Name: Méthode délectroporation pour la livraison in vivo de lADN de Plasmid dans le Telencephalon adulte de poisson zèbre (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-09-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 2 s
Description: Découvrez une méthode d'électroporation pour marquer des cellules épendymales individuelles dans le télencéphale de Danio rerio adulte. Cette technique permet le suivi à long terme et la manipulation de voies cellulaires spécifiques.

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Un merci spécial à James Copti pour l'édition du manuscrit. Nous remercions également JN de la Fondation allemande de recherche (DFG) par le SFB 870 et SPP "Integrative Analysis of Olfaction" et SPP 1738 "Emerging roles of non-coding RNAs in nervous system development, plasticity and disease", SPP1757 " L'hétérogénéité gliale » et la stratégie d'excellence dans le cadre du Cluster for Systems Neurology de Munich (EXC 2145 SyNergy - ID 390857198).

Tous les animaux utilisés dans ce protocole ont été gardés dans des conditions d'élevage standard, et des expériences ont été réalisées conformément aux directives et règlements de manipulation de l'UE et du gouvernement de Haute-Bavière (AZ 55.2-1-54-2532-0916).
1. Préparation du mélange de Plasmide pour l'électroporation
<ol><li>Diluer le plasmide de l'intérêt pour l'eau stérile et ajouter une solution de bouillon de taches vertes rapides [1 mg/mL]. Assurez-vous que la concentration finale du plasmide est de 1 g/L. Ajouter la tache à une concentration d'au plus 3 %, car son seul but est de colorer la solution et de visualiser l'injection ventriculaire.</li>
	<li>Une fois préparé, mélanger la solution plasmide en faisant monter et descendre plusieurs fois ou en tapant sur les doigts. Conserver à température ambiante (RT) jusqu'à utilisation. REMARQUE: Pour la co-électroporation de deux plasmides dans la même cellule, assurez-vous que la concentration de chaque plasmide individuel utilisé dans le mélange est d'au moins 0,8 ng/L avec un rapport molaire de 1:1 pour obtenir 80% -90% d'efficacité de co-électroporation.</li>
</ol>2. Préparations pour la procédure d'injection et d'électroporation
<ol><li>Préparer les capillaires en verre (diamètre extérieur 1 mm, diamètre intérieur 0,58 mm) nécessaires à l'injection dans l'appareil de traction de l'aiguille.</li>
	<li>Afin d'injecter la bonne quantité de plasmide (voir ci-dessus), tirez le capillaire à une température de 68,5 oC avec deux poids légers et deux poids lourds (voir tableau des matériaux pour les spécifications du tireur). REMARQUE: Dans le cas où un puller différent est utilisé, calibrer le capillaire pour fournir le volume approprié de mélange d'électroporation.</li>
	<li>Régler manuellement le dispositif d'injection à une pression d'injection de 200 hPa (en tournant le bouton Pi) et une pression constante de 0 hPa. Régler manuellement le temps d'injection en mode manuel et contrôler la pression avec la pédale.</li>
	<li>Régler le dispositif d'électroporation en « mode LV » avec cinq impulsions à 54-57 V (25 ms chacun avec 1 s intervalles). Connectez les électrodes à l'appareil.</li>
	<li>Préparer un aquarium avec de l'eau de poisson propre, où le poisson sera réveillé de l'anesthésie après la procédure d'électroporation. Aérer l'eau en gardant la pierre d'air attachée à la pompe à air pendant toute la période de récupération jusqu'à ce que le poisson soit complètement réveillé.</li>
	<li>Prendre une éponge de cuisine régulière et faire une coupe longitudinale dans l'éponge pour retenir le poisson pendant la procédure d'injection et d'électroporation (voir la publication précédente3). REMARQUE: L'éponge de cuisine doit être lavée ou échangée régulièrement afin d'éliminer les produits chimiques toxiques potentiels.</li>
	<li>Placez une petite quantité de gel à ultrasons multi-usages hautement conducteur à côté de la configuration d'injection et d'électroporation. REMARQUE: Cela assurera une conductivité électrique adéquate et, par conséquent, une distribution des cellules électroporated dans l'ensemble du télencéphale.</li>
</ol>3. Anesthésie de poisson zèbre
<ol><li>Avant l'anesthésie, préparez une solution de stock d'anesthésie avec 0,2% MS222 dans l'eau distillée et ajustez le pH à 7 avec le tampon Tris-HCl. Diluer ce stock 1:10 (c.-à-d., à 0,02% MS222) en utilisant l'eau de poisson.</li>
	<li>Anesthésiez les poissons en les gardant dans cette solution de travail jusqu'à ce que le mouvement du corps et des branchies s'estompe (généralement pendant quelques minutes).</li>
