Name: Isolement des cellules souches des cultures sphéroïdes tridimensionnelles (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-12-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 6 s
Description: Découvrez une méthode sans biomarqueur pour isoler des cellules souches quiescentes à partir de sphéroïdes tridimensionnels. Cette technique par marquage rétentif permet d'étudier la résistance thérapeutique dans le cancer de la prostate.

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Cette étude a été soutenue par des subventions du National Cancer Institute R01-CA172220 (GSP, WYH), R01-ES02207 (GSP, WYH). Nous remercions le Flow Cytometry Core de l'Université de l'Illinois à Chicago pour son aide sur le tri cellulaire.

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<li>Guan, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+in+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Autophagy%22%5BJournal%5D)">Autophagy in stem cells.</a> Autophagy. 9, 830-849 (2013).</li>
</ol>

Les auteurs n'ont pas de relations financières à divulguer.

La cytométrie de flux utilisant plusieurs marqueurs de surface de cellules souches est une approche couramment utilisée pour la recherche sur les cellules souches, bien qu'elle manque à la fois de spécificité et de sélectivité1,5,6. Tandis que la formation de sphéroïdes dans un système de culture 3D est une autre méthode utile en enrichissant la population rare de cellules souches des cellules épithéliales primaires, y compris H...

La prostate humaine contient l'épithélium luminal avec la fonction sécrétrice et les cellules basales la sous-jacente s'il y a un composant neuroendocrine peu commun de cellules. Les cellules épithéliales, dans ce cas, sont générées à partir d'une population rare de cellules souches de la prostate qui sont relativement calmes in vivo et agissent comme un système de réparation pour maintenir l'homéostasie glandulaire tout au long de la vie1. Malgré de nombreux progrès, l'identification et l'isolement fonctionnel des cellules souches de la prostate demeurent un défi majeur dans le domaine. Les biomarqueurs de cellules souches, y compris les méthodologies basées sur les marqueurs de surface cellulaire combinés à la cytométrie du débit sont couramment utilisés pour la recherche sur les cellules souches2,3,4. Cependant, les résultats pour l'enrichissement et l'isolement varient considérablement en fonction des combinaisons de marqueurs et de la spécificité d'anticorps5,6, soulevant des questions au sujet de l'identité des cellules isolées. Une autre approche largement utilisée pour l'enrichissement cellulaire de type souche est la culture sphéroïde tridimensionnelle (3D)2,3,4. Bien que les cellules souches résidentes soient relativement calmes in vivo avec des contraintes de niche, elles subissent une division cellulaire dans la culture de la matrice 3D (à la fois symétrique et asymétrique), générant à la fois des cellules souches et progénitrices qui se reproduisent rapidement vers l'engagement de lignée7,8. Les sphéroïdes formés sont un mélange hétérogène contenant à la fois des cellules souches et des cellules progénitrices à divers stades de l'engagement de la lignée, y compris les cellules progénitrices à un stade précoce et avancé. Ainsi, les essais utilisant l'ensemble des sphéroïdes ne sont pas exclusifs aux cellules souches, ce qui rend l'identification des propriétés uniques des cellules souches non concluante. Par conséquent, il est essentiel de créer des essais pour identifier et séparer les cellules souches de la prostate de leurs ancêtres filles. À cette fin, l'objectif du protocole actuel est d'établir un système d'analyse qui permet l'identification efficace et l'isolement des cellules souches des tissus de la prostate humaine suivies d'une analyse robuste en aval de leurs fonctions biologiques.
