu
Cet article présente un protocole d'évaluation de la perfusion de l'anévrisme et de la perméabilité vasculaire à l'aide de l'angiographie vidéo fluorescente (FVA) basée sur la fluorescéine chez des modèles animaux (rats et lapins). La méthode se distingue par une valeur prédictive positive élevée de 92,6 %, et sa simplicité ainsi que son faible coût sont soulignées, ne nécessitant aucun équipement particulier.
Composantes clés de l'étude
Domaine scientifique
- Neurosciences
- Biologie vasculaire
- Imagerie par fluorescence
Contexte
- Les anévrismes posent des défis cliniques importants en matière d'évaluation de la perfusion.
- Les méthodes existantes peuvent nécessiter des équipements coûteux et des interventions chirurgicales importantes.
- L'angiographie vidéo à la fluorescéine offre une solution pour la visualisation en temps réel.
- La polyvalence de la technique dans différents modèles animaux est remarquable.
Objectif de l'étude
- Développer une méthode fiable pour visualiser l'écoulement sanguin dans les anévrismes.
- Évaluer la perméabilité des vaisseaux sans nécessiter d'équipement coûteux.
- Fournir un protocole simple pouvant être largement mis en œuvre dans la recherche.
Méthodes utilisées
- La vidéangioGRAPHIE par fluorescence (FVA) était la plateforme principale utilisée.
- Les animaux utilisés comprenaient des rats et des lapins, en évaluant spécifiquement le débit sanguin pendant et après la chirurgie.
- Aucun flux de travail multiomique n'a été mentionné.
- La procédure impliquait l'anesthésie des animaux, la préparation du site chirurgical, l'injection de fluorescéine sodique et l'utilisation d'une configuration modifiée de caméra.
- Les étapes clés comprenaient l'assurance d'un éclairage minimal pendant la visualisation et un chronométrage précis de la capture d'images après l'injection.
Résultats principaux
- La méthode a permis de visualiser avec succès le flux sanguin chez 8 lapins sur 10 et d'identifier des cas de perfusion résiduelle significative.
- Sur 16 anévrismes évalués, 11 étaient détectables par l'AVF mais n'avaient pas été observés macroscopiquement.
- Chez les rats, une perfusion résiduelle a été confirmée dans 22 des 23 anévrismes ne présentant aucun signe macroscopique visible.
- Dans l'ensemble, une combinaison de 25 cas sur 27 au total a montré une confirmation de la perfusion par l'AVF.
Conclusions
- Cette procédure démontre une capacité élevée à évaluer efficacement l'écoulement sanguin dans les anévrismes.
- L'application de l'AVF facilite la visualisation chirurgicale en temps réel et l'évaluation de l'état de perfusion.
- Les implications s'étendent à une meilleure compréhension et à des techniques d'évaluation améliorées des affections vasculaires en milieu de recherche.
Questions fréquemment posées
Pertinence sectorielle exécutive
L'angiographie vidéo par fluorescence (FVA) fournit une méthode peu coûteuse et sans équipement pour l'évaluation en temps réel de la perfusion de l'anévrisme et de la perméabilité de l'artère porteuse dans les modèles précliniques. Sa haute sensibilité et sa spécificité élevée permettent une détection fiable de la perfusion résiduelle, facilitant ainsi l'identification précoce d'une occlusion incomplète dans les modèles d'anévrismes. Cette capacité contribue à l'analyse mécanistique et à la réduction des risques liés aux interventions vasculaires en offrant un indicateur quantitatif et reproductible pour l'évaluation préclinique de l'efficacité des dispositifs et des techniques chirurgicales.
Applications stratégiques en recherche et développement en biopharmaceutique
Découverte précoce et validation de cibles
- Valeur scientifique : Permet l'interrogation d'hypothèses thérapeutiques en visualisant la dynamique de l'écoulement sanguin dans des modèles d'anévrisme.
- Valeur opérationnelle : Soutient la validation fonctionnelle des cibles grâce à une évaluation directe et en temps réel de la perfusion, sans recourir à un équipement d'imagerie coûteux.
Développement de criblages et de tests
- Valeur scientifique : Fournit des résultats quantitatifs de perfusion binaires (présente/absente) qui peuvent être standardisés entre les études.
- Valeur opérationnelle : Facilite la préparation du test grâce à une injection simple de fluorescéine et un dispositif modifié composé d'une lampe de poche et d'un appareil photo, favorisant ainsi la reproductibilité.
Recherche translationnelle et préclinique
- Valeur scientifique : Relie la découverte à la validation préclinique en confirmant l'occlusion de l'anévrisme et l'intégrité de l'artère porteuse chez le rat et le lapin.
- Valeur opérationnelle : Fournit une métrique de perfusion transposable qui s'aligne sur les critères d'évaluation cliniques du traitement des anévrismes.
Intégration des pipelines et des flux de travail
La FVA s'inscrit dans le continuum de découverte allant de la validation précoce du modèle à l'évaluation préclinique, en offrant une mesure basée sur la perfusion qui éclaire les décisions de poursuite ou d'abandon avant l'optimisation du candidat médicament.
- Biologie de la découverte : Soutient la vérification d'hypothèses en révélant une perfusion résiduelle pouvant indiquer un échec du traitement dans les modèles d'anévrisme.
- Dépistage : Permet une évaluation standardisée et reproductible de la perméabilité vasculaire chez plusieurs animaux et à différents points temporels.
- Analyse : Génère des résultats clairs de perfusion (macroscopiques et confirmés par angiographie par fluorescence des vaisseaux) permettant la comparaison entre les groupes témoins et les groupes d'intervention.
- Recherche translationnelle : Établit un lien entre les données précliniques de perfusion et leur pertinence clinique en validant l'occlusion dans des modèles d'anévrisme anatomiquement pertinents.
- Réutilisation institutionnelle : Représente une technique indépendante de plateforme et peu contraignante, applicable à divers programmes de recherche vasculaire.
Impact opérationnel et organisationnel
- Valeur scientifique : Accroît la confiance prédictive des modèles d'anévrisme en détectant la perfusion non visible à l'inspection macroscopique.
- Valeur opérationnelle : Nécessite uniquement du fluorescéine sodique, une lampe de poche et des filtres pour appareil photo, permettant une utilisation à faible coût et haut débit.
- Valeur stratégique : Réduit le risque biologique dans les programmes précliniques en améliorant la précision de l'évaluation de l'occlusion.
- Impact sur le portefeuille : Favorise la priorisation ajustée au risque des interventions sur anévrisme selon des résultats de perfusion validés.
Considérations relatives à la mise en œuvre
- Nécessite une expertise en dissection vasculaire microchirurgicale et en manipulation de modèles d'anévrisme.
- Exige un environnement assombri et une lampe de poche modifiée équipée de filtres d'excitation bleue et d'émission verte.
- Implique une standardisation de la dose de fluorescéine (0,3 mL/kg) et un rinçage au sérum salé pour un signal constant.
- Suppose des adaptations selon la taille des vaisseaux et l'anatomie propre à chaque espèce.
- Est limité aux vaisseaux superficiels ou accessibles en raison de la dépendance à la pénétration de la lumière externe.
