Name: Synthèse des nanoamas d’or électroluminescents électroluminescents pour les applications biologiques (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-03-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 11 s
Description: Découvrez la synthèse de nanoamas d'or photoluminescents fonctionnalisables émettant dans le proche infrarouge et leur détection dans les cellules HeLa par cytométrie en flux et microscopie confocale.

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Les auteurs sont reconnaissants à Alzbeta Magdolenova pour son aide avec la cytométrie du flux. Les auteurs reconnaissent le soutien financier du projet Nr. 18-12533S du GACR. La microscopie a été réalisée au Laboratoire de microscopie confocale et fluorescence cofinancée par le Fonds européen de développement régional et le budget de l’Etat de la République tchèque, projets non. CZ.1.05/4.1.00/16.0347 et CZ.2.16/3.1.00/21515, et soutenu par le grand projet tchèque-BioImaging LM2015062.

1. Préparation des auNC électroluminescents électroluminescents (1)
<ol><li>Ajouter 7,8 mg (37,8 kmol) d’acide thioctique (TA) et 60 ll de 2 M NaOH à 23,4 ml d’eau ultrapure (résistance 18,2 M.cm à 25 oC) et remuer (au moins 1 000 tr/min) jusqu’à ce qu’il se dissout complètement (15-20 min). Pour une dissolution plus rapide de TA, sonicate le mélange. Pour la synthèse, une solution TA fraîchement préparée est recommandée.</li>
	<li>Ajouter 10,2 L de HAuCl4'3H2O (470 mg/mL) de solution aqueous à la solution.</li>
	<li>Après 15 min, ajouter 480 lil de NaBH4 (1,9 mg/mL) en remuant vigoureusement (au moins 1 000 tr/min) et remuer le mélange de réaction dans les mêmes conditions pendant la nuit. REMARQUE : Préparez la solution NaBH4 dans de l’eau ultrapure glacée et ajoutez au mélange de réaction immédiatement après la préparation. REMARQUE : La synthèse des AUNC est facilement évolutive. Jusqu’à 2 L d’AuNC a été synthétisé en un seul lot, sans aucun changement dans les propriétés optiques des particules.</li>
	<li>(Critique) Le lendemain, purifier la solution en appliquant trois cycles de centrifugation/filtration à l’aide d’un dispositif de filtration membranaire avec une coupure de poids moléculaire de 3 kDa. Sans cette procédure de purification, l’étape suivante ne fonctionne pas correctement.</li>
	<li>Ajouter le polyéthylène glycol à base de thiol (MW 2 000; 15,6 mg; 7,8 omol) à la solution, ajuster le pH à 7-7,5 et remuer le mélange pendant la nuit pour obtenir 1. Purifier la dispersion en appliquant trois cycles de centrifugation/filtration à l’aide d’un dispositif de filtration membranaire avec une coupure de poids moléculaire de 3 kDa. REMARQUE : L’ajustement du pH à 7-7,5 est extrêmement important. Un pH plus élevé peut entraîner un déplacement bleu des maxima d’émission.</li>
</ol>2. Conjugaison de 3-(aminopropyl)triphenylphosphonium bromide (TPP) sur la surface de 1
<ol><li>Mélanger la solution 1 (24 ml) préparée dans l’étape précédente et le bromure de triphenylphosphonium 3-(aminopropyl)triphenylphosphonium (12 mg, 30 'mol). Ajuster le pH à 4,5 avec 1 M HCl. REMARQUE : 3-(Aminopropyl)triphenylphosphonium (TPP) le sel de bromure a été préparé tel que décrit dans la littérature20.</li>
	<li>Commencez la réaction en ajoutant un excès de N-(3-dimethyl-aminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide hydrochlorure (EDC HCl) (60 mg, 312 'mol). Le pH de la solution augmentera et ne devrait pas être autorisé à aller au-delà de 6. Surveiller le pH du mélange de réaction pendant la première heure. Si le pH augmente au-dessus de 6, réduisez-le à 4,5 à 6 en ajoutant 1 M HCl.</li>
	<li>Remuer le mélange de réaction toute la nuit à température ambiante.</li>
