Name: Dérivation et traitement de la tumorale à partir de cellules tumorales primaires isolées de la souris Rhabdomyosarcomas (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-09-13T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 21 s
Description: Découvrez la formation de tumorsphères à partir de cellules primaires de rhabdomyosarcome murin pour identifier la cellule d'origine tumorale. Cette méthode permet le criblage de médicaments et l'étude de l'hétérogénéité tumorale.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ce travail a été soutenu par la subvention ag-NS-0843-11 de la Ellison Medical Foundation et par la subvention pilote des NIH au sein de la subvention de soutien du Centre de cancérologie de l'INC P30CA030199 à A.S.

<ol><li>Dagogo-Jack, I., Shaw, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour+heterogeneity+and+resistance+to+cancer+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Tumour heterogeneity and resistance to cancer therapies.</a> Nature Reviews Clinical Oncology. 15 (2), 81-94 (2018).</li>
<li>Wicha, M. S., Liu, S., Dontu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells%3A+an+old+idea--a+paradigm+shift%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells: an old idea--a paradigm shift.</a> Cancer Research. 66 (4), 1883-1890 (2006).</li>
<li>Al-Hajj, M., Wicha, M. S., Benito-Hernandez, A., Morrison, S. J., Clarke, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+identification+of+tumorigenic+breast+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+National+Academy+of+Science+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Prospective identification of tumorigenic breast cancer cells.</a> Proceedings National Academy of Science of the United States of America. 100 (7), 3983-3988 (2003).</li>
<li>Oishi, N., Yamashita, T., Kaneko, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+biology+of+liver+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Cancer%22%5BJournal%5D)">Molecular biology of liver cancer stem cells.</a> Liver Cancer. 3 (2), 71-84 (2014).</li>
<li>Crous, A. M., Abrahamse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+cancer+stem+cells+and+low-intensity+laser+irradiation%3A+a+potential+future+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Lung cancer stem cells and low-intensity laser irradiation: a potential future therapy.</a> Stem Cell Research & Therapy. 4 (5), 129(2013).</li>
<li>Tomao, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+molecular+profiles+of+ovarian+cancer%3A+an+update+on+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Investigating molecular profiles of ovarian cancer: an update on cancer stem cells.</a> Journal of Cancer. 5 (5), 301-310 (2014).</li>
<li>Zhan, H. X., Xu, J. W., Wu, D., Zhang, T. P., Hu, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+cancer+stem+cells%3A+new+insight+into+a+stubborn+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Letters%22%5BJournal%5D)">Pancreatic cancer stem cells: new insight into a stubborn disease.</a> Cancer Letters. 357 (2), 429-437 (2015).</li>
<li>Sharpe, B., Beresford, M., Bowen, R., Mitchard, J., Chalmers, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Searching+for+prostate+cancer+stem+cells%3A+markers+and+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reviews+and+Reports%22%5BJournal%5D)">Searching for prostate cancer stem cells: markers and methods.</a> Stem Cell Reviews and Reports. 9 (5), 721-730 (2013).</li>
<li>Lapidot, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cell+initiating+human+acute+myeloid+leukaemia+after+transplantation+into+SCID+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A cell initiating human acute myeloid leukaemia after transplantation into SCID mice.</a> Nature. 367 (6464), 645-648 (1994).</li>
<li>Lee, C. -H., Yu, C. -C., Wang, B. -Y., Chang, W. -W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumorsphere+as+an+effective+in+vitro+platform+for+screening+anti-+cancer+stem+cell+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Tumorsphere as an effective in vitro platform for screening anti- cancer stem cell drugs.</a> Oncotarget. 7 (2), 1215-1226 (2015).</li>
<li>Sultan, I., Qaddoumi, I., Yaser, S., Rodriguez-Galindo, C., Ferrari, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparing+adult+and+pediatric+rhabdomyosarcoma+in+the+surveillance%2C+epidemiology+and+end+results+program%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Comparing adult and pediatric rhabdomyosarcoma in the surveillance, epidemiology and end results program.</a> Journal of Clinical Oncology. 27 (20), 3391-3397 (1973).</li>