La rétention à long terme de l'étiquette 5-bromo-2'-deoxyuridine (BrdU) est largement utilisée pour le traçage in vivo et in vitro des cellules souches en fonction de leur temps de doublement prolongé9,10. L'approche actuelle pour l'identification et l'isolement de cellules souches de prostate décrites ci-dessus est basée sur leurs caractéristiques quiescentes relatives et leurs propriétés d'étiquette-rétention dans une population épithéliale mélangée. En outre, sur la base de l'hypothèse de l'ADN brin immortel, seules les cellules souches peuvent subir une division asymétrique des cellules. La cellule souche représente la cellule fille qui contient l'ADN parental plus ancien tandis que la cellule progénitrice, qui est une cellule fille engagée, reçoit l'ADN nouvellement synthétisé. La propriété unique de cellules souches décrite ci-dessus est exploitée pour effectuer l'étiquetage BrdU dans les cellules souches parentales dans les cultures primaires, puis suivre leur étiquette après BrdU-washout lors du transfert à la culture sphéroïde 3D sans ancrage. Tandis que la majorité des cellules épithéliales primaires de prostate maintiennent un phénotype basal et de transit amplifiant dans la culture 2D, il y a également une population rare de cellules souches multipotentes réapprovisionnant et maintenant l'homéostasie épithéliale comme démontré par la formation des sphéroïdes ou des organoïdes entièrement différenciés avec les médias de culture correspondants sur le transfert aux systèmes 3D3,12. Dans notre protocole actuel, en utilisant des sphéroïdes de la prostate HPrEC ou des tests de rétention BrdU, CFSE ou Far Red à base de prostasphere, suivis du tri des cellules activées par la fluorescence (FACS), nous identifions les cellules souches qui conservent l'étiquette dans les sphéroïdes à un seul niveau cellulaire13.
Fait important, nous avons confirmé en outre les caractéristiques des cellules souches des cellules de rétention d'étiquette dans les sphéroïdes à un stade précoce par rapport aux cellules progénitrices avec engagement de lignée. Ceux-ci incluent la division asymétrique de cellules souches, la capacité de formation sphéroïde in vitro et la capacité de régénération in vivo de tissu, l'activité élevée d'autophagie, la biogenèse augmentée de ribosome et l'activité métabolique diminuée. Par la suite, l'analyse de RNAseq a été exécutée. Des gènes exprimés différemment dans les cellules sphéroïdes qui conservent l'étiquette ont été observés qui peuvent servir de nouveaux biomarqueurs pour les cellules souches de la prostate humaine. Cette approche de conservation de l'étiquette à base de sphéroïdes peut s'appliquer aux échantillons de cancer afin d'identifier de la même façon un petit nombre de cellules souches cancéreuses, offrant ainsi des possibilités translationnelles de gérer les populations résistantes à la thérapeutique13. Présenté ci-dessous est le test de rétention d'étiquette à base de prostasphère à l'aide de cellules épithéliales primaires humaines de la prostate (HPrEC) à titre d'exemple.