	<li>Purifier la dispersion en appliquant trois cycles de centrifugation/filtration à l’aide d’un dispositif de filtration membranaire avec un seuil de poids moléculaire de 3 kDa pour obtenir 2. Dilute 2 obtenu ici avec de l’eau ultrapure au volume initial de 24 ml. La concentration d’Au dans la solution est de 200 g/mL.</li>
</ol>3. Culture cellulaire
<ol><li>Cellules De culture HeLa (collection de culture HPA) dans Eagle’s Medium modifié de Dulbecco complété par 10% de sérum bovin fœtal dans 5% de CO2 à 37 oC.</li>
	<li>Diviser et passer les cellules lorsqu’elles atteignent la confluence à 80 %. Pour minimiser l’acquisition de nouveaux mutants, le nombre de propagations cellulaires ne doit pas dépasser 30.</li>
</ol>4. AuNC internalisation dans les cellules HeLa
<ol><li>Ensemencer les cellules dans une plaque de 12 puits à une densité de 20 000 cellules/mL (1 ml/puits). L’objectif est d’atteindre 50% de confluence après 48 h.</li>
	<li>À 48 h après l’ensemencement, aspirez le milieu de culture et ajoutez 400 l de milieu de culture complet (pour les contrôles non traités) ou 500 g de nanoparticules dans 400 l de milieu de culture complet (pour les échantillons traités) à chaque puits. Retournez les cultures dans un incubateur de 37 oC. REMARQUE : L’ajout de volumes élevés de solution AuNC nuit à la viabilité de la cellule. Les solutions AuNC doivent être concentrées. Ainsi, 2 obtenus dans l’étape 2.4 est concentré 100 fois. AuNC de 40 mL était concentré à 400 ll. Un aliquot de 25 L de cette solution concentrée a été ajouté à 400 L de culture cellulaire pour obtenir la concentration désirée AuNC.</li>
	<li>Après 2 h d’intériorisation, détachez les cellules par trypsinisation standard selon le protocole du fabricant.</li>
	<li>Recueillir les échantillons dans des tubes de microcentrifuge de polypropylène et de centrifugeuse pendant 5 min à 350 x g à 4 oC.</li>
	<li>Préparer le tampon FCM suivant: pré-réfrigéré phosphate tamponné salin (PBS; 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 4,3 mM Na2HPO4, 1,47 mM NaH2PO4, pH 7,4) complété par 2% de sérum bovin albumin à 4 oC.</li>
	<li>Laver les granulés avec 1 mL de tampon FCM et centrifugeuse pendant 5 min à 350 x g à 4 oC.</li>
	<li>Réutilisez le granulé dans 500 l de tampon FCM et entreposez des échantillons à 4 oC avant l’analyse.</li>
</ol>5. Analyse de cytométrie d’écoulement
<ol><li>Filtrer tous les échantillons à l’aide d’un tube à fond rond en polystyrène de 5 ml avec un capuchon à tension cellulaire.</li>
	<li>Avant d’acquérir des données à l’aide du logiciel d’instrument, spécifiez la configuration du cytomètre.</li>
	<li>Formatez tous les points-intrigues et histogrammes pour 'Acquisitions'.</li>
	<li>Tracer une parcelle à deux paramètres de la zone de dispersion vers l’avant (FSC-A) et de la zone de dispersion latérale (SSC-A) pour afficher la distribution des cellules. Pour exclure les doublets, créez une parcelle à deux paramètres de hauteur FSC (FSC-H) vs FSC-A. Pour surveiller l’intensité relative de fluorescence dans l’échantillon, tracez un histogramme à un seul paramètre pour la zone du canal fluorescent (FL-A). Utilisez une échelle linéaire pour représenter les données FSC et SSC, ainsi qu’une échelle logarithémique pour tous les paramètres fluorescents.</li>
	<li>Acquérir un échantillon non traité (sans nanoparticules) à un faible débit afin de minimiser les événements coïncidents (si l’instrument le permet). Lors de l’acquisition, ajustez les tensions du tube photomultiplier (PMT) pour obtenir la population non traitée sur l’échelle sur la parcelle FSC vs SSC. Si nécessaire, ajustez les tensions PMT pour que le canal FL place la population non contaminée sur le coin gauche de l’histogramme.</li>
