Une méthode révisée pour induire le lymphœdème secondaire dans le Hindlimb des souris

Le but global de cette méthode est d’induire le lymphœdème secondaire cohérent dans l’arrière-point des souris sans causer la morbidité grave. Cette méthode peut être utilisée pour induire un lymphœdème secondaire chez l’arrière-point des souris. Le principal avantage de cette méthode est qu’elle résout le lymphœdème insignifiant durant au moins huit semaines sans causer de morbidité grave.

Quelqu’un de nouveau à la procédure peut lutter avec les techniques microchirurgical. Nous recommandons donc une formation microchirurgicale et plusieurs procédures de pratique pour assurer un résultat positif, mais aussi pour préparer le chercheur afin qu’il puisse effectuer la procédure plus efficacement. Configurer la source de rayonnement et anesthésier la souris telle que décrite dans le protocole.

Placez un tampon de plomb de 1,5 millimètre d’épaisseur pour vous assurer que seule la zone qui subit une intervention chirurgicale est irradié. L’exemple montré est celui d’une souris post-chirurgicale pour clarifier la zone. Administrer une dose de 10 irradiation grise.

Les chercheurs doivent prendre des précautions lorsqu’ils travaillent avec les radiations. Au cours de cette expérience, toute irradiation a été effectuée dans une pièce isolée par rayonnement. Et la source des radiations n’a été activée que lorsque tout le personnel a quitté la pièce.

Pesez la souris avant la chirurgie. Examiner la profondeur anesthésique par test de pincement de patte ou de queue. Raser la jambe choisie pour la procédure.

Réglez l’écoulement de l’oxygène à 0,8 litres par minute. Connectez-le avec un cône de nez. Appliquer de l’onguent ophtalmique.

Injecter 0,5 millilitres de solution saline sous-cutanée, de préférence dans le scruff de la souris pour prévenir l’hypovolémie pendant la chirurgie. Placez la souris sur le tissu chirurgical en position supine. Placez le cône avant sur le museau.

Fixez doucement l’extrémité des limites postérieures avec du ruban adhésif, pour empêcher la souris de se déplacer pendant la chirurgie. Soulevez la peau avec des forceps lisses et coupez une petite ouverture d’environ cinq millimètres proximale à la fossa popliteal. Glissez des ciseaux pointus dans l’ouverture et coupez vers le genou, de sorte que l’incision se termine juste au-dessus du genou.

Assurez-vous de ne pas percer les vaisseaux sous-jacents, en soulevant la peau avec des pinces lors de la coupure. Déplacez la souris en position couchée et complétez l’incision circonférentielle. Disséquer la peau à quelques millimètres au-dessus de l’angle.

N’oubliez pas de garder le tissu humide avec de la solution saline stérile pendant toute la procédure. Rétractez la peau de la plaie proximale avec un rétracteur élastique. Et assurez-vous que la veine sciatique est visible comme indiqué.

Injectez 0,01 millilitres Patent Blue V sous-cutanément entre le deuxième et le troisième toe. Appuyez doucement sur la patte à quelques reprises pour distribuer le Brevet Bleu V.La distribution du Patent Blue V peut être vu à travers le microscope. Les structures nécessaires pour être visualisées sont, le vaisseau lymphatique proximal, PLV, le ganglion lymphatique popliteal, PLN, le premier vaisseau lymphatique distal, DLV1, et le deuxième vaisseau lymphatique distal, DLV2.

Grossir pour visualiser le PLV et le ligate à l’aide d’une suture en nylon 10-0. Appuyez sur la patte pour vous assurer qu’aucun Bleu Brevet ne passe proximal à la ligature. Ligate les deux vaisseaux lymphatiques distal comme indiqué.

Appuyez plusieurs fois à nouveau sur la patte pour vous assurer qu’aucun Brevet Bleu V ne passe proximal à la ligature. Dans cet exemple, on peut voir que l’un des vaisseaux lymphatiques éclate en raison de la ligature qui entrave le flux lymphatique. Enlevez le ganglion lymphatique popliteal, le ganglion lymphatique a une surface perlière lisse et est coloré par le V bleu brevet en contraste avec le tissu adipeux environnant.

Avant d’enlever la garniture inguinale de graisse, cautériser ce navire comme indiqué. Ensuite, retirez le tampon de graisse en un seul morceau. Assurez-vous qu’il n’y a pas de saignement actif.

Il s’agit d’un exemple d’un ganglion lymphatique inguinal situé. Le ganglion lymphatique situé dans la garniture inguinale de graisse est rarement coloré par le V bleu de brevet et peut être difficile à différencier de la graisse. Enlever la graisse en un seul morceau est la meilleure façon de s’assurer que le ganglion lymphatique a été enlevé.

Suture les bords de la peau vers le bas pour le fascia musculaire, avec une suture en nylon 6-0 à l’aide de forceps et porte-aiguille, laissant un écart de deux à trois millimètres, pour limiter le flux lymphatique superficiel. Il s’agit d’un exemple des sutures finies, dans la fossa popliteal, le côté latéral de l’arrière-bord, au-dessus du genou, et le côté médial de la limite arrière. Administrer l’analgésie et peser la souris après la chirurgie, puis la placer dans une armoire chauffée pour la récupération.

Répétez la procédure d’irradiation pré-chirurgicale. Ce graphique montre le volume moyen combiné de l’arrière-point de trois études distinctes dans les huit semaines suivant la chirurgie. 31 souris ont été incluses au total.

L’axe x représente des semaines après la chirurgie. L’axe y représente le volume de la limite postérieur en millimètres cubes. Les barres fléchées représentent l’écart type.

Il faut s’attendre à ce que l’enflure de la chirurgie et le lymphœdème induit diminue au cours des quatre premières semaines. Après les quatre premières semaines, nous voyons un état relativement stable de lymphœdème. Le volume de l’arrière-point de contrôle augmente pendant les huit semaines, disant ainsi strictement la différence de volume entre l’arrière-point de lymphœdème et l’a hindlimb de contrôle, ceci était inattendu.

La cause est spéculée pour être que les souris ont employé leur limite postérieur non actionnée plus que l’arrière-point actionné dans les semaines suivant la chirurgie. Cela pourrait conduire à l’hypertrophie de l’arrière-train de contrôle et peut-être expliquer l’augmentation du volume. Pour les chiffres individuels sur les trois études incluses, veuillez lire le protocole.

Ce tableau montre le test de comparaison multiple de Sidak pour les mesures combinées du volume des trois études incluses. La valeur P calculée montre qu’il y a une différence statistiquement significative entre les limites postérieures avec lymphœdème induit et les limites postérieures de contrôle, pendant les huit semaines de suivi. Pour une analyse statistique individuelle sur les trois projets inclus, veuillez lire le protocole.

Cette méthode induit un lymphœdème statistiquement significatif, d’une durée d’au moins huit semaines. La procédure peut être utilisée pour étudier la pétrificialité du lymphœdème et pour rechercher de nouvelles options de traitement. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir acquis une compréhension de la façon d’induire un lymphœdème secondaire dans l’arrière-point des souris, en utilisant une combinaison de microchirurgie et d’irradiation avant et après la chirurgie.

Une fois maîtrisée, l’intervention chirurgicale peut être effectuée en 45 minutes.