Modèle de transplantation aortique cervicale de Murine utilisant une technique modifiée de manchette de non-suture

Je suis Martin Ryll des laboratoires de recherche du Département de chirurgie générale, viscérale et transplantée de l’UML à Munich. Aujourd’hui, nous allons vous montrer un modèle de transplantation aortique hétérotopique murine utilisant une technique modifiée de manchette non suture. Tout d’abord, anesthésier l’animal receveur avec une injection intrapénitale de midazolam, de médetomidine et de fentanyl.

Couper tous les poils de la région latérale cervicale avec une tondeuse à cheveux électrique pour les petits animaux et appliquer de l’onguent ophtalmique avec des cotons-tiges pour empêcher les yeux de sécher pendant la procédure. Placez l’animal en position supine sur un coussin chauffant sous le microscope et collez doucement ses jambes à la table d’opération avec des bandes de plâtre sensibles à la peau. Inclinez sa tête en arrière et frottez le champ opératoire plusieurs fois avec de l’alcool.

Faire une incision cutanée de l’incision jugulaire à la mandibule inférieure droite avec de petits ciseaux. Retirez le lobe inférieur droit de la glande submandibulaire par cautérisation bipolaire du pedicle de navire et excision suivante avec des ciseaux micro. Retirez le muscle sternocleidomastoid droit par l’intermédiaire de la cautérisation bipolaire de la partie supérieure et inférieure et de l’excision suivante avec des micro ciseaux pour accéder à l’artère carotide commune.

Mobilisez l’artère carotide commune aussi loin et proximalement que possible en tirant le tissu conjonctif environnant à part avec des forceps fins. Attachez deux ligatures de soie 7-0 avec une distance minimale entre eux autour du milieu de l’artère carotide commune et transectez l’artère carotide commune avec de fines micro ciseaux entre les ligatures. Passez l’extrémité ligatée proximale à travers le brassard et fixez-la avec une petite pince d’artère.

Retirez la ligature avec de fines micro ciseaux aussi près que possible de la ligature et rincer le lumen avec de la solution saline héparinée avec une aiguille de calibre 30 tout en prenant soin de ne pas endommager les parois du navire. Distendez le lumen ouvert à l’aide de dilatateurs vasculaires fins et inversez la souche carotide sur la manchette en la tirant doucement sur le tube de polyamide. Fixez immédiatement la carotide inversée avec une boucle de soie 7-0 lâchement pré-attachée.

Effectuez la même procédure à l’autre extrémité de l’artère carotide avec l’autre manchette. Passer l’extrémité ligated distal à travers le brassard et le fixer avec une petite pince d’artère. Retirez la ligature avec de fines micro ciseaux aussi près que possible de la ligature et rincer le lumen avec de la solution saline héparinée avec une aiguille de calibre 30 tout en prenant soin de ne pas endommager les parois du navire.

Distendez le lumen ouvert à l’aide de dilatateurs vasculaires fins et inversez la souche carotide sur la manchette en la tirant doucement sur le tube de polyamide. Fixez immédiatement la carotide inversée avec une boucle de soie 7-0 lâchement pré-attachée. Mettre l’animal receveur de côté et hydrater les deux tiers supérieurs avec de la solution saline jusqu’à ce que le segment aortique soit explanté.

Anesthésier la souris donneuse de la même manière que l’animal receveur. Couper tous les poils de la région abdominale et thoracique avec une tondeuse à cheveux électrique pour les petits animaux et appliquer de l’onguent ophtalmique avec des cotons-tiges pour empêcher les yeux de sécher pendant l’intervention. Placez l’animal en position supine sur un coussin chauffant sous le microscope et collez doucement ses jambes à la table d’opération avec des bandes de plâtre sensibles à la peau.