<table><tbody><tr><td>0,05 % Trypsine-EDTA</td><td>Gibco</td><td>25300-054</td><td></td></tr><tr><td>Seringues à tuberculine de 1 mL Tubes</td> de microcentrifugation <td>Bectin Dickinson</td><td>BD 309625</td><td></td></tr><tr><td>1,5 mL, boîtes de culture stériles</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>de 100 mm Plaque</td> de culture <td>Corning/Falcon</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>12 puits Centrifugeuse</td><td>Corning/Falcon</td><td>353043</td><td></td></tr> de <tr><td>15 mL tubes</td><td>Corning/Falcon</td><td>352097</td><td></td></tr><tr><td>22 x 22 mm lamelles, carré</td><td>Corning</td><td>284522</td><td>Pour MatTek Plat de culture 35 mm</td></tr><tr><td>24 x lamelles de 50 mm</td><td>Corning</td><td>2975245</td><td></td></tr><tr><td>26G x 1,5 pouce Aiguille hypodermique</td><td>Monoject</td><td>1188826112</td><td></td></tr><tr><td>2N HCl</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>35 mm Plat de culture avec couvercle fond en verre</td><td>MatTek Corp</td><td>P35G-0-10-C</td><td>Fond en verre n° 0, non revêtu, <img src="/files/ftp_upload/60357/60357img1.jpg"> irradié</td></tr><tr><td>40 &amp;micro ; passoire à cellules en nylon poreux Corning</td><td></td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>Incubateur de culture à 5 % de CO2, 37 &amp;deg ; C</td><td>Forma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>50 mL tubes à centrifuger</td><td>Corning/Falcon</td><td>352098</td><td></td></tr><tr><td>5mL Tube à fond rond en polystyrène avec capuchon à pression</td><td>Corning</td><td>352235</td><td>35 &amp;micro ; </td></tr><tr><td>Plaques de culture à 6 puits</td> en maille de nylon <td>Corning</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>lames de chambre à 8 puits</td><td>Millipore Sigma</td><td>PEZGS0816</td><td></td></tr><tr><td>Milieu de montage aqueux contenant DAPI</td><td>Vector Laboratories</td><td>H-1200</td><td>A Enceinte</td></tr><tr><td>de sécurité biologique, certifiée</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BrdU (5-bromo-2'-désoxyuridine)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B5002</td><td>1 mM solution mère dans DMSO</td></tr><tr><td>Centrifugeuse pour tubes de microcentrifugation de 1,5 mL</td><td>Centrifugeuse Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pour tubes de 15 mL</td><td>Beckman Coulter</td><td></td><td>Allegra 6</td></tr><tr><td>CFSE (ester de carboxyfluorescéine succinimidylique)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>C34554</td><td>5 mM solution mère dans</td></tr> de <tr><td>la cytochalasine D</td> DMSO <td>Thermo Fisher Scientific</td><td></td><td></td>PHZ1063</tr><tr><td>Dispase 1U/mL</td><td>StemCell Technologies</td><td>07923</td><td></td></tr><tr><td>FACS CellSorter MoFlo XDP</td><td>Beckman Coulter</td><td>s</td><td></td></tr><tr><td>Far-Red pro-colorant</td><td>Thermo Fisher</td><td>C34564</td><td>5 mM solution mère dans du sérum</td></tr> de <tr><td>veau fœtal DMSO (FBS)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fibronectin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F0895</td><td>Pour enrober des boîtes de culture de 100 mm</td></tr><tr><td>Microscope fluorescent avec caméra numérique couleur</td><td>Microscope fluorescent Carl Zeiss</td><td></td><td>Axioskop 20 ; Axiocamera numérique couleur Chèvre</td></tr><tr><td>anti-IgG de souris (H+L) Anticorps secondaire hautement adsorbé croisé, Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fisher</td><td>A-11029</td><td></td></tr><tr><td>HPrEC (Cellules épithéliales primaires normales de la prostate humaine)</td><td>Technologie de cellule Lifeline</td><td>FC-0038</td><td>Regroupé à partir de 3 jeunes donneurs d’organes (19-21 ans et moins) indemnes de la maladie ; 1 x 105 cellules/mL ; stocké dans un seau à glace à l’azote liquide</td></tr><tr><td>et de la glace</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microsope inversé avec appareil photo</td><td></td><td></td><td></td>numérique</tr><tr><td>Matrigel, faible facteur de croissance, sans rouge de phénol</td><td>Corning</td><td>356239</td><td></td></tr><tr><td>Méthanol</td><td>Corning</td><td>A452-4</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps anti-BrdU de souris</td><td>Signalisation cellulaire</td><td>5292S</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps IgG de souris ( contrôle négatif)</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-2025</td><td></td></tr><tr><td>Sérum de chèvre normal</td><td>Vector Laboratories</td><td>S-1000</td><td></td></tr><tr><td>Saline tamponnée au phosphate (PBS), pH 7,4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5368-10PAK</td><td></td></tr><tr><td>Pipettors et pointes, différentes tailles</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PrEGM (ProstaLife Epithelial Cell Growth Medium)</td><td>Lifeline Cell Technology</td><td>LL-0041</td><td></td></tr><tr><td>Iodure de propidium (PI)</td><td>R &amp; D Systems</td><td>5135/10</td><td>10 &amp;mu ; g/mL d’IP dans le PBS stocké à 4 &amp;deg ; C dans le noir</td></tr><tr><td>Pipettes sérologiques, différentes tailles</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Logiciel pour le comptage de sphères et les mesures</td><td></td><td></td><td></td>de taille</tr><tr><td>Logiciel : images 3D à l’aide d’Imaris un logiciel d’imagerie avec des capacités</td><td></td><td></td><td></td>de dessin de forme libre</tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Millipore Sigma</td><td>T8787</td><td></td></tr><tr><td>Bain d’eau, 37 &amp;deg ; Images</td> d’empilement z C <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>à l’aide d’un microscope</td><td></td><td></td><td></td> confocal à fluorescence inversée en lumière transmise</tr></tbody></table>

