Optimisation des processus à l’aide de micro-bioréacteurs automatisés à haut débit dans la culture chinoise de cellules d’ovaires de Hamster

Dans cette vidéo, les utilisateurs introduits dans le logiciel micro bioréacteur avec la planification et l’exécution de la conception d’expériences ou doe. Les valves auxiliaires des analyseurs sont également démontrées pour optimiser l’état du processus. L’incorporation de modet dans le logiciel automatisé de micro-bioréacteur a été officielle pour l’analyse des données.

Un grand nombre d’expériences peuvent être planifiées et exécutées simultanément à petite échelle. Tamanna Nagraik, doctorante de mon laboratoire, démontrera la procédure. Commencez par la procédure de pré-culture dans la culture principale telle que décrite dans le protocole de texte.

Pour créer une nouvelle expérience, ouvrez le logiciel d’auto-culture Amber et, dans l’onglet d’introduction, cliquez dessus, créez une nouvelle expérience. Dans le nouvel onglet expérience, entrez le nom de l’expérience avec la date à laquelle elle sera menée. Activer le point de contrôle pour la station de culture dans les navires à utiliser pendant la culture.

Les balises DOE à ajouter automatiquement seront également activées pour une transition facile pendant la programmation de l’expérience DOE. Cliquez sur suivant pour passer à l’onglet suivant. Pour définir des informations sur l’ajout de supports dans le navire, ainsi que l’anti-mousse, l’inoculum, l’alimentation et le glucose, activez le point de contrôle de la plaque multimédia.

Définissez le type de plaque, le nom et l’emplacement de la plaque contenant le support. Cliquez sur ajouter des supports aux navires. Entrez le volume des supports à ajouter dans les navires.

Définir la cartographie du transfert des médias de la plaque aux navires. Cliquez sur suivant pour passer à l’onglet suivant. Une fois que l’information des médias a été alimentée dans le logiciel, assignez les conditions de culture.

Cliquez sur les supports d’état, et remplissez la température, ciblez DO, limite supérieure de PH, et remuant RPM. Cliquez ensuite en remuant ou en remuant vers le bas. Pour régler l’ajout d’inoculums dans les vaisseaux, activez ajouter la plaque cellulaire.

Définissez le type de plaque, le nom et l’emplacement de la plaque contenant le support. Cliquez sur ajouter des cellules aux vaisseaux. Entrez le moment de l’inoculation et le volume des supports à ajouter aux navires.

Définissez le chemin parcouru par le gestionnaire liquide pour transférer la cellule de la plaque aux vaisseaux. Cliquez sur suivant pour passer à l’onglet suivant. Pour régler l’ajout d’aliments, de glucose et d’anti mousse, activez la plaque d’alimentation supplémentaire et définissez le type, le nom et l’emplacement de la plaque.

Cliquez sur ajouter de l’alimentation aux navires et entrez le volume de l’aliment à ajouter aux navires. Selon la culture, ajouter le nombre d’aliments ajoutés. Pour cette culture, le réacteur est alimenté après 72 heures toutes les 24 heures.

Ajoutez manuellement le délai entre l’alimentation en entrant les données en retard à partir des cellules ajoutées. Le premier jour d’alimentation est après 72 heures d’inoculation, le prochain est après 96 heures, et ainsi de suite. Définir la cartographie du transfert de l’alimentation de la plaque vers les navires.

Pour définir l’échantillonnage pendant la culture, activez la plaque d’échantillon supplémentaire » et définissez le type, le nom et l’emplacement de la plaque. Vérifiez prendre l’échantillon des navires et entrez le volume de l’échantillon à retirer des navires. Assurez-vous que le volume ne diminue pas en dessous de 10 mililiters pendant tout le cours de la culture.

Ajouter le nombre d’échantillons à prélever pendant la culture. Comme pour l’alimentation, ajouter le temps d’enlever l’échantillon du navire pour chaque point d’échantillon d’entrée. Enregistrez le processus.

Il est maintenant prêt pour l’exécution. Enfin, définissez la cartographie du transfert de l’échantillon des navires vers la plaque. Ouvrez le logiciel Amber 15 DOE.