<li>Blum, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+and+overlapping+sarcoma+subtypes+initiated+from+muscle+stem+and+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Distinct and overlapping sarcoma subtypes initiated from muscle stem and progenitor cells.</a> Cell Reports. 5 (4), 933-940 (2013).</li>
<li>Rubin, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+an+unanticipated+relationship+between+undifferentiated+pleomorphic+sarcoma+and+embryonal+rhabdomyosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Evidence for an unanticipated relationship between undifferentiated pleomorphic sarcoma and embryonal rhabdomyosarcoma.</a> Cancer Cell. 19 (2), 177-191 (2011).</li>
<li>Keller, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alveolar+rhabdomyosarcomas+in+conditional+Pax3%3AFkhr+mice%3A+cooperativity%5BTitle%5D)+AND+%22of+Ink4a%2FARF+and+Trp53+loss+of+function.+Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">Alveolar rhabdomyosarcomas in conditional Pax3:Fkhr mice: cooperativity.</a> of Ink4a/ARF and Trp53 loss of function. Genes & Development. 18 (21), 2614-2626 (2004).</li>
<li>Tremblay, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Hippo+transducer+YAP1+transforms+activated+satellite+cells+and+is+a+potent+effector+of+embryonal+rhabdomyosarcoma+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">The Hippo transducer YAP1 transforms activated satellite cells and is a potent effector of embryonal rhabdomyosarcoma formation.</a> Cancer Cell. 26 (2), 273-287 (2014).</li>
<li>Hatley, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+rhabdomyosarcoma+originating+from+the+adipocyte+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">A mouse model of rhabdomyosarcoma originating from the adipocyte lineage.</a> Cancer Cell. 22 (4), 536-546 (2012).</li>
<li>Drummond, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hedgehog+Pathway+Drives+Fusion-Negative+Rhabdomyosarcoma+Initiated+From+Non-myogenic+Endothelial+Progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Hedgehog Pathway Drives Fusion-Negative Rhabdomyosarcoma Initiated From Non-myogenic Endothelial Progenitors.</a> Cancer Cell. 33 (1), 108-124 (2018).</li>
<li>Almazan-Moga, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hedgehog+Pathway+Inhibition+Hampers+Sphere+and+Holoclone+Formation+in+Rhabdomyosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+International%22%5BJournal%5D)">Hedgehog Pathway Inhibition Hampers Sphere and Holoclone Formation in Rhabdomyosarcoma.</a> Stem Cells International. , (2017).</li>
<li>Walter, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD133+positive+embryonal+rhabdomyosarcoma+stem-like+cell+population+is+enriched+in+rhabdospheres%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">CD133 positive embryonal rhabdomyosarcoma stem-like cell population is enriched in rhabdospheres.</a> PLoS One. 6 (5), (2011).</li>
<li>Ciccarelli, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Key+role+of+MEK%2FERK+pathway+in+sustaining+tumorigenicity+and+in+vitro+radioresistance+of+embryonal+rhabdomyosarcoma+stem-like+cell+population%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cancer%22%5BJournal%5D)">Key role of MEK/ERK pathway in sustaining tumorigenicity and in vitro radioresistance of embryonal rhabdomyosarcoma stem-like cell population.</a> Molecular Cancer. 15, (2016).</li>
<li>Deel, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Transcriptional+Coactivator+TAZ+Is+a+Potent+Mediator+of+Alveolar+Rhabdomyosarcoma+Tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">The Transcriptional Coactivator TAZ Is a Potent Mediator of Alveolar Rhabdomyosarcoma Tumorigenesis.</a> Clinical Cancer Research. 24 (11), 2616-2630 (2018).</li>
<li>Boscolo Sesillo, F., Fox, D., Sacco, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+Stem+Cells+Give+Rise+to+Rhabdomyosarcomas+in+a+Severe+Mouse+Model+of+Duchenne+Muscular+Dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Muscle Stem Cells Give Rise to Rhabdomyosarcomas in a Severe Mouse Model of Duchenne Muscular Dystrophy.</a> Cell Reports. 26 (3), 689-701 (2019).</li>