	<li>Sélectionnez l’onglet porte spécifique dans le logiciel et dessinez une porte appropriée autour de la population désirée. Les cellules à l’intérieur de la porte se déplaceront vers le prochain point de contrôle.</li>
	<li>Enregistrez 10 000 événements par échantillon.</li>
	<li>Enregistrez tous les échantillons dans les mêmes paramètres d’instruments.</li>
	<li>Utilisez un programme approprié pour analyser les données de cytométrie du débit. REMARQUE : Certaines applications peuvent nécessiter une configuration personnalisée des filtres. Pour l’échange de filtres toujours suivre les recommandations de la fabrication dans le guide utilisateur. REMARQUE : L’expérience peut être sauvegardée et rechargée pour préserver les paramètres de l’instrument et la stratégie de gating. REMARQUE : Une hauteur de dispersion latérale (SSC-H) vs zone de dispersion latérale (SSC-A) peut également être utilisée pour l’exclusion de doublet. Ce type de gating peut être plus sensible car le détecteur FSC n’est généralement pas un PMT.</li>
</ol>6. Internalisation de 2 dans les cellules HeLa pour la microscopie confocale de balayage laser (CLSM)
<ol><li>Ensemencer les cellules sur un plat de 35 mm à fond de verre de 4 chambres à une densité de 250 000 cellules/mL (0,5 ml/chambre). Gardez la chambre dans un incubateur de 37 oC avec 5% de CO2 atmosphère. L’objectif est d’atteindre 50% de confluence après 24 h.</li>
	<li>À 24 h après l’ensemencement, ajouter 100 g de 2 (ou 10 l de la solution de stock de 10 mg/mL) à chaque chambre à vaisselle contenant 0,5 ml de milieu avec les cellules (pour les échantillons traités).</li>
	<li>Remettre le plat à l’incubateur. Laissez les cellules internaliser les AuNC pendant 24 h avant de les utiliser pour le CLSM.</li>
	<li>Après la période d’internalisation, jetez le milieu et lavez les cellules avec un milieu frais pré-réchauffé pendant 5 min. Répétez une fois de plus l’étape de lavage. Remplissez ensuite chaque chambre de 800 ll de milieu frais.</li>
</ol>7. CLSM Imagerie des cellules Hela vivantes étiquetées avec 2
<ol><li>Pour l’imagerie microscopique, utilisez une lentille objective d’huile de 63x (n - 1,518) (NA 1,4) au microscope confocal avec Plan-Apochromat.</li>
	<li>Monter le plat sur le microscope inverti étape avec la chambre réchauffée à 37 oC et fourni avec une atmosphère humidifiée de CO2.</li>
	<li>Pour détecter AuNC intériorisé, utilisez un laser de 405 nm réglé à 2% de puissance avec un sépara teur de faisceau approprié. Définissez la gamme de longueurs d’onde de détection entre 650 et 760 nm.</li>
	<li>Définissez la résolution de l’image à 2048 x 2048 pixels. Dans le réglage de la vitesse d’acquisition, visez un temps de fonctionnement de pixel autour de 4 's. Acquérir l’image avec une moyenne de 2x (mode ligne, moyenne de la méthode moyenne). Réglez le trou d’épingle à 1 unité aérée (pour 405 nm de lumière). Pour une plus grande sensibilité, utilisez le mode photon-comptage.</li>
	<li>Pour une illumination correcte dans la lumière transmise avec contraste d’interférence différentielle (DIC), utilisez le réglage du condenseur et de l’arrêt de champ de Kôhler. Pour l’acquisition de la lumière transmise, utilisez un laser de 488 nm à 0,7% de puissance sans aucun détecteur de fluorescence assigné. Réglez un séparamètre de faisceau approprié pour la longueur d’onde laser.</li>
	<li>Acquérir deux images pour chaque piste (fluorescence rouge et DIC). Suivre les AuNC par leur fluorescence rouge; les limites cellulaires sont facilement déterminées dans la lumière transmise avec des images DIC.</li>
</ol>