isolement des cellules souches des cultures sphéroïdes tridimensionnelles

Isolation of Stem-like Cells from 3-Dimensional Spheroid Cultures

Malgré les progrès de la recherche sur les cellules souches adultes, l'identification et l'isolement des cellules souches à partir de spécimens de tissus demeure un défi majeur. Bien que les cellules souches résidentes soient relativement calmes avec des contraintes de niche dans les tissus adultes, elles entrent dans le cycle cellulaire dans la culture tridimensionnelle sans ancre (3D) et subissent à la fois une division cellulaire symétrique et asymétrique, donnant naissance à la fois à la tige et à l'ancêtre. Cellules. Ces derniers prolifèrent rapidement et constituent la principale population cellulaire à divers stades de l'engagement de la lignée, formant des sphéroïdes hétérogènes. Utilisant les cellules épithéliales humaines normales primaires de prostate (HPrEC), un test sphéroïde, d'étiquette-rétention a été développé qui permet l'identification et l'isolement fonctionnel des cellules souches sphéroïdes-initiatrices à une résolution simple de cellules.
HPrEC ou lignées cellulaires sont cultivées en deux dimensions (2D) avec BrdU pendant 10 jours pour permettre son incorporation dans l'ADN de toutes les cellules de division, y compris les cellules souches auto-renouvelables. Le lavage commence lors du transfert à la culture 3D pendant 5 jours, au cours desquels les cellules souches se renouvellent par division asymétrique et initient la formation sphéroïde. Tandis que les cellules souches de fille relativement calmes conservent l'ADN parental BrdU-étiqueté, les ancêtres de fille prolifèrent rapidement, perdant l'étiquette brdU. Le BrdU peut être remplacé par des colorants pro CFSE ou Far Red, qui permettent l'isolement des cellules souches vivantes par le FACS. Les caractéristiques des cellules souches sont confirmées par la formation in vitro de sphéroïdes, les essais de régénération des tissus in vivo et la documentation de leurs divisions cellulaires symétriques/asymétriques. Les cellules souches isolées qui conservent l'étiquette peuvent être rigoureusement interrogées par des études moléculaires et biologiques en aval, y compris l'ARN-seq, le ChIP-seq, la capture d'une seule cellule, l'activité métabolique, le profilage du protéome, l'immunocytochimie, la formation d'organoïdes et la régénération des tissus in vivo. Fait important, cette approche d'isolement des cellules souches fonctionnelles sans marqueuridentifie les cellules souches à partir de spécimens de cancer frais et de lignées de cellules cancéreuses provenant de plusieurs organes, ce qui suggère une large applicabilité. Il peut être utilisé pour identifier les biomarqueurs de cellules souches du cancer, dépister les produits pharmaceutiques ciblant les cellules souches cancéreuses et découvrir de nouvelles cibles thérapeutiques dans les cancers.

Les cellules épithéliales normales primaires de prostate sont placées dans des plats de culture fibronectin-enduits et la croissance cellulaire est maintenue dans la culture 2D(figure 1a). Lors du transfert dans la culture 3D avec une matrice de membrane de sous-sol, les cellules épithéliales différenciées meurent lentement. Seules les cellules souches de la prostate peuvent survivre dans une culture sans ancrage et former des sphéroïdes en 5 jours (figu...

Utilisant les cellules épithéliales primaires humaines de prostate, nous rapportons une nouvelle méthode biomarqueur-libre de caractérisation fonctionnelle des cellules de tige-comme par un test sphéroïde-basé d'étiquette-rétention. Un protocole étape par étape est décrit pour l'étiquetage des cellules BrdU, CFSE ou Far Red 2D; formation sphénoïde tridimensionnelle; identification des cellules souches de conservation de l'étiquette par immunocytochimie; et l'isolement par FACS.

Isolement des cellules souches des cultures sphéroïdes tridimensionnelles

Despite advances in adult stem cell research, identification and isolation of stem cells from tissue specimens remains a major challenge. While resident ...