<li>Chamberlain, J. S., Metzger, J., Reyes, M., Townsend, D., Faulkner, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dystrophin-deficient+mdx+mice+display+a+reduced+life+span+and+are+susceptible+to+spontaneous+rhabdomyosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22The+FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Dystrophin-deficient mdx mice display a reduced life span and are susceptible to spontaneous rhabdomyosarcoma.</a> The FASEB Journal. 21 (9), 2195-2204 (2007).</li>
<li>Kessel, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Throughput+3D+Tumor+Spheroid+Screening+Method+for+Cancer+Drug+Discovery+Using+Celigo+Image+Cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22SLAS+Technology%22%5BJournal%5D)">High-Throughput 3D Tumor Spheroid Screening Method for Cancer Drug Discovery Using Celigo Image Cytometry.</a> SLAS Technology. 22 (4), 454-465 (2017).</li>
<li>Johnson, S., Chen, H., Lo, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+Tumorsphere+Formation+Assays%5BTitle%5D)+AND+%22Bio-Protocol%22%5BJournal%5D)">In vitro Tumorsphere Formation Assays.</a> Bio-Protocol. 3 (3), (2013).</li>
<li>Zhu, Z. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+three-dimensional+tumorsphere+culture+system+for+the+efficient+and+low-cost+enrichment+of+cancer+stem+cells+with+natural+polymers%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Therapeutic%22%5BJournal%5D)">A novel three-dimensional tumorsphere culture system for the efficient and low-cost enrichment of cancer stem cells with natural polymers.</a> Experimental and Therapeutic. 15 (1), 85-92 (2018).</li>
<li>Takahashi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Downstream+molecular+pathways+of+FLT3+in+the+pathogenesis+of+acute+myeloid+leukemia%3A+biology+and+therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Jornal+of+Hematology+and+Oncology%22%5BJournal%5D)">Downstream molecular pathways of FLT3 in the pathogenesis of acute myeloid leukemia: biology and therapeutic implications.</a> Jornal of Hematology and Oncology. 4, (2011).</li>
<li>Laouar, Y., Welte, T., Fu, X. Y., Flavell, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((STAT3+is+required+for+Flt3L-dependent+dendritic+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">STAT3 is required for Flt3L-dependent dendritic cell differentiation.</a> Immunity. 19 (6), 903-912 (2003).</li>
<li>Ogawa, M., Bergsagel, D. E., McCulloch, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+effects+of+melphalan+on+mouse+myeloma+%28adj.+PC-5%29+and+hemopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Differential effects of melphalan on mouse myeloma (adj. PC-5) and hemopoietic stem cells.</a> Cancer Research. 31 (12), 2116-2119 (1971).</li>
<li>Hamburger, A. W., Salmon, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+bioassay+of+human+tumor+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Primary bioassay of human tumor stem cells.</a> Science. 197 (4302), 461-463 (1977).</li>
<li>Hamburger, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+human+tumor+clonogenic+assay+as+a+model+system+in+cell+biology%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+Journal+of+Cell+Cloning%22%5BJournal%5D)">The human tumor clonogenic assay as a model system in cell biology.</a> The International Journal of Cell Cloning. 5 (2), 89-107 (1987).</li>
<li>Jimenez-Hernandez, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NRP1-positive+lung+cancer+cells+possess+tumor-initiating+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Oncology+Reports%22%5BJournal%5D)">NRP1-positive lung cancer cells possess tumor-initiating properties.</a> Oncology Reports. 39 (1), 349-357 (2018).</li>
<li>Singh, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+human+brain+tumour+initiating+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Identification of human brain tumour initiating cells.</a> Nature. 432 (7015), 396-401 (2004).</li>
<li>Kimlin, L. C., Casagrande, G., Virador, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+three-dimensional+%283D%29+models+in+cancer+research%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">In vitro three-dimensional (3D) models in cancer research: an update.</a> Molecular Carcinogenesis. 52 (3), 167-182 (2013).</li>
<li>Salerno, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sphere-forming+cell+subsets+with+cancer+stem+cell+properties+in+human+musculoskeletal+sarcomas%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Oncology%22%5BJournal%5D)">Sphere-forming cell subsets with cancer stem cell properties in human musculoskeletal sarcomas.</a> International Journal of Oncology. 43 (1), 95-102 (2013).</li>
</ol>

