Name: Identification à haut débit de la résistance aux seringues Pseudomonas pv. Tomate dans la tomate à l’aide de semis Flood Assay (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-03-10T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 41 s
Description: Découvrez le test d'inondation de semis pour le criblage à haut débit de la résistance à Pseudomonas syringae chez la tomate. Cette méthode permet d'évaluer rapidement de grands échantillons d'accessions sauvages.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Nous remercions Jamie Calma d’avoir testé l’effet du volume des médias sur les maladies ou les résultats de la résistance. Nous remercions le Dr Mael Baudin et le Dr Karl J. Scheiber du Laboratoire Lewis d’avoir fourni des commentaires et des suggestions constructifs sur le manuscrit. La recherche sur l’immunité végétale dans le laboratoire Lewis a été soutenue par l’USDA ARS 2030-21000-046-00D et 2030-21000-050-00D (JDL), et la Direction des sciences biologiques de la NSF IOS-1557661 (JDL).

<ol><li>Underwood, W., Melotto, M., He, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+plant+stomata+in+bacterial+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Role of plant stomata in bacterial invasion.</a> Cell Microbiology. 9 (7), 1621-1629 (2007).</li>
<li>Zipfel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+molecular+events+in+PAMP-triggered+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Plant+Biology%22%5BJournal%5D)">Early molecular events in PAMP-triggered immunity.</a> Current Opinion in Plant Biology. 12 (4), 414-420 (2009).</li>
<li>Galan, J. E., Wolf-Watz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+delivery+into+eukaryotic+cells+by+type+III+secretion+machines%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Protein delivery into eukaryotic cells by type III secretion machines.</a> Nature. 444 (7119), 567-573 (2006).</li>
<li>Lewis, J. D., Desveaux, D., Guttman, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+targeting+of+plant+cellular+systems+by+injected+type+III+effector+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">The targeting of plant cellular systems by injected type III effector proteins.</a> Seminars in Cell and Developmental Biology. 20 (9), 1055-1063 (2009).</li>
<li>Schreiber, K. J., Baudin, M., Hassan, J. A., Lewis, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Die+another+day%3A+molecular+mechanisms+of+effector-triggered+immunity+elicited+by+type+III+secreted+effector+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Die another day: molecular mechanisms of effector-triggered immunity elicited by type III secreted effector proteins.</a> Seminars in Cell and Developmental Biology. 56, 124-133 (2016).</li>
<li>Heath, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypersensitive+response-related+death%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Hypersensitive response-related death.</a> Plant Molecular Biology. 44 (3), 321-334 (2000).</li>
<li>Boyd, L. A., Ridout, C., O'Sullivan, D. M., Leach, J. E., Leung, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant-pathogen+interactions%3A+disease+resistance+in+modern+agriculture%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Genetics%22%5BJournal%5D)">Plant-pathogen interactions: disease resistance in modern agriculture.</a> Trends in Genetics. 29 (4), 233-240 (2013).</li>
<li>Pitblado, R. E., MacNeill, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+basis+of+resistance+to+Pseudomonas+syringae+pv.+tomato+in+field+tomatoes%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+Journal+of+Plant+Pathology%22%5BJournal%5D)">Genetic basis of resistance to Pseudomonas syringae pv. tomato in field tomatoes.</a> Canadian Journal of Plant Pathology. 5 (4), 251-255 (1983).</li>
<li>Pedley, K. F., Martin, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+basis+of+Pto-mediated+resistance+to+bacterial+speck+disease+in+tomato%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Reviews+of+Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Molecular basis of Pto-mediated resistance to bacterial speck disease in tomato.</a> Annual Reviews of Phytopathology. 41, 215-243 (2003).</li>
