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DOI: 10.3791/60357-v
Wen-Yang Hu1, Dan-Ping Hu1, Lishi Xie1, Lynn A. Birch1, Gail S. Prins1,2,3
1Department of Urology, College of Medicine,University of Illinois at Chicago, 2Department of Pathology, College of Medicine,University of Illinois at Chicago, 3University of Illinois Cancer Center, College of Medicine,University of Illinois at Chicago
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Utilisant les cellules épithéliales primaires humaines de prostate, nous rapportons une nouvelle méthode biomarqueur-libre de caractérisation fonctionnelle des cellules de tige-comme par un test sphéroïde-basé d'étiquette-rétention. Un protocole étape par étape est décrit pour l'étiquetage des cellules BrdU, CFSE ou Far Red 2D; formation sphénoïde tridimensionnelle; identification des cellules souches de conservation de l'étiquette par immunocytochimie; et l'isolement par FACS.
L’isolement des cellules souches demeure un défi majeur en raison de la co-isolation des cellules progénitrices en utilisant les méthodes actuelles. Nous avons développé un nouvel essai sans biomarqueur pour isoler les cellules souches quiescentes des progéniteurs mixtes. Principal avantage de cet essai de rétention d’étiquettes à base de sphéroïdes, il peut élargir et isoler les cellules souches vivantes de leurs progéniteurs de fille par FACS à l’aide de l’étiquetage CFSE ou Far Red.
Tandis que les thérapies conventionnelles éliminent la plupart des cellules cancéreuses de prostate, les cellules souches cancéreuses restent dues à la résistance thérapeutique, conduisant ainsi la progression de la maladie. L’isolement cellulaire en tige permettra d’identifier de nouveaux gènes qui peuvent être co-ciblés thérapeutiquement pour une rémission efficace de la maladie. Notre analyse de conservation de l’étiquette s’applique à l’isolement normal des cellules souches de divers tissus et cellules, ainsi qu’à la recherche sur les cellules souches cancéreuses.
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