Un modèle cryo-blessure pour étudier l'infarctus du myocarde chez la souris

Cette méthode est fiable pour étudier la génération de l’infarctus du myocarde et une excellente plate-forme à utiliser pour étudier la récupération cardiaque après, par exemple, la transplantation de cellules souches. Le principal avantage de cette procédure est qu’elle peut être utilisée pour générer des tailles d’infarctus uniformes d’une manière rapide, facile et reproductible. De nouvelles interventions expérimentales, telles que pharmacologique, ou les stratégies basées sur l’ingénierie tissulaire, peuvent être testées dans ce modèle.

Et tester avec succès que les options peuvent être confirmées dans les grands modèles animaux. Après avoir confirmé un manque de réponse au réflexe de douleur chez une souris anesthésiée de 27 grammes, vieille de 14 semaines, utilisez une tondeuse à cheveux pour enlever la fourrure de la poitrine et du cou de l’animal et placer la souris dans une position de supination sur un coussin chauffant. Tapez l’arrière et les membres antérieurs dans une position d’aigle à tartiner et utilisez du povidone-iode séquentiel et des gommages à 80 % d’éthanol pour désinfecter la peau exposée.

Faire une incision de la peau midline du tiers inférieur du sternum au menton, et utiliser des forceps incurvés pour séparer soigneusement les muscles autour du cou pour exposer la trachée. Utilisez des micro ciseaux pour effectuer une trachéotomie entre les deuxième et troisième anneaux du cartilage. Et réglez le ventilateur à une fréquence de ventilation de 110 par minute avec un volume de marée de 0,5 millilitres.

Ensuite, insérez une canule en plastique de calibre 20 reliée au ventilateur dans la trachée. Ensuite, utilisez la cautérisation pour détacher le muscle pectoralis droit de son origine sternale entre les troisième et septième côtes. Et utilisez des ciseaux de ressort inclinés latéraux pour couper la quatrième à six nervures aussi près que possible du sternum.

Disséquer le tissu conjonctif sous-jacent pour obtenir une vue claire dans la cavité thoracique, cautérisant l’artère mammaire pour endiguer les saignements au besoin. Insérez un mini rétracteur de tache d’or pour étendre les côtes et garder la cavité thoracique ouverte. Et utilisez des forceps contondants pour ouvrir le péricarde pour exposer le cœur.

Utilisez une tige émoussée pour soulever le cœur de la cavité thoracique et diminuer la tension du rétracteur pour réduire l’ouverture de la poitrine et pour empêcher le cœur de retoquér dans la cavité abdominale. Pré-refroidir un cryoprobe de trois millimètres de diamètre pendant 10 secondes, et appliquer le cryoprobe sur la paroi ventricule gauche intérieure pendant 10 secondes pour générer un ventriculaire gauche, cryoinjury infarctus. Détachez le cryoprobe du mur ventriculaire gauche avec irrigation saline à température ambiante et réenlarger l’ouverture de la poitrine avec le rétracteur.

Utilisez la tige pour retourner doucement le cœur dans la cavité thoracique et enlever le rétracteur. Utilisez une suture 6-0 pour relier la sternotomie à un seul nœud. Et utilisez une suture 6-0 en cours d’exécution pour fermer la cavité thoracique.

Utilisez une seringue de 10 millilitres pour évacuer tout air restant de la poitrine avant de lier le nœud et d’adapter la peau au bord caudal avant d’utiliser une suture de 5 à 0 pour fermer le tissu au point de l’ouverture trachéale. Après avoir réduit l’isoflurane et l’animal gagne la respiration spontanée enlever le cathéter trachéal et fermer l’incision trachéale avec un 8-0 Suture. Remplacez les muscles ventraux du cou à leur position anatomique au-dessus de la trachée et complétez la suture cutanée.

Ensuite, ajouter la méthamizole à l’eau potable pour l’analgésie de la douleur pendant trois jours avec la surveillance quotidienne des animaux pendant huit semaines. Dans l’échocardiographie cryoinjured de coeurs indique une fraction significativement réduite d’éjection et le changement fractionnel de zone, avec l’affaiblissement fonctionnel observé du jour sept post-chirurgie jusqu’au point final expérimental à 56 jours. Telle qu’évaluée par l’analyse de la boucle de volume de pression, la cryoinfraction entraîne une altération de la fonction ventricule gauche qui se reflète comme une diminution du volume d’AVC, du travail d’AVC, de la production cardiaque et de la puissance maximale ajustée avant la charge.

La cartographie optique ex vivo des cœurs teints sensibles à la tension fluorescente démontre un blocage de la conduction électrique à la frontière des blessures, ce qui indique un découplage électrique local. La coloration histologique avec Masson' le trichrome de s indique la formation fibreuse transmurale de tissu au site de la blessure. La taille infarctus peut être calculée en mesurant la zone de cicatrice infarctus ou la longueur de cicatrice de midline.

En outre, la coloration immunofluorescente contre un marqueur de cardiomyocyte et collagène-I confirment la présence du remodelage fibrotique et la perte des cardiomyocytes à l’emplacement des dommages. Il est important de maintenir la même durée de contact du cryoproblem chaque animal que la durée différente peut conduire à des tailles d’infarctus incongrues. Une fois maîtrisée, cette technique peut être effectuée en 20 minutes si elle est effectuée correctement.

Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’effectuer le modèle cryoinjury. Bonne chance avec vos expériences.