<li>Ronald, P. C., Salmeron, J. M., Carland, F. M., Mehta, A. Y., Staskawicz, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cloned+avirulence+gene+AvrPto+induces+disease+resistance+in+tomato+cultivars+containing+the+Pto+resistance+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bacteriology%22%5BJournal%5D)">The cloned avirulence gene AvrPto induces disease resistance in tomato cultivars containing the Pto resistance gene.</a> Journal of Bacteriology. 174 (5), 1604-1611 (1992).</li>
<li>Martin, G. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Map-based+cloning+of+a+protein+kinase+gene+conferring+disease+resistance+in+tomato%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Map-based cloning of a protein kinase gene conferring disease resistance in tomato.</a> Science. 262 (5138), 1432-1436 (1993).</li>
<li>Salmeron, J. M., Barker, S. J., Carland, F. M., Mehta, A. Y., Staskawicz, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tomato+mutants+altered+in+bacterial+disease+resistance+provide+evidence+for+a+new+locus+controlling+pathogen+recognition%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Tomato mutants altered in bacterial disease resistance provide evidence for a new locus controlling pathogen recognition.</a> Plant Cell. 6 (4), 511-520 (1994).</li>
<li>Salmeron, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tomato+Prf+is+a+member+of+the+leucine-rich+repeat+class+of+plant+disease+resistance+genes+and+lies+embedded+within+the+Pto+kinase+gene+cluster%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Tomato Prf is a member of the leucine-rich repeat class of plant disease resistance genes and lies embedded within the Pto kinase gene cluster.</a> Cell. 86 (1), 123-133 (1996).</li>
<li>Scofield, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+basis+of+gene-for-gene+specificity+in+bacterial+speck+disease+of+tomato%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Molecular basis of gene-for-gene specificity in bacterial speck disease of tomato.</a> Science. 274 (5295), 2063-2065 (1996).</li>
<li>Kunkeaw, S., Tan, S., Coaker, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+evolutionary+analyses+of+Pseudomonas+syringae+pv.+tomato+race+1%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Plant-Microbe+Interactions%22%5BJournal%5D)">Molecular and evolutionary analyses of Pseudomonas syringae pv. tomato race 1.</a> Molecular Plant-Microbe Interactions. 23 (4), 415-424 (2010).</li>
<li>Cai, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+plant+pathogen+Pseudomonas+syringae+pv.+tomato+is+genetically+monomorphic+and+under+strong+selection+to+evade+tomato+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">The plant pathogen Pseudomonas syringae pv. tomato is genetically monomorphic and under strong selection to evade tomato immunity.</a> PLoS Pathogens. 7 (8), 1002130(2011).</li>
<li>Almeida, N. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+draft+genome+sequence+of+Pseudomonas+syringae+pv.+tomato+T1+reveals+a+type+III+effector+repertoire+significantly+divergent+from+that+of+Pseudomonas+syringae+pv.+tomato+DC3000%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Plant-Microbe+Interactions%22%5BJournal%5D)">A draft genome sequence of Pseudomonas syringae pv. tomato T1 reveals a type III effector repertoire significantly divergent from that of Pseudomonas syringae pv. tomato DC3000.</a> Molecular Plant-Microbe Interactions. 22 (1), 52-62 (2009).</li>
<li>Lin, N. C., Abramovitch, R. B., Kim, Y. J., Martin, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diverse+AvrPtoB+homologs+from+several+Pseudomonas+syringae+pathovars+elicit+Pto-dependent+resistance+and+have+similar+virulence+activities%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+Environmental+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Diverse AvrPtoB homologs from several Pseudomonas syringae pathovars elicit Pto-dependent resistance and have similar virulence activities.</a> Applied and Environmental Microbiology. 72 (1), 702-712 (2006).</li>
<li>Rose, L. E., Langley, C. H., Bernal, A. J., Michelmore, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+variation+in+the+Pto+pathogen+resistance+gene+within+species+of+wild+tomato+%28Lycopersicon%29.+I.+Functional+analysis+of+Pto+alleles%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Natural variation in the Pto pathogen resistance gene within species of wild tomato (Lycopersicon). I. Functional analysis of Pto alleles.</a> Genetics. 171 (1), 345-357 (2005).</li>