L’isolement des cellules souches demeure un défi majeur en raison de la co-isolation des cellules progénitrices en utilisant les méthodes actuelles. Nous avons développé un nouvel essai sans biomarqueur pour isoler les cellules souches quiescentes des progéniteurs mixtes. Principal avantage de cet essai de rétention d’étiquettes à base de sphéroïdes, il peut élargir et isoler les cellules souches vivantes de leurs progéniteurs de fille par FACS à l’aide de l’étiquetage CFSE ou Far Red.Tandis que les thérapies conventionnelles éliminent la plupart des cellules cancéreuses de prostate, les cellules souches cancéreuses restent dues à la résistance thérapeutique, conduisant ainsi la progression de la maladie. L’isolement cellulaire en tige permettra d’identifier de nouveaux gènes qui peuvent être co-ciblés thérapeutiquement pour une rémission efficace de la maladie. Notre analyse de conservation de l’étiquette s’applique à l’isolement normal des cellules souches de divers tissus et cellules, ainsi qu’à la recherche sur les cellules souches cancéreuses.Fait important, cet essai s’applique à d’autres cancers épithéliales des cellules, tels que les cancers du sein et colorectal. Commencez par enduire les plats de culture de 100 millimètres de deux millilitres de solution de fibronectine de 2,5 microgrammes et incubez-les toute la nuit à température ambiante. Ensuite, aspirez la solution et laissez sécher l’air des plats de culture dans l’armoire de biosécurité pendant 45 minutes.Ajouter neuf millilitres du milieu de croissance des cellules épithéliales de la prostate à un plat recouvert de fibronectine et le garder au chaud dans un incubateur de dioxyde de carbone à 37 degrés Celsius. Décongeler un flacon de cellules épithéliales de la prostate humaine congelées dans un bain d’eau de 37 degrés Celsius, et resuspendre les cellules en 10 millilitres de milieu chaud. Centrifuger la suspension cellulaire à 500 fois g pendant cinq minutes.Puis aspirer et jeter le surnatant. Resuspendez les cellules en un millilitre de milieu de culture chaud et transférez un millilitre de suspension directement dans le plat recouvert de fibronectine avec le milieu préchauffé. Puis incuber le plat dans l’incubateur de dioxyde de carbone à 37 degrés Celsius.Si vous co-étiquetez les cellules, préparez les cellules étiquetées BrdU en culture 2D de 10 jours comme décrit dans le manuscrit du texte. Ajouter ensuite cinq micromolaires CFSE ou Far Red et incuber les cellules pendant 30 minutes. Après l’incubation, aspirer soigneusement le milieu avec le colorant et laver les cellules deux fois avec cinq millilitres de PBS chaud.Ensuite, effectuez la digestion enzymatique avec 05% trypsin EDTA selon les instructions manuscrites. Centrifuger les cellules à 500 fois g pendant cinq minutes et jeter le supernatant. Les cellules ont été résuspendus dans la matrice de membrane de sous-sol glacée, un-à-un et le mélange moyen de culture pour la formation de prostasphère 3D.Pour préparer la culture de la prostasphère dans un système matriciel de sous-sol 3D, décongelez la matrice membranaire du sous-sol à quatre degrés Celsius pendant la nuit et gardez-la sur la glace avant utilisation. Ajouter ensuite délicatement un millilitre de matrice membranaire glacée du sous-sol dans un volume égal de milieu de culture glacé. Pipette de haut en bas pour mélanger, en prenant soin de ne pas introduire de bulles d’air.Resuspendez cinq fois 10 à 1/4 des cellules épithéliales humaines de prostate dans la matrice de membrane de sous-sol et le mélange de médias de culture de sous-sol glacés pour le volume total de 500 microlitres. Pipette la solution à la jante inférieure de chaque puits et tourbillonner la plaque pour répartir uniformément le mélange. Placez la plaque dans un incubateur de dioxyde de carbone de 37 degrés Celsius pendant 30 minutes pour permettre à la matrice de se solidifier.Ensuite, couvrez-le d’un millilitre de culture chaude moyenne par puits, en s’assurant de ne pas déranger l’anneau. Pour récolter les prostasphériques étiquetés