</ol>4. Injection de solution de Plasmid
<ol><li>Remplissez le capillaire en verre préparé avec une solution de plasmide de 10 ll à l'aide de pointes de microchargeur. Évitez la formation de bulles d'air à l'intérieur du capillaire.</li>
	<li>Appuyez sur Menu/Changer Capillary sur le dispositif d'injection. Insérez et fixez l'aiguille dans le porte-aiguille.</li>
	<li>Sous un stéréomicroscope avec un grossissement de 3,2x ou 4x, couper seulement la pointe du capillaire à l'aide de forceps fins. Passez le dispositif d'injection du mode Change Capillary en mode Inject, puis appliquez la pression avec une pédale de pied pour s'assurer que la solution de plasmide s'exécute facilement hors de l'aiguille et sans obstacle.</li>
	<li>Transférer le poisson du réservoir d'élevage au récipient (boîte en plastique) avec une solution anesthésique. Attendez quelques minutes jusqu'à ce que le mouvement des branchies s'estompe.</li>
	<li>Placer le poisson dans l'éponge pré-humide avec le côté dorsal face vers le haut. Effectuez toutes les étapes d'injection suivantes sous le stéréomicroscope pour assurer l'exactitude de la procédure.</li>
	<li>À l'aide d'un micro-couteau disséquant en acier inoxydable avec un tranchant de 40 mm et une épaisseur de 0,5 mm, créez un petit trou dans le crâne du poisson du côté postérieur du ténencéphale (figure 1B), juste à côté de la bordure avec tectum optique. REMARQUE: Cette étape doit être effectuée avec soin puisque le trou doit être très petit et superficiel, pénétrant uniquement le crâne, pour éviter des dommages au cerveau.</li>
	<li>Inclinez le poisson au besoin et orientez la pointe du capillaire de verre vers le crâne dans le bon angle pour faciliter la pénétration de la pointe capillaire à travers le trou.</li>
	<li>Insérez soigneusement la pointe du capillaire à travers le trou du crâne jusqu'à ce qu'il atteigne le ventricule telencéphalique (voir figure 1B). Cela nécessitera une pénétration à travers la couche cellulaire ependymale dorsale. Soyez particulièrement prudent de ne pas insérer le capillaire trop profondément pour éviter le contact avec le tissu cérébral. Gardez le capillaire précisément entre les hémisphères, en restant à l'intérieur du ventricule juste après avoir percé la couche dorsymale dorsal. REMARQUE: C'est une étape très délicate. La précision de cette procédure est améliorée en utilisant des lignes mutantes de pigmentation telles que brassy24, permettant une meilleure visualisation de la position capillaire en verre pendant l'injection.</li>
	<li>Avec la pointe capillaire à l'intérieur du ventricule, injecter la solution plasmide en appliquant une pression avec la pédale du pied pendant environ 10 s, ce qui correspond à environ 1 l de solution plasmide. REMARQUE: Si vous modifiez le pulleur d'aiguille, les capillaires ou l'injecteur, le système doit être calibré afin de toujours fournir 1 l de solution plasmide. L'étalonnage peut être effectué en mesurant le diamètre de la gouttelette de plasmide expulsée dans une huile minérale (p. ex. huile de paraffine) et en calculant par la suite le volume de la gouttelette. Après 10 s d'injection, il devrait y avoir 1 l de liquide plasmide expulsé dans l'huile minérale.</li>
	<li>Confirmer le succès de l'étape précédente en observant la propagation du liquide dans tout le ventricule.</li>
</ol>5. Électroporation
<ol><li>Retirer le poisson de la mise en place d'injection tout en le tenant dans l'éponge.</li>
	<li>Immerger le côté intérieur de la pointe des électrodes dans le gel à ultrasons.</li>
	<li>Couvrir le poisson telencephalon avec une petite quantité de gel à ultrasons.</li>
	<li>Placez la tête du poisson entre les électrodes, en plaçant l'électrode positive du côté ventral de la tête du poisson et l'électrode négative du côté dorsal (figure 1C), tout en tenant le corps du poisson dans l'éponge. Cela définit la direction du flux du courant nécessaire à l'électroporate épendymoglia positionné à la zone sous-ventriculaire.</li>
	<li>Appuyez doucement et précisément contre le telencephalon (Figure 1C). Administrer le courant avec la pédale du pied. Maintenez les électrodes en place jusqu'à ce que les cinq impulsions soient terminées.</li>
</ol>6. Récupération des poissons
<ol><li>Laissez le poisson récupérer dans le réservoir préalablement préparé et continuellement aéré jusqu'à ce qu'il se réveille. Gel de lidocaïne pourrait être appliqué sur le crâne afin de soulager toute douleur éventuellement développée.</li>
</ol>

