Caractérisation de sickling pendant la désoxygénation automatisée contrôlée avec l'ektacytométrie de gradient d'oxygène

L’ektacytometry de gradient d’oxygène est un essai fonctionnel qui évalue la tendance maladive individuelle. À ce jour, aucun autre test fonctionnel n’est disponible ou utilisé. L’ektacytométrie de gradient d’oxygène est capable de déterminer la tension d’oxygène à laquelle les cellules sanguines du patient présentant la drépanocytose commencent à fauciller.

Cette tension d’oxygène est patient-spécifique et elle peut servir de biomarqueur pour la sévérité de la maladie. Dans la drépanocytose, cette technique peut être utilisée pour surveiller l’efficacité du traitement et elle peut être utilisée pour le développement de nouveaux traitements. La démonstration visuelle de cette technique est importante parce qu’elle est très sensible.

Il ya de nombreux facteurs qui influenceront la mesure que vous ne savez pas quand vous commencez à travailler avec cette technique. Quelqu’un qui essaie cela pour la première fois peut éprouver que la technique est très sensible pour la préparation de l’échantillon et la manipulation de l’échantillon. Mon conseil est de travailler le plus normalisé possible et de développer une routine.

Pour commencer cette procédure, allumez l’ordinateur et l’ektacytomètre et ouvrez le logiciel sur l’ordinateur. Ouvrez le cylindre d’azote pour vous assurer que l’azote est disponible pour désoxygénérer l’échantillon. Abaissez le bob dans la tasse et assurez-vous que la tasse peut tourner librement.

Lorsque le logiciel est en cours d’exécution, vérifiez le message assurez-vous que la vanne de gaz est ouverte et cliquez sur OK. Assurez-vous que l’ektacytomètre démarre le processus d’auto-vérification et sélectionnez démarrer. Si l’auto-vérification échoue, rééditez-la en cliquant sur vérification matérielle, pO2, auto-vérification. Choisissez l’analyse pO2 parmi les différents tests répertoriés sur la gauche.

Choisissez les paramètres à droite de l’écran et assurez-vous qu’ils sont définis selon les paramètres énumérés dans le tableau un du protocole de texte en s’assurant de garder les mêmes paramètres pour chaque mesure. Enregistrez ces paramètres en cliquant sur OK, puis en cliquant à nouveau sur OK. Tout d’abord, recueillir des échantillons de sang par venepuncture dans un tube contenant EDTA et stocker le sang à quatre degrés Celsius pendant un minimum de 30 minutes, mais pas plus de 24 heures.

Après cela, mélanger les échantillons doucement par inversion pour homogénéiser. Laissez les échantillons se réchauffer à température ambiante sur un banc à rouleaux avant la mesure. Utilisez un analyseur d’hématologie pour mesurer la nœur sanguine complète en plaçant l’aspiration dans le tube et en appuyant sur le bouton derrière l’aiguille de l’analyseur d’hématologie pour commencer la mesure et l’analyseur utilisera entre 20 et 200 microlitres de sang entier.

Ensuite, normalisez l’échantillon de sang entier à un compte rbc de 200 millions de globules rouges en cinq millilitres de PVP en calculant le volume de l’échantillon qui sera ajouté. Pour commencer, coupez une pointe de pipette et pré-mouiller en réutilisant le sang trois fois. Puis pipette le volume de l’échantillon calculé dans un flacon PVP.

Mélanger délicatement l’échantillon manuellement par inversion jusqu’à ce qu’il soit homogène. Dessinez lentement deux millilitres du sang et du mélange de PVP dans une seringue de trois millilitres sans l’aiguille. Poussez le piston pour enlever les bulles d’air visibles et la solution d’échantillon excédentaire jusqu’à ce qu’entre 1,5 et 1,8 millilitres soient laissés dans la seringue.

Injectez le volume total de l’échantillon lentement et uniformément dans le bob à travers le connecteur. Assurez-vous que le niveau de l’échantillon est au-dessus du capteur d’oxygène et du petit trou d’aspiration. Dans le logiciel, cliquez neuf et remplissez l’identificateur de l’échantillon, les remarques, la date de don et la viscosité du PVP.