CFSE, remplacez le milieu par deux millilitres dispase et pipette de haut en bas pour mélanger plusieurs fois. Incuber la plaque à 37 degrés Celsius pendant 30 minutes pour digérer la matrice, puis recueillir le mélange de sphère dans un tube de centrifugeuse de 15 millilitres.Centrifuger les sphères à 500 fois g pendant cinq minutes et jeter le supernatant. Resuspendez la pastille dans 500 microlitres d’EDTA chaud de 05% trypsine, et transférez-les dans un tube de centrifugeuse de 1,5 millilitre. Incuber les sphères à 37 degrés Celsius pendant cinq minutes, puis ajouter 500 microlitres de PBS chaud avec 10%FBS.Passez-les à travers une seringue d’un millilitre avec une aiguille de calibre 26 pour dissocier complètement les sphères. Centrifuger les cellules à 500 fois g pendant cinq minutes. Puis aspirer et jeter le surnatant.Resuspendez les cellules en un millilitre de milieu de culture chaud avec un microgramme par millilitre propidium iodure pour tacher les cellules mortes et les incuber pendant une minute à température ambiante. Répétez la centrifugation et jetez le supernatant. Lavez ensuite les cellules avec un millilitre de milieu chaud.Répétez la centrifugation et jetez le supernatant. Resuspendez les cellules en un millilitre de milieu de culture chaud et recueillez les cellules dans des tubes ronds de fond en polystyrène de cinq millilitres en les filtrant à travers des bouchons de rupture de passoire cellulaire de taille pore de 35 microns. Effectuez l’analyse FACS des cellules prostasphériques labellées CFSE dispersées par trypsine.Utilisation de cellules non étiquetées comme un contrôle négatif et de cellules étiquetées CFSE comme un contrôle positif pour fixer les barrières, exécuter l’échantillon pour trier et recueillir les sous-populations de cellules fractionnées CFSE-haute et CFSE-basse. Les cellules épithéliales normales primaires de prostate humaine ont été placées dans les plats de culture fibronectin-enduits et la croissance cellulaire a été maintenue dans la culture 2D. Lors du transfert dans une culture 3D avec une matrice membranaire du sous-sol, les cellules épithéliales différenciées se sont lentement éteintes et seules les cellules souches de la prostate sont restées.La double étiquetage des cellules épithéliales de prostate dans la culture 2D suivie de la formation de sphéroïdes dans la culture 3D a montré la colocalisation de BrdU, CFSE, et Far Red dans les mêmes cellules de conservation d’étiquette. L’immunostaining double a prouvé que les cellules d’étiquette-soutènement montrent des niveaux inférieurs de kératine de protéine de cytokératine 14, protéine diminuée de jonction cellulaire E-cadherin, protéines tôt de marqueur de cellules souches accrues Wnt10b et ALDH1A1, protéine autophagy accrue LC3, et iIB accru de myosine. De plus, l’analyse de rétention d’étiquettes à base de sphéroïdes détecte avec succès les cellules souches cancéreuses dans les échantillons de cancer de la prostate.Les cellules cancéreuses et les sphéroïdes résistants étiquetés CFSE dérivés de spécimens humains de cancer de la prostate ont montré la protéine réduite d’E-cadherin par rapport aux cellules progénitrices non étiquetées. Lorsque vous essayez ce protocole, il est important de maintenir la matrice sous forme liquide pour la préparation moyenne de la culture. Conservez-le toute la nuit à quatre degrés et refroidissez les pointes de pipette dans du PBS glacé avant de distribuer la matrice.Après l’isolement des cellules souches à l’aide de l’analyse de rétention d’étiquettes à base de sphéroïdes, le séquençage de l’ARN unicellulique et l’analyse protéomique peuvent être effectués pour identifier des gènes spécifiques et de nouveaux biomarqueurs dans les cellules souches. L’isolement des cellules souches cancéreuses vivantes par l’analyse de rétention d’étiquettes à base de sphéroïdes permet aux chercheurs de développer des tumoroïdes dérivés de cellules souches cancéreuses in vitro et de dépister de nouveaux médicaments anticancéreux.

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