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</ol>

Les auteurs n'ont rien à divulguer.

Ce protocole d'électroporation est une méthode in vivo fiable d'étiquetage des cellules ependymoglial individuelles. Le protocole peut avoir besoin d'une autre adaptation pour étiqueter d'autres types de cellules comme les neurones ou les oligodendrocytes. Pour réussir l'étiquetage, des plasmides contenant différents promoteurs peuvent être utilisés. Chicken-bêta actin promoteur, eF1alpha, CMV et ubiquitin promoteur ont déjà été utilisés pour conduire l'expression de différents transgènes dans ependymoglia et leur progén...

Les poissons zèbres sont d'excellents modèles animaux pour examiner la régénération du cerveau après une blessure au couteau. Par rapport aux mammifères, sur l'échelle évolutive, les espèces moins évoluées telles que le poisson zèbre montrent généralement des taux plus élevés de neurogenèse constitutive et de zones plus larges de résidence de cellules souches neurales adultes, conduisant à la génération constante de nouveaux neurones tout au long la plupart des zones du cerveau dans la vie adulte. Cette caractéristique semble être en corrélation avec la capacité régénératrice significativement plus élevée du poisson zèbre par rapport aux mammifères1, car le poisson zèbre a un potentiel remarquable pour générer efficacement de nouveaux neurones dans la plupart des modèles de lésions cérébrales étudiés2, 3,4,5,6,7,8. Ici, le ténèbre telencephalon est étudié, car il s'agit d'une zone du cerveau avec une neurogenèse proéminente à l'âge adulte. Ces zones de neurogenèse adulte sont homologues aux zones neurogènes dans le cerveau des mammifères adultes9,10,11.
Les zones neurogènes abondantes dans le téencéphale de poisson-zèbre sont présentes en raison de l'existence de gliales radiales comme les cellules ou les cellules d'éparymoglia. Les cellules ependymoglial agissent en tant que cellules souches neurales adultes résidentes et sont responsables de la génération de nouveaux neurones dans le cerveau intact et régénérant3,5. Les expériences de traçage de lignée ont montré que les éparggies ventriculaires réagissent aux blessures, puis prolifèrent et génèrent de nouveaux neuroblastes qui migrent vers le site de lésion5. En raison de la nature everted du téleencéphalon de poisson-zèbre, les cellules ependymoglial tapissent la surface ventriculaire et construisent la paroi ventriculaire ventrale. La paroi ventriculaire dorsal est formée par une couche cellulaire ependymale dorsal (Figure 1A). Fait important, le poisson zèbre ependymoglia incarne les caractéristiques des cellules radiales et des cellules éparymatiques des mammifères. Les longs processus radiaux sont une caractéristique typique des cellules de la gliale radiale, tandis que les extensions cellulaires et les jonctions serrées (ainsi que leurs positions ventriculaires) sont des caractéristiques typiques des cellules éparymales12,13,14. Par conséquent, ces cellules sont appelées cellules éparymoglial.