Les auteurs n'ont rien à révéler.

Des méthodes multiples ont été employées pour l'isolement et la caractérisation des TPC des populations hétérogènes de cellules de tumeur : essais clonogènes de tumeur, isolement de FACS, et analyse de formation de tumorsphere. L'exemple clonogène de tumeur a été décrit la première fois en 1971, employé pour des études de cellules souches, et seulement plus tard appliqué à la biologie de cancer29,30. Cette méthode est basée sur la propriété intrinsèque des cellul...

Le cancer est une maladie hétérogène; en outre, le même type de tumeur peut présenter différentes mutations génétiques dans différents patients, et dans un patient une tumeur est composée par des populations multiples des cellules1. L'hétérogénéité présente un défi dans l'identification des cellules responsables de l'initiation et de la propagation du cancer, mais leur caractérisation est essentielle au développement de traitements efficaces. La notion des cellules de propagation de tumeur (TPC), une population rare de cellules qui contribuent au développement de tumeur, a été précédemment examiné intensivement2. Malgré le fait que les TPC ont été caractérisés dans plusieurs types de cancer, l'identification des marqueurs pour leur isolement fiable demeure un défi pour plusieurs types de tumeur3,4,5,6 , 7 Annonces , 8 Annonces , 9 . Ainsi, une méthode qui ne repose pas sur des marqueurs moléculaires, mais plutôt sur des propriétés fonctionnelles du PTC(renouvellement élevé et capacité de croître dans des conditions de faible attachement), connue sous le nom d'analyse de formation de la tumorsphere, peut être largement appliquée pour le l'identification des TPC de la plupart des tumeurs. Fait important, cet analyse peut également être utilisé pour l'expansion des TPC et donc directement appliqué au dépistage des médicaments contre le cancer et des études sur la résistance au cancer1,10.
Le rhabdomyosarcome (RMS) est une forme rare de sarcome des tissus mous le plus fréquent chez les jeunes enfants11. Althoug RMS peut être histologiquement identifié par l'évaluation de l'expression des marqueurs myogéniques, la cellule d'origine de RMS n'a pas été unvocally caractérisée en raison des sous-types multiples de tumeur et de l'hétérogénéité élevée des stimulus développementals de tumeur. En effet, des études récentes ont suscité une discussion scientifique importante sur la question de savoir si le RMS est d'origine myogène ou non myogénique, suggérant que le RMS peut provenir de différents types de cellules selon le contexte12,13, 14 (en) , 15 Annonces , 16 Annonces , 17. De nombreuses études sur les lignées cellulaires rmS ont été réalisées en utilisant l'exemple de formation de la tumorsphère pour l'identification des voies impliquées dans le développement tumoral et la caractérisation des marqueurs associés à des populations fortement auto-renouveau 18 ans, états-unis qui , 19 ans, états-unis qui , 20 Ans, états-unis , 21.
Cependant, en dépit du potentiel d'analyse de formation de tumorsphere pour identifier des cellules de RMS d'origine, une méthode fiable qui peut être employée sur les cellules primaires de RMS n'a pas encore été décrite. Dans ce contexte, une étude récente de notre groupe a utilisé un test optimisé de formation de tumorsphere pour l'identification des cellules rmS d'origine dans un modèle de souris de dystrophie musculaire de Duchenne (DMD)22. Plusieurs types de cellules prétumorigènes, isolés des tissus musculaires, sont testés pour leur capacité à se développer dans des conditions de faible attachement, permettant l'identification des cellules souches musculaires comme cellules d'origine pour RMS dans des contextes dystrophiques. Décrit ici est un protocole reproductible et fiable pour l'analyse de formation de la tumorsphère (Figure 1), qui a été utilisé avec succès pour l'identification des populations cellulaires extrêmement rares qui sont responsables du développement de la souris RMS.