<li>Thapa, S. P., Miyao, E. M., Davis, R. M., Coaker, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+QTLs+controlling+resistance+to+Pseudomonas+syringae+pv.+tomato+race+1+strains+from+the+wild+tomato+Solanum+habrochaites+LA1777%5BTitle%5D)+AND+%22Theoretical+and+Applied+Genetics%22%5BJournal%5D)">Identification of QTLs controlling resistance to Pseudomonas syringae pv. tomato race 1 strains from the wild tomato Solanum habrochaites LA1777.</a> Theoretical and Applied Genetics. 128 (4), 681-692 (2015).</li>
<li>Bao, Z. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+candidate+gene+in+Solanum+habrochaites+for+resistance+to+a+race+1+strain+of+Pseudomonas+syringae+pv.+tomato%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Genome%22%5BJournal%5D)">Identification of a candidate gene in Solanum habrochaites for resistance to a race 1 strain of Pseudomonas syringae pv. tomato.</a> Plant Genome. 8 (3), 1-15 (2015).</li>
<li>Hassan, J. A., Zhou, Y. J., Lewis, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+seedling+resistance+assay+identifies+wild+tomato+lines+that+are+resistant+to+Pseudomonas+syringae+pv.+tomato+race+1%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Plant-Microbe+Interactions%22%5BJournal%5D)">A rapid seedling resistance assay identifies wild tomato lines that are resistant to Pseudomonas syringae pv. tomato race 1.</a> Molecular Plant-Microbe Interactions. 30 (9), 701-709 (2017).</li>
<li>King, E. O., Ward, M. K., Raney, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+simple+media+for+the+demonstration+of+pyocyanin+and+fluorescin%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Laboratory+and+Clinical+Medicine%22%5BJournal%5D)">Two simple media for the demonstration of pyocyanin and fluorescin.</a> Journal of Laboratory and Clinical Medicine. 44 (2), 301-307 (1954).</li>
<li>Uppalapati, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenicity+of+Pseudomonas+syringae+pv.+tomato+on+tomato+seedlings%3A+phenotypic+and+gene+expression+analyses+of+the+virulence+function+of+coronatine%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Plant-Microbe+Interactions%22%5BJournal%5D)">Pathogenicity of Pseudomonas syringae pv. tomato on tomato seedlings: phenotypic and gene expression analyses of the virulence function of coronatine.</a> Molecular Plant-Microbe Interactions. 21 (4), 383-395 (2008).</li>
<li>Bhardwaj, V., Meier, S., Petersen, L. N., Ingle, R. A., Roden, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defence+responses+of+Arabidopsis+thaliana+to+infection+by+Pseudomonas+syringae+are+regulated+by+the+circadian+clock%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Defence responses of Arabidopsis thaliana to infection by Pseudomonas syringae are regulated by the circadian clock.</a> PLoS One. 6 (10), 26968(2011).</li>
<li>Lu, H., McClung, C. R., Zhang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tick+tock%3A+circadian+regulation+of+plant+innate+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Tick tock: circadian regulation of plant innate immunity.</a> Annual Review of Phytopathology. 55, 287-311 (2017).</li>
<li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Timing+of+plant+immune+responses+by+a+central+circadian+regulator%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Timing of plant immune responses by a central circadian regulator.</a> Nature. 470 (7332), 110-114 (2011).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Un protocole d’inoculation d’inondation avec PstDC3000 ou PstT1 optimisé pour détecter la résistance à ces souches bactériennes dans les semis de tomates est décrit. Il existe plusieurs paramètres critiques pour des résultats optimaux dans l’essai de résistance aux semis, y compris la concentration bactérienne et la concentration de surfactant, qui ont été empiriquementdéterminés 22. Pour PstDC3000, la densité optique a été optimisée pour atteindre une survie complète su...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/60805">High-Throughput Identification of Resistance to Pseudomonas syringae pv. Tomato in Tomato using Seedling Flood Assay</a>. The Introduction, Protocol, Representative Results and Discussion&#160;sections were&#160;updated.