Pour suivre le comportement in vivo des cellules ependymoglial simples pendant la régénération, elles doivent être étiquetées de manière fiable. Diverses méthodes d'étiquetage cellulaire in vivo pour la microscopie fluorescente ont déjà été décrites, telles que les reporters endogènes ou les colorants lipophiles15. Ces méthodes, contrairement à l'électroporation, peuvent nécessiter de plus longues périodes de temps et souvent n'offrent pas la possibilité d'étiquetage à cellule unique ou de traçage permanent à long terme. L'électroporation, cependant (en plus de l'étiquetage à cellule unique), offre la possibilité d'introduire un nouvel ADN dans la cellule hôte. En outre, par rapport à d'autres méthodes de transfert d'ADN dans les cellules, l'électroporation a été démontrée comme l'une des méthodes les plus efficaces16,17,18,19.
Présenté ici est un protocole d'électroporation qui a été affiné dans le but d'étiqueter les cellules ependymoglial unique dans le ténencéphale de poisson zèbre adulte. Ce protocole permet l'étiquetage des cellules éparymoglial simples afin de les suivre sur une période à long terme20 ou de manipuler des voies spécifiques d'une manière cellulaire-autonome21,22.

<table><tbody><tr><td><fort>réactif/matériel</fort></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>rapide vert</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F7258-25G</td><td>Pour la coloration de la solution plasmidique</td></tr><tr><td>MS222</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5040-25G</td><td>MS222 doit être stocké à RT (jusqu’à deux semaines) et protégé de la lumière</td></tr><tr><td>Gel à ultrasons</td><td>SignaGel, Parker laboratories INC.</td><td>15-60</td><td>Électrode Gel</td></tr><tr><td><fort>Équipement</fort></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pompe à air</td><td>TetraTec APS 50, 10l-60l</td><td></td><td>Peut être acheté dans les animaleries</td></tr><tr><td>BTX Pince à épiler Électrodes</td><td>Pince à épiler en platine, BTX Harvard Appareil</td><td>45-0486</td> Dispositif d’électroporation <td>de 1 mm de diamètre</td></tr><tr><td></td><td>BTX ECM830 Système d’électroporation à ondes carrées, BTX Harvard Apparatus</td><td>45-0662</td><td></td></tr><tr><td>Dispositif d’injection</td><td>FemtoJet 4i, Eppendorf</td><td>5252000013</td><td></td></tr><tr><td>Standard Wall Borosillicate Glass Capillary</td><td>Warner Instruments</td><td>64-0766</td><td>Modèle : G100-4</td></tr><tr><td>Microloader tips</td><td>Eppendorf</td><td>5242956003</td><td></td></tr><tr><td>Micro-knife</td><td>Fine Science Tools</td><td>10056-12</td><td></td></tr><tr><td>Micromanipulateur</td> <td>à joystickNarishige Japan</td><td>MN - 151</td><td></td></tr><tr><td>Porte-aiguille</td><td>FemtoJet 4i, Eppendorf</td><td>5252000013</td><td>Le porte-aiguille est assemblé avec le dispositif d’injection</td></tr><tr><td>Dispositif de traction d’aiguille</td><td>Narishige Japan</td><td>N° de modèle : PC-10</td><td>Le PC-10 a été abandonné par Narishige en 2017 et remplacé par les</td></tr><tr><td>boîtes de Pétri</td> PC-100 <td>Greiner Bio-One International</td><td>633161</td><td></td></tr></tbody></table>

méthode d'électroporation pour la livraison in vivo de l'adn de plasmid dans le telencephalon adulte de poisson zèbre

