Induire l’épilepsie post-traumatique dans un modèle de souris de lésions cérébrales traumatiques diffuses répétitives

Notre protocole est le premier à détailler un modèle de souris de l’épilepsie post-traumatique induite par des lésions cérébrales traumatiques légères. L’utilisation d’un modèle diffus doux de lésion cérébrale traumatique imite un aspect important de la pathologie des lésions cérébrales traumatiques humaines qui a presque toujours une composante diffuse. Afin de développer des biomarqueurs et des traitements, la recherche à l’aide de modèles qui reproduisent de manière appropriée des aspects de la pathologie humaine est nécessaire.

Notre modèle de lésion cérébrale traumatique a également le potentiel de fournir un aperçu des mécanismes qui causent une déficience de la fonction cérébrale après une lésion cérébrale traumatique légère ou une commotion cérébrale. Après avoir confirmé un manque de réponse au réflexe de douleur, placez la souris sur un tampon de mousse et placez la tête de la souris sous le tube de chute de poids. Placez un disque plat de 1,3 centimètre de diamètre d’un millimètre d’épaisseur de 880 milligrammes en acier inoxydable au centre de la tête de l’animal entre les yeux et les oreilles.

Retirez la goupille dans le tube de chute de poids pour libérer la tige de poids de 100 grammes d’une hauteur de 50 centimètres. Pour induire une fausse blessure chez les souris témoins, retirez la tige de poids du tube pour éviter la libération accidentelle de la goupille pendant la chute de poids. Après l’induction de baisse de poids, placez l’animal sur son dos sur un coussin chauffant recouvert d’une serviette absorbante stérile tapissée de poly avec surveillance jusqu’à la pleine couchée.

Placez ensuite la souris dans une cage propre qui a été réchauffée sur un coussin chauffant avec du gel de récupération et quelques morceaux de chow humidifiés pendant 45 minutes. Pour préparer le champ chirurgical à l’implantation de l’électrode EEG, placez un capteur de température sur le coussin et placez la souris blessée au cerveau réesthésiée sur un drapé stérile sur le dessus de la garniture chauffante de l’appareil stéréotaxique. Après avoir fixé la tête en place avec des barres d’oreille, appliquez l’onguent lubrifiant sur les yeux de l’animal et utilisez la crème depilatory pour enlever les cheveux du cuir chevelu.

Désinfecter la peau exposée avec trois écouvillons alternatifs de 20 secondes de solution antiseptique chirurgicale à l’iode povidone et 70% d’éthanol dans un mouvement circulaire. Après avoir enlevé le cuir chevelu, appliquer de petits hémostats sur les bordures ouvertes de la peau pour élargir la zone exposée. Ensuite, utilisez le scalpel pour enlever délicatement le périoste et écouvillonner le crâne avec du peroxyde d’hydrogène.

Lorsque le crâne est dégagé des tissus et présente un aspect blanchâtre, séchez l’os avec une gaze stérile ou un écouvillon. Pour l’implantation d’électrodes, utilisez une perceuse à grande vitesse avec un morceau d’acier rond de 0,5 millimètre à 5000 à 6000 rotations par minute pour créer six trous de bavures pour les électrodes de vis. Lorsque tous les trous ont été percés, placez les six électrodes à vis dans les trous de bavures et mélangez une demi-boule de poudre de ciment dentaire avec plusieurs gouttes de solvant.

Utilisez une spatule pour remuer jusqu’à ce que le mélange de ciment dentaire soit collant mais malléable et assez rigide pour être correctement condensé lorsqu’il est placé sur le crâne de l’animal. Appliquer le ciment sur toute la surface exposée du crâne et chaque électrode à vis. Après une à deux minutes, allumez le fer à soudique et placez les trois supports de tête EEG dans un bras stéréotaxique.

Placez la monture de la tête sur le crâne de sorte que les six positions de plomb de fil correspondent à la position du fil de plomb de chaque électrode de vis. Abaissez l’appareil de sorte que sa partie ventrale repose sur le dessus du ciment dentaire. Tordez le fil de chaque plomb de chacune des électrodes de vis avec le fil correspondant de la monture de tête, soudez chaque paire tordue de fil pour la conduction appropriée de signal et utilisez des ciseaux pour couper n’importe quel fil excédentaire.

Pliez chaque paire soudée de fils conduit autour de la monture de tête. Lorsque toutes les paires ont été pliées, couvrez tout le fil avec du ciment dentaire frais, ne laissant que la partie noire de la monture de la tête exposée. Relâchez les hémostats qui tiennent les volets cutanés et appliquez de la chlorhexidine antiseptique sur la zone autour de l’implant pour éviter l’infection.

Ensuite, transférez l’animal de l’appareil à un équilibre pour mesurer le poids de l’animal comme référence pour la surveillance future avant de placer l’animal dans une cage propre sur un coussin chauffant chaud avec surveillance, gel de récupération, et quelques morceaux humidifiés chow. Dans ce chiffre, une saisie spontanée dans une souris 97 jours après des dommages traumatiques répétés de chute de poids de cerveau enregistrés utilisant une monture de tête de trois EEG configurée comme démontré dans ce protocole vidéo est montrée. Ici, une saisie électrographique spontanée non convulsive enregistrée dans une souris 65 jours après des dommages traumatiques répétés de chute de poids de cerveau est montrée.

Dans ce chiffre, une saisie spontanée dans une souris 23 jours après des dommages traumatiques répétés de chute de poids de cerveau a été enregistrée utilisant une monture de tête d’EEG. La puissance spectrale d’une saisie typique indique la densité la plus élevée d’être dans la gamme de 10 à 40 hertz avec un pic à 15 hertz. Ce protocole démontre les délais pour le début de saisie chez les animaux après des lésions cérébrales traumatiques de chute de poids répétitive démontrant l’incidence du regroupement de saisie chez certains animaux et soulignant l’importance d’acquérir des enregistrements continus plutôt que intermittents.

Le placement approprié du disque d’acier, l’implantation soigneux des électrodes de vis et la soudure soigneux des fils de fil sont tous cruciaux pour une expérience réussie à long terme. Après la surveillance de l’EEG, les animaux ayant des lésions cérébrales qui développent des crises peuvent être stratifiés à partir de ceux qui ne le font pas pour une analyse ultérieure de leurs différences cellulaires, moléculaires et physiologiques. Il est essentiel de stratifier les animaux épileptiques post-traumatiques de ceux qui subissent des lésions cérébrales traumatiques, mais qui ne développent pas de crises, pour le développement d’interventions et de biomarqueurs.