Erratum: High-Throughput Identification of Resistance to Pseudomonas syringae pv. Tomato in Tomato using Seedling Flood Assay

Pseudomonas syringae est une bactérie pathogène Gram-négative qui infecte un large éventail d’hôtes végétaux. Les bactéries pénètrent dans la plante hôte par les stomates ou les blessures physiques et prolifèrent dans l’apoplast1. Les plantes ont développé une réponse immunitaire à deux niveaux pour se protéger contre l’infection par des agents pathogènes bactériens. Le premier niveau se produit à la surface des cellules végétales, où les récepteurs de reconnaissance des motifs sur la membrane des cellules végétales perçoivent des modèles moléculaires hautement conservés associés aux agents pathogènes (PAMP) dans un processus appelé immunité déclenchée par pAMP (PTI)2. Au cours de ce processus, la plante hôte dérégère les voies de réponse de défense, y compris le dépôt de callose à la paroi cellulaire, la fermeture des stomates, la production d’espèces réactives d’oxygène, et l’induction des gènes liés à la pathogénie.
Les bactéries peuvent surmonter PTI en utilisant un système de sécrétion de type III pour fournir des protéines, appelés effecteurs, directement dans la cellule végétale3. Les protéines Effector ciblent généralement les composants de PTI et favorisent la virulence pathogène4. Le deuxième niveau d’immunité végétale se produit dans la cellule végétale lors de la reconnaissance des protéines effectrices. Cette reconnaissance dépend des gènes de résistance, qui codent la répétition du site de liaison nucléotide contenant des récepteurs (NLR). Les NLR sont capables soit de reconnaître directement les effecteurs, soit de reconnaître leur activité sur une cible de virulence ou leurre5. Ils déclenchent alors une réponse immunitaire secondaire dans un processus appelé l’immunité effector-déclenchée (ETI), qui est souvent associée à une réponse hypersensible (HR), une forme de mort cellulaire localisée au site de l’infection6. Contrairement à la résistance du gène pour gène associée à l’ETI, les plantes peuvent présenter une résistance partielle quantitative, qui dépend de la contribution de multiples gènes7.
P. syringae pv. tomate (Pst) est l’agent causal de la tache bactérienne sur la tomate et est un problème agricole persistant. Les souches prédominantes sur le terrain ont généralement été les souches de la course Pst 0 qui expriment l’un ou l’autre ou les deux des effecteurs de type III AvrPto et AvrPtoB. DC3000 (PstDC3000) est une souche représentative de race 0 et un modèle pathogène qui peut causer des taches bactériennes dans la tomate. Pour lutter contre la maladie bactérienne des taches, les éleveurs ont introgressé le Pto [P. syringae pv. tomate]/Prf [Pto résistance et sensibilité au fenthion] groupe génétique de l’espèce de tomate sauvage Solanum pimpinellifolium dans les cultivars modernes8,9. Le gène Pto code une protéine sérine-threonine kinase protéine qui, avec le Prf NLR, confère une résistance à PstDC3000 via la reconnaissance des effecteurs AvrPto et AvrPtoB10,11,12,13,14. Cependant, cette résistance est inefficace contre les souches émergentes de la course 1, ce qui permet leur propagation rapide et agressive ces dernières années15,16. Les souches de la course 1 échappent à la reconnaissance par le cluster Pto/Prf, parce qu’AvrPto est soit perdu, soit muté dans ces souches, et AvrPtoB semble s’accumuler au minimum15,17,18.
Les populations de tomates sauvages sont d’importants réservoirs de variation naturelle pour la résistance au Pst et ont déjà été utilisées pour identifier les loci de résistance potentielle19,20,21. Cependant, les écrans actuels pour la résistance aux agents pathogènes utilisent des plantes adultes de 4 à 5 semaines20,21. Par conséquent, ils sont limités par le temps de croissance, l’espace de chambre de croissance, et la taille relativement petite d’échantillon. Pour répondre aux limites des approches conventionnelles, nous avons développé un essai de résistance aux seringues de tomate P. à haut débit à l’aide d’semis de tomates de 10 jours22. Cette approche offre plusieurs avantages par rapport à l’utilisation de plantes adultes : à savoir, un temps de croissance plus court, des besoins d’espace réduits et un débit plus élevé. En outre, nous avons démontré que cette approche récapitule fidèlement les phénotypes de résistance aux maladies observés chez les plantes adultes22.
Dans l’analyse d’inondation des semis décrite dans ce protocole, les semis de tomates sont cultivés sur des boîtes de Petri de murashige stérile et Skoog (MS) médias pendant 10 jours, puis sont inondés d’un inoculum contenant les bactéries d’intérêt et un surfactant. Après les inondations, les semis peuvent être évalués quantitativement pour la résistance aux maladies par le biais d’essais de croissance bactérienne. En outre, la survie ou la mort des semis peut agir comme une résistance discrète ou un phénotype de la maladie 7 à 14 jours après l’inondation. Cette approche offre une alternative à haut débit pour le dépistage d’un grand nombre d’accessions à la tomate sauvage pour la résistance aux souches de la course Pst 1, telles que la souche Pst T1(PstT1), et peut facilement être adaptée à d’autres souches bactériennes d’intérêt.