<table><tbody><tr><td>Réactif de dissociation cellulaire Accutase</td><td>Gibco</td><td>A1110501</td><td>Détacher les cellules adhérentes et dissocier les sphères tumorales</td></tr><tr><td>Celigo</td><td>Nexcelom</td><td>Celigo</td><td>Cytomètre d’image sur plaque pour cellules adhérentes et en suspension</td></tr><tr><td>Colgénase, Type II</td><td>Life Technologies</td><td>17101015</td><td>Enzyme de digestion tissulaire</td></tr><tr><td>Dispase II, protéase</td><td>Life Technologies</td><td>17105041</td><td>Enzyme de digestion tissulaire</td></tr><tr><td>DMEM Milieu à haute teneur en glucose</td><td>Gibco</td><td>11965092</td><td>Composant des cellules tumorales Milieu</td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>Gibco</td><td>11320033</td><td>Composant du milieu tumosphérique</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>ThermoFisher</td><td>S312500</td><td>Composant du tampon FACS</td></tr><tr><td>Protéine de souris recombinante EGF</td><td>Gibco</td><td>PMG8041</td><td>Composant du milieu</td></tr> <tr><td>tumosphériqueFACSAria II Cytométrie en flux</td><td>BD Biosciences</td><td>650033</td><td>Trieur de cellules activées par fluorescence</td></tr><tr><td>Sérum de veau fœtal</td><td>Omega Scientific</td><td>FB-11</td><td>Composant des cellules tumorales media</td></tr><tr><td>Agent anesthésique Fluriso (Isofluornae)</td><td>MWI Vet Supply</td><td>502017</td><td>Réactif anesthésique pour animaux</td></tr><tr><td>FxCycle Violet Stain</td><td>Life Technologies</td><td>F10347</td><td>Discriminer les cellules vivantes et mortes</td></tr><tr><td>Goat Serum</td><td>Life Technologies</td><td>16210072</td><td>Composant du tampon FACS</td></tr><tr><td>Ham F10 Media</td><td>Life Technologies</td><td>11550043</td><td>Composant du tampon FACS</td></tr><tr><td>Horse Serum</td><td>Life Technologies</td><td>16050114</td><td>Composant du milieu d’isolement cellulaire</td></tr><tr><td>Réactif de transfection Lipofectamine 3000</td><td>Réactif</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>de transfection ThermoFisher L3000015Matrigel membrane matrice</td><td>Corning</td><td>CB40234</td><td>Fournit un soutien aux cellules</td></tr><tr><td>contaminées N-2 Supplemtns (100X)</td><td>Gibco</td><td>17502048</td><td>Composant du milieu tumosphérique</td></tr><tr><td>Néomycine-Polymyxine B Sulfates-Bacitracine Zinc Zinc Pommade ophtalmique</td><td>MWI Vet Supply</td><td>701008</td><td>Pommade oculaire</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td>Composant du tampon FACS et utilisé pour le lavage des cellules</td></tr><tr><td>pEGFP-C1</td><td>Addgene</td><td>6084-1</td><td>GFP plasmide</td></tr><tr><td>Pénicilline - Streptomyocine</td><td>Life Technologies</td><td>15140163</td><td>Composant de la tumosphère et des cellules tumorales média</td></tr><tr><td>Recombinant Humain &beta ; FGF-basic</td><td>Peprotech</td><td>10018B</td><td>Composant du milieu tumosphérique</td></tr><tr><td>Souris recombinante Flt-3 Ligand Protein</td><td>R& D Systems</td><td>427-FL-005</td><td>Protéine recombinante</td></tr><tr><td>Trypan blue</td><td>ThermoFisher</td><td>15250061</td><td>Discriminer les cellules vivantes et mortes</td></tr></tbody></table>

dérivation et traitement de la tumorale à partir de cellules tumorales primaires isolées de la souris rhabdomyosarcomas

Tumorsphere Derivation and Treatment from Primary Tumor Cells Isolated from Mouse Rhabdomyosarcomas