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<li>Oh, E., Susumu, K., Goswami, R., Mattoussi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((One-Phase+Synthesis+of+Water-Soluble+Gold+Nanoparticles+with+Control+over+Size+and+Surface+Functionalities%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">One-Phase Synthesis of Water-Soluble Gold Nanoparticles with Control over Size and Surface Functionalities.</a> Langmuir. 26 (10), 7604-7613 (2010).</li>
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<li>Porret, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrophobicity+of+Gold+Nanoclusters+Influences+Their+Interactions+with+Biological+Barriers%5BTitle%5D)+AND+%22Chemistry+of+Materials%22%5BJournal%5D)">Hydrophobicity of Gold Nanoclusters Influences Their Interactions with Biological Barriers.</a> Chemistry of Materials. 29 (17), 7497-7506 (2017).</li>
<li>Shang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((One-Pot+Synthesis+of+Near-Infrared+Fluorescent+Gold+Clusters+for+Cellular+Fluorescence+Lifetime+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">One-Pot Synthesis of Near-Infrared Fluorescent Gold Clusters for Cellular Fluorescence Lifetime Imaging.</a> Small. 7 (18), 2614-2620 (2011).</li>
<li>Wu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solution+NMR+Analysis+of+Ligand+Environment+in+Quaternary+Ammonium-Terminated+Self-Assembled+Monolayers+on+Gold+Nanoparticles%3A+The+Effect+of+Surface+Curvature+and+Ligand+Structure%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Solution NMR Analysis of Ligand Environment in Quaternary Ammonium-Terminated Self-Assembled Monolayers on Gold Nanoparticles: The Effect of Surface Curvature and Ligand Structure.</a> Journal of the American Chemical Society. 141 (10), 4316-4327 (2019).</li>
<li>Gao, X., Cui, Y., Levenson, R. M., Chung, L. W. K., Nie, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+cancer+targeting+and+imaging+with+semiconductor+quantum+dots%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">In vivo cancer targeting and imaging with semiconductor quantum dots.</a> Nature Biotechnology. 22 (8), 969-976 (2004).</li>
<li>Bartczak, D., Kanaras, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+Peptide-Functionalized+Gold+Nanoparticles+Using+One+Pot+EDC%2FSulfo-NHS+Coupling%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Preparation of Peptide-Functionalized Gold Nanoparticles Using One Pot EDC/Sulfo-NHS Coupling.</a> Langmuir. 27 (16), 10119-10123 (2011).</li>
<li>Dutta, D., Sailapu, S. K., Chattopadhyay, A., Ghosh, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenylboronic+Acid+Templated+Gold+Nanoclusters+for+Mucin+Detection+Using+a+Smartphone-Based+Device+and+Targeted+Cancer+Cell+Theranostics%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Applied+Materials+%26+Interfaces%22%5BJournal%5D)">Phenylboronic Acid Templated Gold Nanoclusters for Mucin Detection Using a Smartphone-Based Device and Targeted Cancer Cell Theranostics.</a> ACS Applied Materials & Interfaces. 10 (4), 3210-3218 (2018).</li>
<li>Retnakumari, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD33+monoclonal+antibody+conjugated+Au+cluster+nano-bioprobe+for+targeted+flow-cytometric+detection+of+acute+myeloid+leukaemia%5BTitle%5D)+AND+%22Nanotechnology%22%5BJournal%5D)">CD33 monoclonal antibody conjugated Au cluster nano-bioprobe for targeted flow-cytometric detection of acute myeloid leukaemia.</a> Nanotechnology. 22 (28), 285102(2011).</li>
<li>Pyo, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+Luminescent+Folate-Functionalized+Au22+Nanoclusters+for+Bioimaging%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Healthcare+Materials%22%5BJournal%5D)">Highly Luminescent Folate-Functionalized Au22 Nanoclusters for Bioimaging.</a> Advanced Healthcare Materials. 6 (16), 1700203(2017).</li>
<li>Fernández, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+accumulation+and+immunological+properties+of+fluorescent+gold+nanoclusters+in+human+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Intracellular accumulation and immunological properties of fluorescent gold nanoclusters in human dendritic cells.</a> Biomaterials. 43, 1-12 (2015).</li>
</ol>