<table><tbody><tr><td>3M Ruban Micropore 1/2" x 10 YD CS 240 (1,25 cm x 9,1 m)</td><td>VWR International</td><td>56222-182</td><td></td></tr><tr><td>3mm billes de verre borosilicate</td><td>Friedrich & Dimmock</td><td>GB3000B</td><td></td></tr><tr><td>Bacto peptone</td><td>BD</td><td>211677</td><td></td></tr><tr><td>Bacto agar</td><td>BD</td><td>214010</td><td></td></tr><tr><td>Biophotomètre Plus</td><td>Eppendorf</td><td>E952000006</td><td></td></tr><tr><td>Enceinte de biosécurité, classe II type A2</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>MARQUE Cuvettes en plastique jetables, polystyrène</td><td>VWR International</td><td>47744-642</td><td></td></tr><tr><td>Chenille Kraft Flat Wood Toothcures</td><td>VWR International</td><td>500029-808</td><td></td></tr><tr><td>cycloheximide</td><td>Research Products International</td><td>C81040-5.0</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate de potassium dibasique anhydre, grade ACS</td><td>Fisher Scientific</td><td>P288-500</td><td></td></tr> Microscope de dissection <tr><td>au diméthylformamide</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>(grossissement d’au moins 10x)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Éthanol - 190 Proof</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Falcon polystyrène 96 puits, fond plat</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-772-3</td><td></td></tr><tr><td>Brûleur à alcool en verre Mèche</td><td>Fisher Scientific</td><td>S41898A / N° W-125</td><td></td></tr><tr><td>Brûleurs à alcool en verre</td><td>Fisher Scientific</td><td>S41898 / N° BO125</td><td></td></tr><tr><td>Glycérol ACS réactif</td><td>VWR International</td><td>EMGX0185-5</td><td></td></tr><tr><td>Kimberly-Clark&trade ; Kimtech Science & commerce ; Kimwipes&commerce ; Fisher</td><td>Scientific</td><td>06-666-A</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de magnésium, grade ACS</td><td>VWR International</td><td>97061-356</td><td></td></tr><tr><td>Sulfate de magnésium heptahydraté, grade ACS</td><td>VWR International</td><td>97062-130</td><td></td></tr><tr><td>Tubes de microcentrifugation, 1,5 mL</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tubes de microcentrifugation, 2,2 mL</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mini Beadbeater-96, 115 volts</td><td>Bio Spec Products Inc.</td><td>1001</td><td></td></tr><tr><td>Murashige & Skoog, Laboratoires Caisson de sels basaux</td><td>, Inc.</td><td>MSP01-50LT</td><td></td></tr><tr><td>Pipet-Lite XLS LTS 8-CH Pipette 20-200uL</td><td>Rainin</td><td>L8-200XLS</td><td></td></tr><tr><td>Pipet-Lite XLS LTS 8-CH Pipette 2-20uL</td><td>Rainin</td><td>L8-20XLS</td><td></td></tr><tr><td>Polystyrène 100mm x 25mm boîte de Pétri stérile</td><td>VWR International</td><td>89107-632</td><td></td></tr><tr><td>Polystyrène 150mm x 15mm Boîte de Pétri stérile</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB08-757-14</td><td></td></tr><tr><td>Boîte de Pétri stérile en polystyrène 150 x 15 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-148</td><td></td></tr><tr><td>Ultra eau de Javel germicide brillante et pure 5,7 % chlore disponible (défini comme 100 % d’eau de Javel)</td><td>Agrafes</td><td>1013131</td><td></td></tr><tr><td>Rifampicine</td><td>Biotechnologie</td><td>Dorée R-120-25</td><td></td></tr><tr><td>Silwet L-77 (copolymère tensioactif organosilicone non ionique C13H34O4 Tensioactif Si3)</td><td>Fisher Scientific</td><td>NCO138454</td><td></td></tr><tr><td>Tips LTS 20 &mu ; L 960/10 GPS-L10</td><td>Rainin</td><td>17005091</td><td></td></tr><tr><td>Tips LTS 250 &mu ; L 960/10 GPS-L250</td><td>Rainin</td><td>17005093</td><td></td></tr><tr><td>VWR Pince à dissection pointe fine, 4.5"</td><td>VWR International</td><td>82027-386</td><td></td></tr></tbody></table>

identification à haut débit de la résistance aux seringues pseudomonas pv. tomate dans la tomate à l’aide de semis flood assay

High-Throughput Identification of Resistance to Pseudomonas syringae pv. Tomato in Tomato using Seedling Flood Assay

