Le bip basal biaxial et l'essai passif du système reproducteur de Murine utilisant un myographe de pression

Ce protocole étudie les propriétés mécaniques biaxiales des organes reproducteurs élucidant la contribution des cellules musculaires lisses et de la matrice passive. Cette technique maintient la géométrie d’organe et la cellule lisse indigène de muscle aux interactions de matrice permettant la subjection de l’organe à une gamme physiologique des pressions et des extensions axiales. L’étude de la fonction biaxiale d’organe sous des charges physiologiquement pertinentes peut aider à une meilleure compréhension de l’étiologie des pathologies reproductrices.

L’essai biaxially du col de l’utérus et du vagin fournit un aperçu dans les domaines de la santé des femmes et de la biomécanique. Des méthodes similaires sont utilisées pour étudier les vaisseaux sanguins, l’œsophage et les gros intestins. Lorsque vous travaillez avec un nouvel organe, il peut prendre du temps pour finaliser les détails techniques tels que la meilleure suture du tissu ou comment déterminer la longueur déchargée.

Pour recueillir le système reproducteur de l’animal expérimental, placez la souris sur un tampon absorbant sous un microscope disséquant et utilisez des pinces à épiler et des ciseaux inclinés pour soulever la peau autour de l’abdomen. Faire une incision initiale à la base de l’abdomen au-dessus de l’os pubien assez peu profond pour ne pas percer la paroi musculaire abdominale et continuer l’incision supérieurement vers la cage thoracique et profondément à travers les muscles abdominaux. Après avoir enlevé la graisse superficielle et soigneusement coupé la symphyse pubienne, utilisez des pinces droites pour saisir la vessie pour créer de la tension et utiliser la dissection émoussée pour séparer le tissu environnant du vagin.

Ensuite, coupez la base du système reproducteur pour enlever les tissus de la cavité du corps. Après avoir déterminé la canule de taille appropriée pour le système récolté, monter le côté cervical sur la partie transducteur de force du dispositif de cannulation et monter l’extrémité opposée de l’organe sur la partie micromètre de l’appareil. Serrez ensuite les deux extrémités avec des sutures.

Pour trouver la longueur déchargée du tissu monté, étirez d’abord l’organe de sorte que le mur ne soit pas en tension. Pour le vagin, observez les rainures sur la paroi vaginale. Pour le col de l’utérus, couper immédiatement sous les points d’encre situés au-dessus et au-dessous de la marque centrale du col de l’utérus.

Utilisez des étriers pour mesurer la longueur du système de la suture à la suture et augmenter la pression du système myographe de zéro à 10 millimètres de mercure en un millimètre d’incréments de mercure. La pression dans laquelle l’organe n’est plus effondré peut être déterminée comme le plus grand saut dans le diamètre extérieur à une pression donnée. Après avoir enregistré la pression et le diamètre extérieur, notez ces données comme le premier point où l’organe n’est pas effondré et zéro la force.

Pour trouver l’étirement in vivo expérimental, ajustez l’organe à la longueur in vivo estimée pendant la pression déchargée et cliquez sur commencer à évaluer la pression par rapport aux valeurs de force pour les valeurs de pression allant de la pression déchargée à la pression maximale. Cliquez ensuite sur arrêter et enregistrer le fichier. Pour le précomposition du diamètre de pression, réglez la pression à zéro millimètre de mercure, la longueur de la longueur expérimentale in vivo et le gradient à 1,5 millimètre de mercure par seconde.

Exécutez une séquence qui fait passer la pression de zéro millimètre de mercure à la pression maximale plus la pression déchargée, maintenez pendant 30 secondes et retournez à zéro millimètre de mercure avec une période d’attente supplémentaire de 30 secondes. Après avoir répété cette séquence pour un total de cinq cycles, cliquez sur arrêter et enregistrer le fichier. Pour le précon conditionnement de la longueur de la force, entrez 1/3 de la pression maximale plus la pression déchargée pour les pressions de l’entrée et de la sortie et ajustez l’organe à moins 2 % de la longueur in vivo.

Cliquez sur démarrer et ajuster la longueur à plus 2% de longueur vivo et revenir à moins 2% à un taux de 10 micromètres par seconde. Répétez l’extension axial pour un total de cinq cycles avant de cliquer sur arrêter et enregistrer le fichier. Pour les essais de diamètre de pression de la longueur in vivo, cliquez sur démarrer et ajuster l’organe à la longueur in vivo, réglez la pression à zéro millimètre de mercure, et réglez le gradient à 1,5 millimètre de mercure par seconde.