Frottez le champ opératoire plusieurs fois avec de l’alcool. Effectuez une laparotomie abdominale de midline avec de petits ciseaux et poussez les intestins légèrement vers le haut pour exposer le cava inférieur de vena. Injecter l’IVC avec un cc de solution saline héparinée à l’aide d’une aiguille de calibre 30.

Couper l’aorte abdominale et l’IVC sous les artères rénales avec de petits ciseaux pour exsanguiner l’animal donneur. Placez lâchement une compresse dans l’abdomen pour absorber le sang. Effectuer une thoracotomie par le détournement bilatéral des côtes avec des ciseaux et incliner la paroi thoracique antérieure cranially avec une pince chirurgicale pour exposer le mediastinum.

Couper l’IVC et l’œsophage directement au-dessus du diaphragme à l’aide de micro ciseaux. Retirez le cœur et les poumons en les titillant vers le haut avec des forceps tenant l’IVC coupé et l’œsophage, puis les exciser avec des micro ciseaux de la base pour accéder à l’aorte thoracique et le mediastinum dorsal. Mobilisez l’aorte thoracique de son tissu environnant en démonter le tissu conjonctif environnant et la graisse avec des forceps fins tout en prenant soin de ne pas endommager les artères intercostales.

Cautériser toutes les branches de l’aorte thoracique avec des forceps cautérisaires bipolaires et exciser le segment aortique entre le diaphragme et l’arc aortique à l’aide de micro ciseaux. Rincer le segment aortique excisé avec une solution saline héparinée avec une aiguille de calibre 30 tout en prenant soin de ne pas endommager les parois du vaisseau pour enlever le sang ou les caillots restants et transférer la greffe à l’animal receveur. Tirez l’extrémité proximale du segment aortique donneur sur le brassard proximal sur le dessus de l’artère carotide inversée avec des forceps fins et fixez-le immédiatement avec une boucle de soie 7-0 lâchement pré-attachée.

Couper l’extrémité libre distale de la greffe aortique avec des micro ciseaux de sorte que la longueur de la greffe corresponde à la distance entre les deux poignets. Tirez l’extrémité distale du segment aortique donneur sur le brassard distal sur le dessus de l’artère carotide inversée avec des forceps fins et fixez-le immédiatement avec une boucle de soie 7-0 lâchement pré-attachée. Retirez d’abord la pince distale pour permettre la perfusion rétrograde.

Après avoir atteint l’hémostase, enlever la pince proximale pour compléter l’anastomose. Enfin, fermez la plaie avec une suture continue de 6-0. Après 28 jours, les animaux sont sacrifiés et les greffons préservés pour la coloration histologique.

Comme indiqué dans ces taches de Van-Gieson des sections aortiques, les aortas allografted complètement MHC mal acquérillées des donateurs de Balb/c aux six destinataires noirs ont développé une hyperplasie néointimale significative ayant pour résultat le rétrécissement luminal. D’autre part, les greffes aortiques syngéniques de six donneurs noirs à six destinataires noirs ont développé seulement peu d’hyperplasie néointimale. La coloration d’immunofluorescence contre SM22, un marqueur pour les cellules vasculaires lisses de muscle, comme montré dans cette image dans la fluorescence verte, démontre que le neointima se compose principalement des cellules lisses vasculaires de muscle.

La transplantation aortique murine sert de modèle pour la vasculopathie chronique de transplantation qui est la cause la plus commune de l’échec tardif de greffe. Par rapport au modèle abdominal orthotopique, notre technique modifiée de manchette est moins exigeante microchirurgical menant à un taux de succès élevé. En outre, en raison du diamètre constant du brassard, les variations de l’anastomose vasculaire comme on le voit dans d’autres modèles de transplantation microchirurgical peuvent être négligées.

En outre, le temps ischémique chaud est maintenu constant dans tous les groupes expérimentaux pendant que l’animal destinataire est préparé d’abord avant que le segment aortique soit explanté. Notre modèle modifié devrait aider d’autres laboratoires à établir la transplantation aortique murine.