La tomate est une culture d’importance agronomique qui peut être infectée par les seringues Pseudomonas, une bactérie Gram-négative, entraînant une maladie bactérienne des taches. La tomate-P. syringae pv. le pathosystem de tomate est employé couramment pour disséquer la base génétique des réponses innées de plante et de résistance de la maladie. Alors que la maladie a été gérée avec succès pendant de nombreuses décennies grâce à l’introduction de l’amas de gènes Pto/Prf de Solanum pimpinellifolium dans la tomate cultivée, les souches de la race 1 des seringues P. ont évolué pour surmonter la résistance conférée par le groupe génétique Pto/Prf et se produisent dans le monde entier.
Les espèces de tomates sauvages sont d’importants réservoirs de diversité naturelle dans la reconnaissance des agents pathogènes, parce qu’elles ont évolué dans divers environnements avec différentes pressions pathogènes. Dans les écrans typiques pour la résistance aux maladies dans la tomate sauvage, les plantes adultes sont utilisées, ce qui peut limiter le nombre de plantes qui peuvent être examinées en raison de leur temps de croissance prolongée et de plus grandes exigences d’espace de croissance. Nous avons mis au point une méthode pour dépister les semis de tomates vieux de 10 jours pour détecter la résistance, ce qui réduit au minimum le temps de croissance des plantes et l’espace de la chambre de croissance, permet un roulement rapide des plantes et permet de tester de grandes tailles d’échantillons. Les résultats de la survie ou de la mort peuvent être traités comme des phénotypes discrets ou sur une échelle de résistance définie par la quantité de nouvelle croissance des semis survivants après les inondations. Cette méthode a été optimisée pour filtrer les semis de tomates vieux de 10 jours pour la résistance à deux souches de seringues P. et peuvent facilement être adaptées à d’autres souches de seringues P.

Détection de l’immunité PtoR-négociée dans les cultivars et les lignées isogéniques à l’aide de l’essai de résistance aux semis La figure 5 montre des résultats représentatifs pour les cultivars Moneymaker-PtoR et Moneymaker-PtoS 7 à 10 jours après les inondations avec PstDC3000. Avant l’infection, les semis de 10 jours ont montré des cotyledons complètement émergés et agrandis et des premières feuilles vraies émergentes. Les semis ont ...

L’essai d’inondation de semis facilite le criblage rapide des adhésions de tomate sauvage pour la résistance à la bactérie de seringue de Pseudomonas. Cet essai, utilisé en conjonction avec l’essai de croissance bactérienne de semis, peut aider à caractériser davantage la résistance sous-jacente à la bactérie, et peut être employé pour dépister la cartographie des populations pour déterminer la base génétique de la résistance.

Identification à haut débit de la résistance aux seringues Pseudomonas pv. Tomate dans la tomate à l’aide de semis Flood Assay

Tomato is an agronomically important crop that can be infected by Pseudomonas syringae, a Gram-negative bacterium, resulting in bacterial speck disease. ...

Ce protocole à haut débit permet un criblage rapide des semis de tomates des accessions sauvages à l’agent pathogène bactérien Pseudomonas seringues. L’analyse des inondations de semis minimise le temps de croissance des plantes et les besoins en chambre de croissance, permet un roulement rapide des plantes et permet de tester de grandes tailles d’échantillons. Cet essai est un outil puissant qui peut être utilisé pour dépister la résistance dans les accessions sauvages et d’autres lignées avec des antécédents génétiques complexes.Le protocole fournit des indications spécifiques pour l’innoculation des inondations de deux souches de seringues Pseudomonas. Cependant, il est polyvalent et peut être modifié pour détecter la résistance de l’hôte à d’autres pathogènes bactériens. Yana Hasan, spécialiste de la recherche dans mon laboratoire, démontrera la procédure.Commencez par faire pousser les semis de tomates. Placer les graines de tomate dans un tube de microcentrifugeuse de 2,2 millilitres et ajouter deux millilitres de solution d’eau de Javel à 50 %. Faire basculer le tube pendant 25 minutes, puis retirer la solution d’eau de Javel à l’l’intérieur d’une pipette.Ajouter deux millil

high-throughput-identification-resistance-to-pseudomonas-syringae-pv

Research

Recherche

JoVE Journal

Bioengineering

Bioingénierie

A la mort cellulaire à base d'analyse pour PTI dans les plantes de Nicotiana benthamiana est décrite.