Cliquez sur OK et aspirer. Après 60 secondes d’aspiration, la tasse tourne et aspire à nouveau pendant 15 secondes. Lorsque la rotation s’arrête, cliquez sur OK. Fermez le couvercle de la machine.

Cliquez continuer et commencer maintenant que l’ektacytometry gradient d’oxygène est fait avec un gain fixe. Après la mesure, imprimez le rapport qui montre la courbe et les paramètres qui sont automatiquement calculés par le logiciel. Assurez-vous que les données brutes sont stockées automatiquement dans le dossier désigné dans les paramètres.

Tout d’abord, retirez la seringue de l’échantillon et remplacez-la par une seringue remplie d’eau distillée ou d’eau déionisée. Appuyez sur nettoyer et rincer lentement le connecteur pendant le rinçage en vous assurant de rincer dans les deux directions. Ensuite, retirez la seringue et soulevez le bob.

Utilisez un chiffon souple pour bien sécher le bob et le connecteur. Ensuite, utilisez une grande seringue pour rincer le connecteur afin d’enlever toute l’eau restante dans le tube et bob. Gardez la seringue à l’entrée et bloquez la sortie du bob pour récupérer la pression dans les tubes, en enlevant ainsi le reste de l’eau.

Ensuite, séchez la tasse tout en évitant de toucher la tache d’oxygène. Abaissez le bob et la tasse préparant la machine pour la prochaine mesure. Après s’être assuré que la machine est correctement rincée, vérifiez que les tubes appropriés se rapportent à la solution de nettoyage.

Fermez le logiciel, appuyez sur fermer, et appuyez sur commencer le programme de nettoyage de fin de journée. Puis videz la bouteille de déchets et utilisez un chiffon doux pour sécher le bob et la tasse. Fermez le couvercle de la machine.

Fermez le cylindre d’azote et éteignez l’ordinateur et la machine. L’ektacytométrie du gradient d’oxygène peut être utilisée pour étudier le comportement écœurant des globules rouges sous une gamme de concentrations d’oxygène. Dans l’ektacytométrie du gradient d’oxygène, la désoxygénation continue de l’échantillon par le gaz azoté est suivie d’une réoxygénation rapide par l’air ambiant.

Dans ces conditions, la maladie des globules rouges peut être observée sous désoxygénation. Cela provoquera une distorsion du modèle de diffraction parce que les globules rouges écœurés ne s’aligneront pas correctement sous le stress de cisaillement appliqué. Les globules rouges faucilles montrent un changement de forme lors de la désoxygénation qui imite les conditions pendant l’ektacytométrie du gradient d’oxygène, mais ne montrent aucun changement de forme lorsqu’ils sont oxygénés.

Ce processus entraîne une distorsion du modèle de diffraction pendant l’ektacytométrie du gradient d’oxygène et donc une diminution de l’indice d’allongement. Une courbe représentative obtenue par l’ektacytomètre montre les six paramètres qui reflètent différentes caractéristiques du comportement des écœurs : l’indice d’allongement maximal, l’indice minimum d’allongement, l’IE delta, le point de maladif, la zone sous la courbe et la récupération. Des courbes représentatives des globules rouges des contrôles sains, des patients présentant des traits d’HbS, et d’un patient homozygous de drépanocytose sont montrées ici.

Les différences claires dans les courbes représentatives des patients homozygotes de drépanocytocytisme traités avec l’urée hydroxyle et la transfusion accentuent l’utilité de cet essai. Il existe de nombreux facteurs qui influencent l’ektacytométrie du gradient d’oxygène comme la température, le pH et l’osmolarité du PVP, mais aussi des restes d’eau et le degré de mélange de la solution d’échantillon de sang peut affecter les mesures. Par conséquent, la manipulation normalisée de l’échantillon est essentielle.

Les résultats de l’ektacytometry de gradient d’oxygène peuvent être directement mis en œuvre dans la pratique clinique, contribuant ainsi à la médecine personnalisée. Cette technique permet d’étudier le comportement des malades pour étudier le potentiel de nouveaux traitements pour la drépanocytose et peut servir de biomarqueur cliniquement pertinent pour la gravité de la maladie.