Certaines parties des méthodes et des résultats ont déjà été présentés dans l’article par Pramanik et coll.18 Ici, ces méthodes ont été converties en protocoles pratiques point par point. Les auteurs ne déclarent aucun intérêt financier concurrent.

Les AuNC émettant du NIR ont été synthétisés à l’aide d’une approche ascendante dans laquelle la solution de précurseur d’or (HAuCl4) a été traitée avec des ligands thiol appropriés, suivis d’une réduction de Au3 . La réduction des ions métalliques dans la solution aqueuse ont tendance à s’agréger et se traduit par de grandes nanoparticules plutôt que des NCs ultrasmall21. Pour préparer les AUCN PL ultrasmall (2 nm), les conditions synthétiques ont été ajustées pour empêcher ...

Au cours de la dernière décennie, ultrasmall (2 nm) nanoclusters d’or photoluminescents (PL AuNC) ont émergé comme des sondes prometteuses pour la recherche fondamentale et les applications pratiques1,2,3,4,5,6,7,8,9,10. Leurs nombreuses caractéristiques souhaitables comprennent une photostabilité élevée, des maxima d’émissions de thon, de longues durées de vie d’émission, de grands changements stokes, une faible toxicité, une bonne biocompatibilité, un dégagement rénal et une bioconjugation facile. Les AUCN PL peuvent fournir une photoluminescence du bleu à la région spectrale proche infrarouge (NIR), selon le nombre d’atomes dans l’amas11 et la nature du ligand de surface12. NIR (650-900 nm) les AuCN émettant sont particulièrement prometteurs pour l’imagerie in vitro et in vivo à long terme des cellules et des tissus, car ils offrent un rapport signal-bruit élevé en raison d’un chevauchement minimal avec l’autofluorescence intrinsèque, une dispersion et une absorption plus faibles, et une pénétration élevée des tissus de la lumière NIR13,14.
Ces dernières années, diverses approches qui tirent parti des interactions covalentes Au-S ont été développées pour préparer les AUCN NIR-PL plafonnés à une variété de ligands contenant du thiol13,15,16,17. Pour les applications biomédicales, les AUNC doivent être fonctionnalisés avec un composant biologique pour faciliter les interactions contraignantes. Ainsi, les auNC avec une grande stabilité colloïdale qui sont facilement fonctionnables chez les solvants aqueux sont hautement souhaitables. L’objectif global du protocole actuel est de décrire une préparation précédemment rapportée de18 AuNC avec un groupe d’acide carboxylique fonctionnel sur la surface en employant l’acide thioctic et le polyéthylène glycol (PEG) dans un environnement aqueux en détail et leur conjugaison avec des molécules portant une amine primaire suivant la méthode d’accouplement acide-amine. En raison de la facilité de synthèse et de la haute reproductibilité, ce protocole peut être utilisé et adapté par des chercheurs issus de milieux non chimiques.
L’une des principales exigences pour les applications des AuNC dans la recherche biomédicale est la capacité d’observer et de mesurer les AUNC à l’intérieur des cellules. Parmi les méthodes disponibles pour surveiller l’absorption des nanoparticules par les cellules, la cytométrie des débits (FCM) et la microscopie confocale à balayage laser (CLSM) offrent des méthodes robustes et à haut débit qui permettent des mesures rapides de l’internalisation des nanomatériaux fluorescents dans un grand nombre de cellules19. Ici, la méthode FCM et CLSM pour la mesure et l’analyse directes des PNC à l’intérieur des cellules, sans avoir besoin de colorants supplémentaires, ont également été présentées.