Electroporation Method for In Vivo Delivery of Plasmid DNA in the Adult Zebrafish Telencephalon

L'électroporation est une méthode de transfection dans laquelle un champ électrique est appliqué aux cellules pour créer des pores temporaires dans une membrane cellulaire et augmenter sa perméabilité, permettant ainsi l'introduction de différentes molécules dans la cellule. Dans cet article, l'électroporation est utilisée pour introduire des plasmides aux cellules éparymogliales, qui tapissent la zone ventriculaire du ténaudif zèbre adulte. Une fraction de ces cellules montre des propriétés de cellules souches et génère de nouveaux neurones dans le cerveau du poisson zèbre; par conséquent, l'étude de leur comportement est essentielle pour déterminer leurs rôles dans la neurogenèse et la régénération. L'introduction de plasmides par électroporation permet l'étiquetage à long terme et le suivi d'une seule cellule éparymoglial. En outre, les plasmides tels que Cre recombinase ou Cas9 peuvent être livrés à des cellules éparymogliales uniques, ce qui permet la recombinaison ou l'édition de gènes et offre une occasion unique d'évaluer la fonction génétique autonome de la cellule dans un système contrôlé, naturel l'environnement. Enfin, ce protocole détaillé d'électroporation étape par étape est utilisé pour obtenir l'introduction réussie des plasmides dans un grand nombre de cellules éparymogliales simples.

La méthode d'électroporation décrite permet la livraison de l'ADN plasmide dans les cellules éparymogliales, qui sont situées superficiellement dans le téencéphale de poisson zèbre et juste sous la couche de cellules ependymales dorsales (Figure 1A).
Si le résultat de l'électroporation est positif, les cellules épendymoglial simples étiquetées (cellules rouges dans la figure 2A,B)pe...

Présenté ici est une méthode d'électroporation pour la livraison d'ADN plasmide et l'étiquetage des cellules épendymogliales dans le téncephalon de poisson zèbre adulte. Ce protocole est une méthode rapide et efficace pour visualiser et tracer les cellules ependymoglial individuelles et ouvre de nouvelles possibilités d'appliquer l'électroporation à un large éventail de manipulations génétiques.

Méthode d'électroporation pour la livraison in vivo de l'ADN de Plasmid dans le Telencephalon adulte de poisson zèbre

Electroporation is a transfection method in which an electrical field is applied to cells to create temporary pores in a cell membrane and increase its ...

