Méthode Ex Vivo pour évaluer la motilité spontanée de la mouse Reproductive Tract et un algorithme de suivi des mouvements uterus basé sur MATLAB pour l'analyse des données

Notre protocole est significatif parce qu’il fournit la première méthode quantitative ex vivo pour évaluer la motilité spontanée d’un utérus intact. Cette nouvelle approche offre une alternative facile et moins coûteuse pour tester le potentiel relaxant des remèdes naturels dans les composés synthétiques. Un avantage majeur de cette technique est que toutes les interactions cellulaires intra-utérine restent intactes tout au long de l’expérience.

La sur contractilité de l’utérus est associée à la dysménorrhée, pour laquelle les relaxants utérins peuvent être utiles pour le traitement. Cette méthode fournit un moyen facile de tester de nouveaux relaxants. Après avoir confirmé le stade du cycle estreux, placez la souris dans la position supine, et écartez les extrémités pour exposer la région pelvienne abdominale.

Mouiller l’abdomen avec 70% d’éthanol, et utiliser des forceps pour soulever soigneusement la peau supérieure au clitoris. Faire de petites incisions transversales sur les aspects latéraux de la région abdominale inférieure jusqu’aux extrémités supérieures pour exposer le péritoine. Couper soigneusement à travers le péritoine pour exposer le tractus gastro-intestinal sans endommager les cornes utérine, et utiliser des forceps pour enlever le fascia et le tissu adipeux couvrant le tractus gastro-intestinal.

Enlevez le dudénodum, le jejunum, l’iléum, le cecum et le côlon ascendant et transversaux. Localiser la vessie urinaire pour localiser le vagin qui se trouve directement sous la vessie urinaire. Localiser la symphyse pubienne au confluent des os pubiens, caudal à la vessie, et utiliser des ciseaux pour faire soigneusement une incision sur les côtés latéraux de la symphyse pubienne à travers le tissu fibrocartilaginous interpubique pour accéder et de fournir une voie pour l’extraction vaginale.

Couper à travers le périnée situé entre l’anus et la partie inférieure de la vulve, et utiliser des forceps pour soulever le vagin pour permettre une excision lente du rectum. Identifiez les deux cornes utérine qui bifurquent dans une fourchette rostrally au vagin et localisez un oviducte et un ovaire alambiqués à l’extrémité de chaque corne. L’identification correcte des cornes utérine est essentielle à la procédure pour s’assurer que les tissus ne sont pas endommagés.

Utilisez de petits ciseaux dissectants pour enlever tous les ligaments qui se connectent aux cornes, aux oviductes et aux ovaires dans la cavité abdominale et pour enlever le vagin, l’utérus, les oviductes et les ovaires. Transférer l’ensemble de l’appareil reproducteur isolé dans une boîte de Pétri de 100 millimètres contenant 10 millilitres de PBS de Dulbecco. Utilisez des forceps et des ciseaux chirurgicaux pour enlever tout tissu conjonctif et adipeux entourant les cornes utérine et le vagin ainsi que toute fourrure dans la région pubienne qui pourrait nuire à la qualité de l’image.

Retirer le ligament large pour permettre la motilité des cornes utérine et laver le tissu deux fois avec pbs frais Dulbecco par lavage avant de transférer l’appareil reproducteur isolé dans une boîte de Pétri de 35 millimètres contenant trois millilitres de solution krebs oxygénée. Pour l’imagerie spontanée par motilité, placez la boîte de Pétri sur une surface noire à température ambiante et prévoyez de 15 à 30 minutes pour que les contractions spontanées commencent. Lorsque le mouvement peut être observé, enregistrez la motilité utérine spontanée pendant 10 minutes à partir d’un plan axial à l’aide de tout type d’équipement vidéo numérique.

Ensuite, transférez la préparation dans une boîte de Pétri contenant du tampon Krebs oxygéné complété par le composé d’essai et enregistrez la motilité utérine spontanée pendant 10 minutes supplémentaires de la même manière. À la fin de la période d’enregistrement, laver l’ensemble de l’appareil reproducteur en 10 millilitres du PBS de Dulbecco dans une boîte de Pétri de 100 millimètres et transférer l’échantillon dans une nouvelle boîte de Pétri de tampon Krebs fraîchement oxygéné pour évaluer la réversibilité du traitement. Enregistrez la motilité utérine spontanée pendant environ 10 minutes de la même manière que pour les deux derniers enregistrements.

Ensuite, transférez la préparation dans une autre boîte de Pétri de 35 millimètres remplie de tampon Krebs oxygéné complété par le véhicule pour le composé d’essai pour s’assurer qu’il n’y a pas de changements mécaniquement induits dans la motilité utérine spontanée. La préparation de l’appareil reproducteur a montré une grande motilité dans les panneaux A et C en l’absence d’épinéphrine. Mais ce phénotype est dormant dans le panneau B avec la présence d’une microénerphrine muller.

Ici, une analyse de données d’échantillon de l’administration d’épinéphrine et de la récupération spontanée de motilité est montrée, illustrant comment les effets de l’hormone sur la motilité spontanée d’appareil reproducteur peuvent être quantifiés des enregistrements du tissu pris avant, pendant, et après traitement composé d’essai. Il est important d’éviter de compresser ou de trop remettre les cornes utérine sinon aucune contractilité spontanée ne sera observée. Notre méthode peut également être utilisée pour tester les composés qui peuvent augmenter la contractilité de l’utérus.

Cette procédure peut être appliquée à l’utérus de souris enceinte aux premiers stades de la grossesse. Cette expérience a le potentiel d’être mise à niveau vers un format de six plaques de puits pour le dépistage des médicaments à débit.