<table><tbody><tr><td>Chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodiimide</td><td>TCI Chemicals</td><td>D1601</td><td>https://www.tcichemicals.com/eshop/en/eu/commodity/D1601/;jsessionid=3AD046E5389206AAE33C8AAB5036CDD6?gclid=CjwKCAjwiZnnBRBQEiwAcWKfYrO69K6Np3tYeSsAouqGndUvzzsy1hStBPuHG-X3cpTIsAqq9z0cDBoC76MQAvD_BwE</td></tr><tr><td>Albumine sérique bovine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4161</td><td>https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/a4161?lang=en&region=CZ</td></tr><tr><td>Hydrogénophosphate disodique dihydraté</td><td>PENTA s.r.o.</td><td>15130-31000</td><td>https://www.pentachemicals.eu/soubory/specifikace/specifikace_281.pdf</td></tr><tr><td>DL-Acide thioctique, 98 %</td> <td>Alfa Aesar</td><td>L04711</td><td>https://www.alfa.com/en/catalog/L04711/</td></tr> <tr><td>Acide chlorhydrique 35 %</td><td>PENTA s.r.o.</td><td>19350-11000</td><td>https://www.pentachemicals.eu/soubory/specifikace/specifikace_512.pdf</td></tr><tr><td>Tétrachloroaurate(III) d’hydrogène trihydraté, ACS, 99,99 % (à base métallique), Au 49,0 % min</td><td>Alfa Aesar</td><td>36400</td><td>https://www.alfa.com/en/catalog/036400/</td></tr> <tr><td>O-(2-Mercaptoethyl)-O&prime ;-méthylpolyéthylène glycol 2000</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>743127</td><td>https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/743127?lang=en&region=CZ</td></tr><tr><td>Chlorure de potassium</td><td>PENTA s.r.o.</td><td>16200-31000</td><td>https://www.pentachemicals.eu/soubory/specifikace/specifikace_346.pdf</td></tr><tr><td>Borohydrure de sodium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>452882</td><td>https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/452882?lang=en&region=CZ&gclid=CjwKCAjwiZnnBRBQEiwAcWKfYuoZKvdK_fH24F1gGugG4pamF2FFZLd36YyZmRTdGgkbm5SbyGP0jBoCoo0QAvD_BwE</td></tr><tr><td>Chlorure de sodium</td><td>PENTA s.r.o.</td><td>16610-31000</td><td>https://www.pentachemicals.eu/soubory/specifikace/specifikace_376.pdf</td></tr><tr><td>Dihydrogénophosphate de sodium dihydraté</td><td>PENTA s.r.o.</td><td>12330-31000</td><td>https://www.pentachemicals.eu/soubory/specifikace/specifikace_124.pdf</td></tr><tr><td>Granulés d’hydroxyde de sodium</td><td>PENTA s.r.o.</td><td>15740-31000</td><td>https://www.pentachemicals.eu/soubory/specifikace/specifikace_307.pdf</td></tr><tr><td>XTT (sel interne de sodium 2, 3-bis (2-méthoxy-4-nitro-5-sulfophényl)-5-[(phénylamino)-carbonyl]-2H-tétrazolium)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>X12223</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/X12223#/X12223</td></tr></tbody></table>

synthèse des nanoamas d’or électroluminescents électroluminescents pour les applications biologiques

Synthesis of Near-Infrared Emitting Gold Nanoclusters for Biological Applications