Dosage pour Pathogen-Associated Molecular Motif (PAMP)-Triggered Immunité (PTI) chez les plantes

Source : Hassan, J. A., et al. Identification à haut débit de la résistance à Pseudomonas syringae pv. Tomate dans la tomate à l’aide d’un test d’inondation de semis. J. Vis. Exp. (2020).Cette vidéo fait la démonstration d’une méthode de dépistage de la résistance bactérienne dans différentes souches de tomates à l’aide de semis âgés de dix jours inoculés avec une suspension bactérienne. Il explique comment les bactéries envahissent les stomates, délivrent des protéines effectrices pour...

Essai d’inondation des semis pour le dépistage de la résistance bactérienne des tomates

Source: Liu, X., et al. Bacterial Leaf Infiltration Assay for Fine Characterization of Plant Defense Responses using the Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae Pathosystem. J. Vis. Exp. (2015).This video demonstrates a method to assess the bacterial load in Arabidopsis thaliana leaves infected with Pseudomonas syringae. Leaf discs from infected leaves are homogenized, serially diluted, and plated onto nutrient-rich agar to promote bacterial colony formation. Colony counts are then used to...

Assessing Pseudomonas syringae Infection Load in Arabidopsis thaliana Leaves

La quantification de la croissance des agents pathogènes est un outil puissant pour caractériser diverses réponses immunitaires d’Arabidopsis thaliana (ci-après : Arabidopsis). La méthode décrite ici présente un test d’infiltration à la seringue optimisé pour quantifier le Pseudomonas syringae pv. maculicola Croissance d’ES4326 dans les feuilles adultes d’Arabidopsis.

Bactérienne Feuille Infiltration Essai de caractérisation fine des réponses de défense des plantes à l&#39;aide du<em&gt; Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae</em&gt; Pathosystème

Cet article décrit deux méthodes pour quantifier des réponses de défense dans Arabidopsis thaliana suivant l'exposition aux eliciteurs immunisés : l'éclatement oxydant transitoire, et l'inhibition de la croissance de plant.

Pattern-Triggered Oxidative Burst and Seedling Growth Inhibition Assays in Arabidopsis thaliana

Ici, nous présentons une méthode polyvalente pour la transformation des racines de tomate suivie de l’inoculation avec Ralstonia solanacearum pour effectuer l’analyse génétique simple pour l’étude de la maladie bactérienne de flétrir.

Transformation des racines de tomate suivie de l’inoculation avec Ralstonia Solanacearum pour l’analyse génétique directe de la maladie bactérienne de wilt

Le présent protocole décrit une méthode qui permet l’analyse de l’expression génique unicellulaire sur des populations de Pseudomonas syringae cultivées dans l’apoplaste végétal.

Analyse unicellulaire de l’expression des gènes de Pseudomonas syringae dans le tissu végétal

Ici, nous présentons une méthode simple d’observation directe et de mesure automatisée des réponses stomatiques à l’invasion bactérienne chez Arabidopsis thaliana. Cette méthode exploite un dispositif d’imagerie stomatique portable, ainsi qu’un pipeline d’analyse d’images conçu pour les images de feuilles capturées par l’appareil.

Observation directe et mesure automatisée des réponses stomatiques à Pseudomonas syringae pv. tomate DC3000 chez Arabidopsis thaliana

Cette vidéo fournit un protocole détaillé pour l'étude du profil pharmacologique de canaux à l'aide humaine TRPA1 Flexstation 3. Le protocole couvre les détails de préparation de cellules, le colorant de charge et le fonctionnement du lecteur de microplaques, Flexstation 3.

Essai de calcium à base de cellules pour les moyennes et criblage à haut débit fonctions de canaux TRP utilisant Flexstation 3

Une description de la formation d'un micro-réseau de polymère en utilisant une technique de photopolymérisation sur la puce. La caractérisation à haut débit de surface en utilisant la microscopie à force atomique, des mesures de contact avec l'eau d'angle, rayons X et spectroscopie de photoélectrons temps de vol des ions secondaires spectrométrie de masse et un dosage de la fixation des cellules est également décrit.

Microarrays polymères pour la découverte à haut débit des biomatériaux

Découvrez le test d'inondation de semis pour le criblage à haut débit de la résistance à Pseudomonas syringae chez la tomate. Cette méthode permet d'évaluer rapidement de grands échantillons d'accessions sauvages.

Identification à haut débit de la résistance aux seringues Pseudomonas pv. Tomate dans la tomate à l’aide de semis Flood Assay

Explorer plus de vidéos