Normalisation d'une méthode non létale pour caractériser l'état reproducteur et le développement larvaire des moules d'eau douce (Bivalvia: Unionida)

Notre protocole normalise les méthodologies d’échantillonnage des branchies des moules d’eau douce gravides et de caractérisation des différentes étapes du développement larvaire, tout en fournissant une base de données en ligne pour la soumission de données et l’exploration de l’Almanach gravidité. La technique n’est pas létale et n’affecte pas considérablement la capacité d’une moule femelle à rester gravid après l’échantillonnage des branchies, donc la méthode peut être appliquée à la fois aux espèces communes et protégées. Cette méthodologie peut être appliquée aux organismes caractérisés dans les familles bivalvia de Hyriidae, Margaritiferidae et Unionidae, qui sont répartis dans les écosystèmes d’eau douce de tous les continents, à l’exception de l’Antarctique.

Il est important d’ouvrir les moules avec soin, de recueillir des renseignements sur l’emplacement et de s’assurer que les données sont recueillies correctement. Si les identifications sont douteuses, il faut prendre des photos et contacter les experts appropriés. Commencez par recueillir des moules vivantes sur le terrain à l’aide de méthodes visuelles tactiles.

Évaluer la gravidité féminine par inspection visuelle pendant ou après la collecte en ouvrent doucement les vannes juste assez pour regarder à l’intérieur et voir si les branchies sont gonflées. Si vous utilisez un spécimen conservé d’un musée, effectuez une inspection visuelle en ouvrant les vannes et en inspectant les branchies. Pour échantillonner la teneur en branchies, préparez un tube de collecte de microcentrifugeuses en plastique de 1,5 millilitre avec environ un millilitre d’eau ou d’éthanol, selon le moment où l’évaluation aura lieu.

Déballez une aiguille stérile à pointe biseautée de calibre 30 sur une seringue de 10 millilitres, dévissez le bouchon pour exposer l’aiguille et poussez la poignée de la seringue vers le bas de sorte que le bouchon est à la ligne de zéro millilitre. Ramasser la femelle gravid et ouvrir doucement les deux valves à l’aide du bout des pouces. Utilisez la pointe de l’aiguille pour pénétrer doucement dans un seul tube d’eau de la branchie marsupial gonflée, puis ramasser doucement le contenu des branchies avec la pointe biseauté de l’aiguille.

Conservez-les dans le tube de microcentrifugeuse préparé pour une évaluation ultérieure. Enregistrez les renseignements pertinents, comme l’identification des espèces de genre, les renseignements sur l’emplacement de la collecte et l’état de gravidité sur la fiche de données, et enregistrez un identificateur unique sur chaque navire de collecte afin d’assurer des enregistrements de données exacts pendant le transport. Orientez correctement la moule pour photographier la bonne valve pour la validation d’identité, mentez-la et prenez la photo, en vous assurant d’inclure le tube d’échantillon étiqueté dans l’image.

Pour évaluer le contenu des branchies, transférez-les dans une boîte de Pétri et remplissez le fond du plat d’eau. Faites pivoter doucement le plat pour recueillir le contenu au centre pour une vue plus concentrée de l’échantillon. Placez la boîte de Pétri sous un microscope à dissection pour évaluer l’échantillon et, si possible, prenez une photo de l’échantillon au microscope.

Enregistrez les résultats dont les stades de développement sont présents dans chaque échantillon maillant. Si les femelles couvent les larves à plusieurs stades de développement, signalez chaque stade de développement observé dans un échantillon donné. Si des glglochidies entièrement développées sont identifiées et que l’éthanol n’a pas été utilisé pour la conservation, évaluez leur viabilité en ajoutant un cristal de chlorure de sodium à une gouttelette sous-ensemble de l’échantillon maillant.

Glochidia viable répondra en ouvrant et en fermant leurs vannes ou simplement en les fermant d’une position ouverte. Signalez toute glochidie testée au sel avec un T à la fin de la désignation lorsque les données sont enregistrées. Pour signaler les données, accédez à la page FMGA ou à l’application mobile et enregistrez les résultats dans le formulaire de saisie de données à l’aide de menus d’abandon et de champs d’entrée de texte.

Pour les grands ensembles de données préexistants, contactez les auteurs pour la feuille de calcul du modèle. Entrez les données enregistrées sous les rubriques de colonne appropriées, en gardant à l’esprit que chaque ligne de la feuille de calcul représente les observations d’un échantillon maillant d’une personne gravid, puis soumettez les résultats et ils seront ajoutés à la base de données FMGA après avoir été validés par un administrateur, qui peut contacter le collecteur pour demander plus de détails ou de photos. La base de données FMGA compile toutes les informations soumises et permet à l’utilisateur de visualiser les données de gravidité temporelle pour toutes les espèces de la base de données.

L’Almanach gravidité des moules d’eau douce est un outil de recherche conçu pour normaliser la collecte de données sur la gravidité tout en facilitant les efforts futurs de recherche, de conservation et de rétablissement. Le protocole d’échantillonnage des branchies a été évalué en étiqueter et en récapitulant les femelles à intervalles mensuels tout au long de l’année. Bien que la taille des échantillons dans l’étude soit inégale d’une espèce à l’autre, les résultats mettent en évidence les applications bénéfiques et pratiques de ce protocole.

Le calendrier gravidity pour Villosa lienosa montre que des femelles gravid couvant des glochidia entièrement développées ont été trouvées dans presque tous les mois de l’année excepté août, quand seulement des femelles couvant des masses d’oeuf ont été trouvées. Hamiota australis femelle ont été trouvés non gravid en Juillet, Août, et Décembre. Une plus grande proportion de femelles couvaient des glochidies entièrement développées en janvier et février et en octobre et novembre.

Aucun individus d’Elliptio pullata n’a été trouvé couvant la glochidia entièrement développée, bien que les femelles couvaient des masses d’oeuf de mai à juin. Une seule femelle Strophitus williamsi a été trouvée et capturée trois fois. Cette femelle a été trouvée couvant la glochidia entièrement développée en mars, pas gravid en mai, a rapporté gravid en juin, et oeufs couvants en août.

Des femelles gravid de Villosa vibex couvant des glochidies entièrement développées ont été trouvées entre février et juin. Les moules d’eau douce sont un groupe d’organismes très en péril. Cette méthodologie est importante parce qu’elle fournit un moyen non létal d’évaluer les caractéristiques reproductrices des espèces en péril.

Il est essentiel de manipuler les moules avec soin. Les conditions environnementales, telles que la température de l’eau et les débits des cours d’eau, peuvent être mesurées sur le terrain afin de déterminer quelles conditions déclenchent le frai et le développement larvaire dans les moules d’eau douce. La compilation des données temporelles de gravidity pour toutes les espèces de moules d’eau douce peut aider des études dans l’épidémiologie, la morphologie glochidial, l’histoire de vie, la phylogénétique, la propagation, et la translocation.