Cliquez sur enquête » et sélectionnez nouveau. Entrez le nom de la nouvelle enquête doe dans la boîte de dialogue create investigation. Afin d’assigner une expérience à l’enquête doe, ouvrez la recette créée pour étudier les différents paramètres.

Cliquez sur parcourir et sélectionnez l’expérience respective. Les étiquettes du navire sont déjà enrôlées dans la colonne. Pour définir le facteur DOE désiré, sélectionnez le paramètre et cliquez sur la colonne étiquetée, facteur DOE.

Sélectionnez nouveau » et ajoutez les unités, l’abréviation, ainsi que la limite inférieure et supérieure des facteurs. Dans l’onglet réponses, définissez les valeurs à prendre en compte pour l’analyse des données. Cliquez sur modifier les réponses doe et définissez le nom de la réponse, de l’abréviation, des unités et des limites minimales et maximales.

Une fois les réponses définies, sélectionnez la variable ambrée pour chaque réponse et définissez. Une réponse peut être automatiquement associée à une variable bioréacteur microbe. Choisissez la variable requise à partir de la liste d’abandon.

Modifiez l’équation pour chaque réponse en fonction de l’exigence. Les choix entre les données minimales, maximales, d’abord, last et moyennes. Pour créer une conception, utilisez l’assistant de conception Démarrer pour sélectionner le type de conception expérimentale et pour ajouter ou supprimer le nombre de répliques et de points central.

Sélectionnez l’objectif, qui détermine le choix des modèles et des modèles. Terminez et créez des paquets de travail qui peuvent être importés dans le logiciel d’auto-culture Amber tel que décrit dans le protocole texte. Dans l’onglet expérience, cliquez sur créer l’expérience DOE et recherchez le paquet de travail créé à l’aide du logiciel DOE.

Initialisez le processus en cliquant sur démarrer. Une fois l’expérience exécutée, exportez les données à l’aide des résultats du DOE à l’exportation. La fenêtre des résultats du DOE à l’exportation s’ouvre, et les lignes indiquant le navire et la station de culture sont énumérées dans le tableau.

Sélectionnez les lignes désirées et cliquez sur les lignes sélectionnées à l’exportation ou exportez des données expérimentales pour stocker tous les résultats et enregistrer le fichier pour une analyse plus approfondie. Importez les données dans le module Amber DOE en optant pour l’onglet résultats et en sélectionnant les résultats d’importation. Recherchez le fichier de données désiré et cliquez sur analyser les résultats.

La croissance cellulaire des bioréacteurs microbes automatisés est comparable aux bioréacteurs multi-utilisations. En comparant la concentration cellulaire de trois échelles différentes, on observe que le bioréacteur microbe automatisé de 15 millilitres imite le bioréacteur en verre de deux litres. Les résultats de la fiole de secousse sont également comparés à montrer l’avantage de l’ambre.

L’influence de la vitesse d’agitation différente et de ph est étudiée dans les bioréacteurs automatisés de microbe. Il est indiqué ici une comparaison de la concentration viable de cellules, ou VCC, et de la concentration monoclonale d’anticorps dans les différents bioréacteurs microbes. L’influence négative du PH 6.9 sur le VCC peut être observée.

En outre, la croissance des cellules s’est améliorée de manière significative sous la culture à PH 7.3 comparé à PH 7.1. On y voit les parcelles de contour de réponse du VCC et la concentration monoclonale d’anticorps. Les valeurs sont comparables dans les navires ayant la même vitesse ph et la même vitesse d’agitateur, ce qui indique que la vitesse d’agitation recueillie pour ce processus n’a pas d’influence significative sur la sortie du processus.

Chaque instruction donnée à la machine doit être soigneusement écrite pour éviter les erreurs lors de l’exécution de l’expérience. Le logiciel est flexible et il peut exécuter un certain nombre d’expériences à la fois, réduisant ainsi le temps nécessaire pour optimiser un processus. La conception de l’expérience est utile dans le domaine du bioprotraitement, car les résultats donnent une compréhension des processus fondée sur les connaissances, qui peut être étendue à d’autres organismes dans une certaine mesure.