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DOI: 10.3791/60018-v
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Ici, nous présentons des protocoles détaillés de traitement pour l'imagerie des échantillons de tissus délicats à l'aide de la microscopie électronique à balayage (SEM). Trois méthodes de traitement différentes, à savoir, le séchage chimique du disilazana hexaméthylique (HMDS), le séchage simple à l'air et le séchage à points critiques sont décrits pour la préparation de coquilles d'œufs rigides, d'embryons à un stade de développement précoce et de cultures fongiques respectivement.
Nous avons des protocoles normalisés de préparation d’échantillons pour l’imagerie d’embryons de tortues peintes, de coquilles d’œufs rigides et de cultures fongiques à l’aide de microscopie électronique à balayage. Ces méthodes complètes utilisent des modifications subtiles aux protocoles connus pour traiter trois tissus délicats permettant la différenciation entre les structures originales et le traitement des artefacts. Jessica Gibbons, une étudiante diplômée de mon laboratoire, fera la démonstration de l’intervention avec moi.
Avant de recueillir les œufs de tortues sur un site de champ pendant la saison de nidification, faire de quatre à six trous de 0,25 centimètre le long des côtés des boîtes en plastique et sur leurs couvercles pour permettre l’aération. Avant de remplir les boîtes d’un mélange humide de vermiculite et de mélange de literie de mousse de tourbe à un rapport un pour un. Au site de nidification, retirer délicatement le sol pour découvrir les œufs et essuyer la surface de chaque œuf de tortue avec une teinture diluée d’iode pour se protéger contre la contamination microbienne pendant l’incubation.
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