Ce protocole permet l’étiquetage des cellules ependymoglial individuelles dans le télencéphale de poisson zèbre pour permettre leur surveillance à long terme, aussi bien que la manipulation des voies spécifiques d’une manière cellule-autonome. Le principal avantage de cette technique est qu’elle permet l’étiquetage d’une seule cellule de manière rapide et efficace, ainsi que l’édition de gènes et la manipulation des voies de signalisation de manière autonome. Cette méthode permet d’étude des questions fondamentales de biologie cellulaire, par exemple, sur la délamination cellulaire, le maintien de l’homéostasie épithéliale et la symétrie de la division cellulaire.Commencez par utiliser un appareil de traction d’aiguilles pour préparer des capillaires en verre. Utilisez des pointes de microchargeur pour remplir un capillaire en verre préparé de dix microlitres de solution plasmide. Ensuite, appuyez sur le menu changer capillaire"sur le dispositif d’injection pour permettre à l’aiguille d’être chargé dans le porte-aiguille.Ensuite, passez du dispositif d’injection du capillaire de changement au mode d’injection. Ensuite, à l’aide d’un stéréomicroscope avec un grossissement quatre fois, et finden forceps, couper seulement la pointe du capillaire. Ensuite, appliquez une pression sur la pédale pour confirmer que les solutions plasmides s’épuisent facilement de l’aiguille sans entrave.Lorsque l’aiguille est prête, transférer un poisson zèbre du réservoir d’élevage dans un récipient de solution anesthésique. Et attendre quelques minutes jusqu’à ce que le mouvement des branchies s’apaie. Appuyez sur le côté dorsal du poisson sous sedated vers le haut sur une éponge pré-mouillée sous le stéréomicroscope, et utilisez un microknife disséquant en acier inoxydable avec un bord de coupe de 40 millimètres et une épaisseur de 0,5 millimètre pour créer soigneusement un petit trou dans le crâne de poisson sur le côté postérieur du telencéphalon, juste à côté de la bordure du tectum optique.Inclinez le poisson au besoin et orientez la pointe du capillaire en verre vers le crâne dans l’angle correct pour faciliter la pénétration de la pointe capillaire à travers le trou. Ensuite, insérez très soigneusement la pointe du capillaire dans le trou à travers la couche dorsale des cellules épendymales, jusqu’à ce qu’elle atteigne le ventricule télencéphale, et appliquez une pression sur la pédale pendant environ 10 secondes pour délivrer environ 1 microlitre de la solution plasmide. Le succès de la livraison peut être confirmé en observant la propagation du liquide vert dans tout le ventricule.Couvrir le télencéphale de poisson avec une petite quantité de gel à ultrasons. Pour l’électroporation de l’animal injecté par plasmide, retirez l’éponge de l’injection et plongez le côté intérieur des électrotips dans le gel à ultrasons. Placez la tête de poisson entre les électrodes, avec l’électrode positive sur le côté ventral de la tête et l’électrode négative sur le côté dorsal.Puis, tout en tenant le corps du poisson dans l’éponge, appuyez sur les électrodes doucement et précisément contre le télencéphale et administrer le courant avec la pédale, en maintenant les électrodes en place jusqu’à ce que les cinq impulsions soient terminées. Si l’électroporation est réussie, des cellules ependymoglial simples étiquetées plasmides peuvent être observées parmi les cellules ependymoglial non plasmides étiquetées. Selon l’efficacité du processus d’électroporation, un nombre plus élevé ou inférieur de cellules épendymogliales peut être étiqueté.Néanmoins, le protocole démontré donne un plus grand nombre de cellules étiquetées que les protocoles précédemment publiés. Notez que la plus forte densité de cellules étiquetées tend à émerger principalement du côté ventriculaire intérieur des deux hémisphères en raison de la façon dont le liquide plasmide injecté se répartit entre les hémisphères. Dans cette vidéo, un hémisphère du télencéphale de poisson zèbre est présenté en 3D, où les cellules épendymoglial avec des processus radio, sont dans le magenta une fois observés du côté.Par co-électroporation avec un autre plasmide qui étiquette les noyaux, la division cellulaire des cellules épendymoglial peut être observée. L’électroporation infructueuse entraîne un nombre très faible ou aucune cellule épendymoglial étiquetée. Les cellules épendymales dorsales, cependant, sont les plus susceptibles d’être étiquetées.Leur soma est plus grand dans cuboïde et ils ne possèdent pas de processus radio-allongés comme évident d’une vue latérale de la couche cellulaire épendymoglial. les cellules étiquetées tdTomato-mem sont très probablement des cellules épendymales, qui sont situées au-dessus de la couche d’ependymoglia. En revanche, l’introduction d’un tdTomato-mem exprimant le plasmide aux cellules ependmyoglial individuelles a comme conséquence l’expression de tdTomato-mem en plus de l’étiquetage initial de cellules.Les choses les plus importantes à retenir sont de couper seulement la pointe du capillaire et de pénétrer la couche épendymale tout en injectant de sorte que le liquide se propage dans tout le ventricule. Cette technique permet la surveillance à long terme des cellules ependymoglial simples par imagerie in vivo, et donc établir leur rôle dans la régénération du cerveau ainsi que leur vaste lien génétique in vivo.