Le rhabdomyosarcome (RMS) est le sarcome des tissus mous le plus courant chez les enfants. Bien que des efforts significatifs aient permis l'identification des mutations communes associées au RMS et aient permis la discrimination de différents sous-types de RMS, des défis majeurs existent toujours pour le développement de nouveaux traitements pour améliorer davantage le pronostic. Bien qu'identifié par l'expression des marqueurs myogéniques, il y a encore une controverse significative quant à savoir si RMS a des origines myogéniques ou non myogéniques, car la cellule d'origine est encore mal comprise. Dans la présente étude, une méthode fiable est fournie pour l'analyse de la tumorsphere pour la souris RMS. L'analyse est basée sur les propriétés fonctionnelles des cellules tumorales et permet l'identification de populations rares dans la tumeur avec des fonctions tumorigènes. On décrit également des procédures pour tester des protéines recombinantes, intégrant des protocoles de transfection avec l'essai de la tumorsphere, et évaluant des gènes candidats impliqués dans le développement et la croissance de tumeur. Décrit en outre est une procédure pour la transplantation allogreffe de tumorspheres dans les souris destinataires pour valider la fonction tumorigenic in vivo. Dans l'ensemble, la méthode décrite permet l'identification et l'essai fiables des populations tumorigenic rares de RMS qui peuvent être appliquées au RMS surgissant dans différents contextes. Enfin, le protocole peut être utilisé comme une plate-forme pour le dépistage des médicaments et le développement futur de la thérapeutique.

Détection des tumorspheres L'isolement cellulaire a été optimisé pour obtenir l'hétérogénéité maximale des populations cellulaires présentes dans le tissu tumoral. Tout d'abord, puisque les tissus isolés présentaient des zones morphologiquement différentes, afin d'améliorer les chances d'isoler des populations de cellules rares uniformes, l'échantillonnage a été effectué à partir de plusieurs zones de la tumeur(figure 1A, premier panneau s...

Ce protocole décrit une méthode reproductible pour l'isolement des cellules primaires de rhabdomyosarcoma de souris, de la formation et du traitement de la tumorsphere, et de la transplantation d'allogreffe commençant des cultures de tumorspheres.

Dérivation et traitement de la tumorale à partir de cellules tumorales primaires isolées de la souris Rhabdomyosarcomas

Rhabdomyosarcoma (RMS) is the most common soft tissue sarcoma in children. Although significant efforts have enabled the identification of common ...

Le rhabdomyosarcome est une forme rare de sarcomes des tissus mous caractérisés histologiquement par la morphologie tissulaire et l’expression de marqueurs myogéniques. Cependant, étant donné l’existence de différents sous-types de ces tumeurs et l’hétérogénéité des stimuli qui contribue à sa formation, l’identification de la cellule d’origine a été très difficile. Ici, nous décrivons des méthodes reproductibles et fiables pour l’identification de la cellule d’origine des rhabdomyosarcomes à partir de tissus tumoraux fraîchement récoltés à partir de souris et cet essai est l’analyse de formation tumorsphère.Les principaux avantages de l’essai de formation de tumorsphère est qu’il s’appuie sur des propriétés cellulaires qui sont connues pour être présentes dans les cellules tumorales et il peut également être employé pour l’expansion et l’enrichissement de la population cellulaire spécifique. En outre, sa structure sphéroïde imiter l’environnement tumoral, de ce fait, ils peuvent être utilisés comme des études de dépistage des médicaments. Cette méthode a le potentiel d’être appliquée à d’autres types de tumeurs parce qu’elle ne nécessite pas de connaissance préalable des marqueurs

tumorsphere-derivation-treatment-from-primary-tumor-cells-isolated

Research

Recherche

JoVE Journal

Genetics

Génétique

Ce protocole décrit l'isolement, l'enrichissement et l'entretien des cellules tumorales médulloblastome souches dérivées de souris mutantes avec ectopique Sonic activité de la voie Hedgehog.

L&#39;isolement, l&#39;enrichissement et l&#39;entretien des cellules souches Médulloblastome

Une méthode est décrite pour propager les tumeurs humaines chez la souris rétinoblastome. Les cellules tumorales sont injectées directement dans les yeux du système immunitaire chez les souris déficientes. Tumeurs secondaires ont été établies avec succès en utilisant les deux cellules directement récoltées à partir de tumeurs humaines et tumorspheres cultivés.

Création et propagation des tumeurs de l&#39;homme en rétinoblastome immunitaire chez les souris déficientes

Ce protocole vidéo démontre l'isolement et l'expansion des cellules souches comme des cellules de glioblastome mutliforme résection chirurgicale humaine (GBM) tissu tumoral en utilisant la méthode de dosage Neurosphère culture.