Au cours de la dernière décennie, les nanoamas d’or fluorescent (AUNC) ont connu une popularité croissante dans les applications biologiques et d’énormes efforts ont été consacrés à leur développement. Dans ce protocole, une méthode récemment développée et facile pour la préparation des AuNC solubles, biocompatibles et colloïde stables ont été décrites en détail. Cette synthèse chimique ascendante à température ambiante fournit des AUNC facilement fonctionnels recouverts d’acide thioctique et de polyéthylène glycol modifié au thiol dans une solution aqueuse. L’approche synthétique ne nécessite ni solvants organiques ni échange de ligands supplémentaires, ni connaissance approfondie de la chimie synthétique pour se reproduire. Les AuNC qui en résultent offrent des acides carboxyliques de surface gratuits, qui peuvent être fonctionnalisés avec diverses molécules biologiques portant un groupe d’amine libre sans nuire aux propriétés photoluminescentes des AuNC. Une procédure rapide et fiable pour la quantification cytométrique de flux et la formation image microscopique confocale de l’absorption d’AuNC par les cellules de HeLa a également été décrite. En raison du grand changement de Stokes, un réglage approprié des filtres dans la cytométrie de débit et la microscopie confocienne est nécessaire pour une détection efficace de la photoluminescence proche infrarouge des AuNC.

NIR PL AuNCs ont été préparés à partir d’Au3 en présence de TA, puis LE PEG (MW 2 000) a été lié sur la surface d’AuNC pour obtenir 1 suite au flux de travail indiqué à la figure 1. Couplage amidique entre 1 et 3-(aminopropyl) triphenylphosphonium (TPP) bromure fourni 2. Comme prévu, les spectres d’absorption(figure 2a) ont indiqué que les AuCN 1 et 2 n’ont pas de ban...

Une méthode fiable et facilement reproductible pour la préparation de neurocomanes d’or photoluminescents fonctionnables et de leur détection directe à l’intérieur des cellules HeLa par cytométrie de flux et microscopie confocale de balayage laser est décrite.

Synthèse des nanoamas d’or électroluminescents électroluminescents pour les applications biologiques

Over the past decade, fluorescent gold nanoclusters (AuNCs) have witnessed growing popularity in biological applications and enormous efforts have been ...

Il s’agit d’un protocole simple pour la synthèse de nanoamas photoluminescents photoluminescents fonctionnalisables et proche infrarouges et leur détection à l’aide d’une configuration commerciale. Un des principaux avantages de cette technique est que l’attachement du ligand thiol-fonctionnalisé et le couplage du ligand amine-fonctionnalisé sur la surface des nanoamas d’or n’affecte pas défavorablement les propriétés photoluminescentes et la stabilité de bobine. On peut envisager que la combinaison de propriétés intenses de photoluminescence et de conjugaison avec des biomolécules permettra la détection in vitro d’anilides à faible concentration, de biocapsage, de solubling et de bio-imagerie.Klaudia Kvakova, ma doctorante, démontrera la procédure. La cytométrie du débit sera démontrée par l’assistante de recherche Alzbeta Magdolenova. La partie microscopique sera démontrée par Vaclav Bocan, un étudiant diplômé du laboratoire Lenka Libusova.Commencez par ajouter 7,8 milligrammes d’acide thioctic dans 60 microlitres d’hydroxyde de sodium bi molaire à 23,4 millilitres d’eau ultrapure et en remuant le mélange jusqu’à dissolution complète. Ajouter ensuite 10,2 microlitres de tétralora

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JoVE Journal

Bioengineering

Bioingénierie

Nous avons synthétisé nanostars étoile d'or en forme en utilisant une méthode de graines d'argent médiation croissance. Le diamètre de la nanostars varie de 200 à 300 nm et le nombre de conseils varient de 7 à 10. Les nanoparticules ont une surface large résonance plasmonique de mode centré dans le proche infrarouge.

Or Nanostar synthèse avec une méthode de graines Silver croissance Mediated

Ici, nous décrivons un protocole pour la synthèse de nanoparticules de magnéto-plasmonique avec un moment magnétique fort et un (NIR) absorbance dans le proche infrarouge. Le protocole comprend également anticorps conjugaison à des nanoparticules à travers la partie Fc pour diverses applications biomédicales qui nécessitent un ciblage spécifique moléculaire.