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Research

Recherche

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologie du développement

La vidéo montre le présent une méthode qui prend avantage de la combinaison de l'électroporation et la microscopie confocale pour l'imagerie en direct sur chaque cellules progénitrices neurales dans le cerveau antérieur poisson zèbre en développement.

Imagerie time-lapse en direct de relation clonale cellules progénitrices neurales dans le cerveau antérieur développement Zebrafish

La résolution temporelle et spatiale des manipulations génétiques qui détermine le spectre des phénomènes biologiques qui peuvent perturber. Ici, nous utilisons temporellement et spatialement...

Cibler les neurones Bulbe olfactif Utiliser combiné In Vivo L&#39;électroporation et de Gal4-Based Enhancer Piège Lignes Zebrafish

Une méthode pour l'expression conditionnelle knockdown une protéine cible dans la rétine de poisson zèbre adulte est décrite, qui consiste à injecter par voie intravitréenne morpholinos antisens et les électroporation dans la rétine. La protéine résultante est assommée pendant plusieurs jours, ce qui permet de tester le rôle de la protéine dans la régénération ou de la rétine intacte.

En électroporation in vivo de morpholinos dans la rétine de poisson zèbre adulte

Nous décrivons une méthode pour conditionnellement knockdown l'expression d'une protéine cible lors de la régénération du poisson zèbre nageoire adulte. Cette technique consiste à micro-injection et électroporation morpholinos oligonucléotide antisens dans le tissu fin, ce qui permet de tester le rôle de la protéine à différents stades de la régénération des nageoires, y compris la cicatrisation des plaies, de la formation blastème, et l'excroissance de régénération.

En électroporation in vivo de morpholinos dans la régénération des adultes Zebrafish Tail Fin

Cette vidéo décrit l’électroporation in vivo, qui est une technique de livraison d’ADN dans les cellules épendymogliales chez le poisson-zèbre adulte.

in vivo L’électroporation : une méthode spécifique au site pour transfecter le poisson-zèbre

Cette vidéo décrit la technique d’injection intramusculaire pour délivrer des composés dans les muscles dorsaux d’un poisson-zèbre adulte.

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Dans cet article, nous démontrons une méthode pour la manipulation de l'expression des gènes dans les cellules ventriculaires du télencéphale de poisson zèbre adulte en utilisant des oligonucléotides antisens morpholino. Nous présentons aussi un protocole efficace et rapide qui peut être utilisé pour des études fonctionnelles dans le cerveau des vertébrés adultes cette méthode.

Micromanipulation de l&#39;expression génique dans le cerveau de poisson zèbre adulte en utilisant microinjection Cerebroventricular d&#39;oligonucléotides Morpholino

Pour faire la lumière sur les mécanismes cellulaires et moléculaires de la neurogenèse et de la régénération du poisson zèbre adulte, nous avons développé un protocole de chirurgie invasive provoquant des lésions mécaniques chez le télencéphale adulte du poisson zèbre et le suivi ultérieur des changements dans l’hémisphère poignardé par immunohistochimie ou hybridation in situ.

Stab blessures plaies du poisson zèbre adulte Télencéphale: Une méthode pour étudier le cerveau des vertébrés neurogenèse et régénération

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Nous décrivons ici un protocole pour la vaccination de l’adulte poisson zèbre (Danio rerio) avec un vaccin à base d’ADN et de démontrer la validation d’un événement de vaccination réussie. Cette méthode convient pour la projection préclinique de vaccins candidats dans divers modèles d’infection.

Vaccination de poisson-zèbre adulte pour la projection préclinique des vaccins basés sur l’ADN

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Découvrez une méthode d'électroporation pour marquer des cellules épendymales individuelles dans le télencéphale de Danio rerio adulte. Cette technique permet le suivi à long terme et la manipulation de voies cellulaires spécifiques.

Méthode d'électroporation pour la livraison in vivo de l'ADN de Plasmid dans le Telencephalon adulte de poisson zèbre

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