L&#39;isolement et l&#39;expansion des cellules humaines de glioblastome multiforme tumeur utilisant le test Neurosphère

La présence de cellules souches cancéreuses (CCF) dans sarcomes osseux a récemment été liée à leur pathogénie. Dans cet article, nous présentons l'isolement des cellules souches cancéreuses à partir de cultures de cellules primaires obtenues à partir de biopsies humaines d'ostéosarcome classique (OS) en utilisant la capacité de CSCs à croître dans des conditions non adhérentes.

Création de souches du cancer de cultures de cellules de Human ostéosarcome conventionnel

Le protocole suivant est axé sur la mise en place d’une culture primaire de sarcome des tissus mous dérivé de patient (STS). Ce modèle pourrait nous aider à mieux comprendre la base moléculaire et le profil pharmacologique de ces tumeurs malignes rares et pourrait constituer un point de départ pour poursuivre les recherches visant à améliorer la gestion de STS.

Mise en place d’une Culture primaire de sarcome des tissus mous dérivé de Patient

Nous décrivons un protocole détaillé pour l'isolement des cellules tumeur-initiatrices des xénogreffes patient-dérivées humaines par le tri de cellules fluorescence-activé, utilisant l'antigène humain de leucocyte-1 (HLA-1) comme marqueur négatif, et pour la validation plus loin et caractérisation de ces cellules HLA-1-négatives de tumeur-initiateur.

Isolement et caractérisation des cellules initiatrices de tumeurs des xénogreffes dérivées du sarcome

L’objectif de cette méthodologie est d’identifier les cellules souches cancéreuses (CSC) dans les lignées de cellules cancéreuses et les échantillons primaires de tumeurs humaines avec le protocole de formation de sphère, d’une manière robuste, en utilisant des essais fonctionnels et la caractérisation phénotypique avec cytométrie du flux et de l’Ouest Tache.

Obtenir des sphères de cellules souches cancéreuses à partir de tumeurs gynécologiques et du cancer du sein

Dans ce protocole, nous décrivons un modèle de souris de résection chirurgicale incomplète du sarcome de tissu mou pour tester (neo)thérapies adjuvantes.

Un modèle de souris de sarcome de tissus mous incomplètement réséqué pour l’essai (Neo)adjuvant thérapies

Les modèles de métastases osseuses ne développent pas de métastases uniformément ou avec une incidence de 100%. L’injection directe de cellules tumorales intra-osseuses peut entraîner une embolisation du poumon. Nous présentons notre technique de modélisation des tumeurs osseuses primaires et des métastases osseuses en utilisant l’implantation d’une greffe de tumeur solide dans l’os, conduisant à une greffe et une croissance reproductibles.

Modélisation des tumeurs osseuses primaires et des métastases osseuses avec implantation d’une greffe de tumeur solide dans l’os

Un protocole d’utilisation de l’hyperthermie contrôlée, générée par des ultrasons focalisés de haute intensité guidés par résonance magnétique, pour déclencher la libération de médicaments à partir de liposomes sensibles à la température dans un modèle murin de rhabdomyosarcome.

Hyperthermie générée par ultrasons focalisés de haute intensité guidés par résonance magnétique: une méthode de traitement réalisable dans un modèle de rhabdomyosarcome murin

Le présent protocole décrit la génération de modèles de culture tumorale 3D à partir de cellules cancéreuses primaires et l’évaluation de leur sensibilité aux médicaments à l’aide de tests de viabilité cellulaire et d’examens microscopiques.

Établissement de sphéroïdes en 3 dimensions à partir d’échantillons tumoraux dérivés de patients et évaluation de leur sensibilité aux médicaments

Découvrez la formation de tumorsphères à partir de cellules primaires de rhabdomyosarcome murin pour identifier la cellule d'origine tumorale. Cette méthode permet le criblage de médicaments et l'étude de l'hétérogénéité tumorale.

Dérivation et traitement de la tumorale à partir de cellules tumorales primaires isolées de la souris Rhabdomyosarcomas

Explorer plus de vidéos