Augmentez la pression de zéro millimètre de mercure à la pression maximale avant de ramener la pression à zéro millimètre de mercure avec une période d’attente de 20 secondes. Répétez ensuite le test pendant cinq cycles avant d’arrêter le système et d’enregistrer les données. Pour l’essai de longueur de force de 1/3 de la pression maximale plus la pression déchargée, réglez la pression à 1/3 de la pression maximale plus la pression déchargée et ajustez l’organe à moins 2% de la longueur in vivo.

Après avoir cliqué sur le début, étirer l’organe à plus 2% de la longueur in vivo et revenir à moins 2% de la longueur in vivo à un taux de 10 micromètres par seconde. Répétez ensuite le test pendant un total de trois cycles avant d’arrêter le système et d’enregistrer les données. Après le dernier test, retirer le milieu d’essai KRB et laver l’organe avec un milieu KRB sans calcium.

Après le lavage, incuber l’organe avec une solution KRB fraîche sans calcium complétée par un EGTA de deux millimolaires pendant 30 minutes avant de remplacer la solution de traitement par du KRB frais sans calcium. À la fin de l’essai de tonalité basale, pour le pré-conditionnement du diamètre de pression, cliquez sur démarrer et réglez la pression à zéro millimètre de mercure, la longueur comme la longueur in vivo estimée, et le gradient à 1,5 millimètres de mercure par seconde. Commencez à exécuter une séquence qui prend la pression de zéro millimètre de mercure à la pression maximale et de retour à zéro millimètres de mercure.

Répétez ce processus à travers cinq cycles avec un temps d’attente de 30 secondes. Pour le précomposition de la longueur de la force, réglez l’organe à la longueur in vivo et entrez manuellement la pression déchargée pour les deux pressions. Cliquez sur démarrer et réglez le gradient à 1,5 millimètre de mercure et la pression à 1/3 du maximum.

Étirez l’organe jusqu’à plus de 2% et reculez à moins 2% d’étirement à 10 micromètres par seconde et répétez le cycle pour un total de cinq fois. Pour les essais de diamètre de pression, avec l’organe à moins 2% de la longueur in vivo déterminée expérimentalement et la pression à zéro millimètre de mercure, cliquez sur démarrer et augmenter la pression de zéro millimètre de mercure à la pression maximale et de retour à zéro millimètres de mercure. Maintenez l’étape zéro millimètre de mercure pendant 20 secondes et répétez le cycle cinq fois.

Pour l’essai de longueur de force, réglez la pression à une pression nominale et ajustez l’organe à moins 2% de la longueur in vivo. Étirez l’organe jusqu’à plus de 2% de la longueur in vivo et revenez à moins 2% de la longueur in vivo à un taux de 10 micromètres par seconde. Après un total de trois cycles, enregistrez les données et répétez les essais de longueur de force pour 1/3 de la pression maximale, 2/3 de la pression maximale et à la pression maximale.

Pour une analyse réussie des propriétés mécaniques des organes reproducteurs féminins, il est impératif d’explanter les cornes utérine au vagin sans aucun défaut. Selon le type d’organe, la taille de la canule varie. La cannulation doit être effectuée de sorte que l’organe ne peut pas se déplacer pendant l’expérience, mais sans endommager la paroi de l’organe pendant la procédure.

Le système de myographie sous pression peut être utilisé pour surveiller divers aspects de l’organe car il subit des tests mécaniques et le système d’échographie peut être utilisé pour mesurer l’épaisseur des organes à l’état déchargé avec et sans tonus basal. Après des essais mécaniques, le moduli tangente peut être calculé pour les directions circonférentielles et axiale. Les tests de tonalité basale et les tests passifs produisent les propriétés mécaniques clés de l’appareil reproducteur avec et sans la contribution contractile des cellules musculaires lisses.

Mise à l’échelle entre les organes nécessite quelques ajustements aux protocoles que le col de l’utérus et le vagin éprouvent différentes charges in vivo. Il est essentiel d’effectuer la dissection rapidement pour maintenir la viabilité des cellules musculaires lisses, mais soigneusement de ne pas percer l’organe désiré. Les expériences d’angle d’ouverture qui mesurent la souche résiduelle de l’organe peuvent être effectuées après des procédures d’essai mécaniques ainsi que divers essais histologiques et biochimiques.

Après son développement et l’étude de la contribution basale lisse de cellules de muscle, cette technique permet également d’évaluer la réponse contractile maximale de muscle lisse du système reproducteur sous des charges physiologiquement pertinentes.