Synthèse des Immunotargeted magnéto-plasmonique NANOAGRÉGATS

Ce protocole décrit comment utiliser le chauffage transitoire associé à l’absorption optique de nanotiges d’or pour stimuler la différenciation et l’activité intracellulaire du calcium dans les cellules neuronales. Ces résultats ouvrent potentiellement de nouvelles applications dans les prothèses neurales et les études fondamentales en neurosciences.

Or nanotige assistée stimulation optique des cellules neuronales

Un protocole pour le criblage de petits médicaments moléculaires basé sur la synthèse in situ de nanoclusters d’or fluorescents ultra-petits (NC Au) en utilisant des protéines chargées de médicaments comme modèle est présenté. Cette méthode est simple pour déterminer l’affinité de liaison des médicaments à une protéine cible par un signal fluorescent visible émis par les NC Au à matrice de protéines.

Un rapide et quantitative Méthode fluorimétrique pour Small Molecule dépistage du médicament protéique Ciblage

Nous décrivons un procédé simple pour la production d'agrégats oligomères hautement stable de nanoparticules d'or par l'intermédiaire de la réduction de l'acide chloroaurique (HAuCl 4) avec du thiocyanate de sodium (NaSCN). Les oligoclusters ont une distribution de taille étroite et peuvent être produits avec un large éventail de tailles et de couches de surface.

Une méthode simple pour la Taille synthèse contrôlée de Stable oligomères grappes de nanoparticules d&#39;or dans des conditions ambiantes

Le présent document décrit un protocole pour la synthèse des nanotubes d'or, basée sur l'utilisation d'hydroquinone à titre d'agent réducteur, ainsi que les différents mécanismes de contrôle de leur taille et rapport d'aspect.

Hydroquinone Based Synthèse de l&#39;or nanorods

Dans ce travail, est présenté un protocole pour la mise en valeur de signal de biodétection axée sur les nanoprobe. Le protocole est basé sur la réduction de l’acide chloraurique sur la surface de NANOSONDES existants qui consistent en or, argent, silice ou nanoparticules d’oxyde de fer.

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Les protocoles pour l’étude de la liaison des cations or (Au(III)) à différentes conformations de l’albumine sérique bovine (BSA) ainsi que pour caractériser la fluorescence dépendante conformationnelle de la BSA-Au unique sont présentées.

Formation de luminophore dans différentes Conformations de l’albumine sérique Bovine en se liant d’or

Un protocole de synthèse de nanoparticules d’or d’environ 12 nm de diamètre (nanoparticules Au) dans un solvant organique est présenté. Les nanoparticules d’or sont coiffées de ligands d’oléylamine pour éviter l’agglomération. Les nanoparticules d’or sont solubles dans des solvants organiques tels que le toluène.

Synthèse des nanoparticules d’or

Cet article présente l’intégration d’un module de focalisation spectrale et d’un laser à impulsions à double sortie, permettant une imagerie hyperspectrale rapide des nanoparticules d’or et des cellules cancéreuses. Ce travail vise à démontrer les détails des techniques optiques non linéaires multimodales sur un microscope à balayage laser standard.

Imagerie biomoléculaire de l’absorption cellulaire de nanoparticules à l’aide de la microscopie optique multimodale non linéaire

Le présent protocole décrit une technologie clonable de marquage par microscopie électronique pour détecter les protéines marquées par la métallolothionéine dans les cellules à l’aide d’une nouvelle technique de synthèse de nanoparticules d’or basée sur le mécanisme d’autonucléation.

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Découvrez la synthèse de nanoamas d'or photoluminescents fonctionnalisables émettant dans le proche infrarouge et leur détection dans les cellules HeLa par cytométrie en flux et microscopie confocale.

Synthèse des nanoamas d’or électroluminescents électroluminescents pour les applications biologiques

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