Un modèle de souris de sarcome de tissus mous incomplètement réséqué pour l’essai (Neo)adjuvant thérapies

Ce protocole vise à imiter le cadre clinique de la maladie résiduelle après la chirurgie de débulking de tumeur, et nous permet donc de tester de nouvelles thérapies de cancer dans le contexte de la guérison postopératoire de blessure. L’avantage de cette technique est qu’elle permet la normalisation de la quantité de blessure infligée et de la quantité de tumeur à rester. Cette technique est particulièrement importante pour les études précliniques dans la mesure où l’identification de nouveaux traitements pour les cancers, qu’il rechute localement un exemple de ce qui est sarcome des tissus mous.

Cette démonstration visuelle est essentielle pour démontrer la technique d’inversion, qui nous permet d’exposer la tumeur attachée au côté de la peau. Commencez cette procédure par l’inoculation sous-cutanée des cellules cancéreuses préparées chez la souris, telle que décrite dans le protocole textuel. Le jour 12, après l’inoculation, lorsque les tumeurs ont atteint une taille d’environ 50 millimètres carrés, dosez des souris avec 100 microlitres de buprénorphine sous-cutanée dans le scruff du cou, 30 minutes avant la chirurgie.

Installez la zone chirurgicale avec le coussin chauffant recouvert d’un manteau de banc et installez un cône nasal pour l’anesthésie. Disposez de l’équipement chirurgical propre afin qu’ils soient facilement accessibles, y compris la chlorhexadine, l’écouvillon, la gaze, le gel pour les yeux, deux forceps incurvés, des ciseaux, un applicateur de clip, un dissolvant de clip et des recharges de clip. Réchauffez la chambre chauffante à 37 degrés Celsius et installez un autre coussin chauffant pour la récupération.

Notez que cette procédure nécessite deux personnes. Un assistant doit surveiller de près la respiration de la souris pendant l’intervention. Après anesthésier la souris telle que décrite dans le protocole de texte, effectuez un test de pincement et un test réflexe cornéen pour s’assurer que la souris est entièrement anesthésiée avant de commencer la chirurgie.

Couvrez les yeux de la souris d’une petite quantité de gel ophtalmique pour éviter la sécheresse oculaire. Commencez cette chirurgie en écouvillonnant la zone chirurgicale avec de la chlorhexadine. À l’aide de forceps et d’une paire de ciseaux faire une incision droite d’un centimètre le long du côté dorsale, à trois millimètres de la tumeur.

Ne coupez pas la peau directement couvrant la tumeur car elle ne guérira pas bien. Évitez d’utiliser un scalpel pour couper la tumeur et utilisez des pinces à épiler pour ramasser les morceaux. À l’aide d’une pince à épiler, retirer le fascia et les tissus adipeux sous-cutanés entre la tumeur et le péritoine.

La tumeur sous-cutanée est normalement attachée au côté de la peau. Ouvrez la plaie en tenant doucement la peau sur le côté porteur de tumeur à l’aide d’une pince à épiler et inverser la tumeur de sorte qu’elle soit visible à l’extérieur. À l’aide d’une paire de ciseaux, couper la capsule tumorale de la moitié pour enlever, à partir de la base de la tumeur la plus proche de l’ouverture.

Pour la chirurgie de 50%debulk, coupé à travers le milieu de la tumeur. À l’aide de forceps incurvés ramasser la section de la tumeur à enlever. Ramassez les restes de la zone de débulk.

Pour 75% debulk, commencez par effectuer un débulk de tumeur de 50%puis coupez dans la moitié les 50% restants de tumeur. Ramasser 25% de la tumeur à l’aide de forceps incurvés. Pour fermer le site chirurgical, placez le reste de la tumeur sous la peau et à l’aide de forceps, tirez les volets de la peau ensemble et alignez la peau le long de la plaie.

Maintenez la peau ensemble à cinq millimètres du bord de la plaie et utilisez des pinces chirurgicales pour fermer la plaie à partir du côté, le plus proche des forceps. Appliquez autant de clips que nécessaire pour vous assurer qu’aucun tissu sous-jacent n’est exposé. En général, trois à quatre clips sont appliqués avec des écarts de deux millimètres entre les clips.

Laissez les souris récupérer en les mettant dans la chambre chauffante chaude. Placez la cage de la souris sur le coussin chauffant. Surveillez les souris dans la chambre chauffante jusqu’à ce qu’elles se soient remises de l’anesthésie.

Ensuite, remettre les souris dans la cage, laisser la cage sur le coussin chauffant pendant encore 10 minutes jusqu’à ce que les souris soient devenues plus actives. Donnez aux souris des aliments humides et mous. Surveillez les souris une heure après la chirurgie pour la récupération.

Surveillez à nouveau les souris à la fin de la journée et le lendemain matin et assurez-vous que les clips restent en place. Traitez les souris de façon périopératoire avec la thérapie de l’avent ou du néoadjuvant à un moment donné, selon le traitement d’intérêt. Traiter, par exemple, les souris avec une dose de 100 microgrammes d’anti-CTLA-4 intraperitoneally le jour 15 après l’inoculation.

Alternativement, traitez les souris avec trois doses de 200 microgrammes d’anti-PD-1 intraperitoneally les jours, 15, 17, et 19 après inoculation. La résection chirurgicale incomplète des tumeurs millimétriques carrées de 50, indiquée ici par la ligne pointillée a comme conséquence la repousse 100% reproductible des tumeurs en l’absence de l’immunothérapie adjuvant. Par conséquent, la croissance tumorale à une taille de 50 millimètres carrés est une taille idéale pour le débulk partiel.

Le modèle a ensuite été utilisé pour tester les immunothérapies adjuvantes à l’aide d’anticorps contre les modules de point de contrôle, la protéine quatre associée aux lymphocytes T cytotoxiques et le récepteur de la mort programmé. Traitement des souris avec anti-CTLA-4, a abouti à un taux de guérison de 80%Alors que le traitement des souris avec anti-PD-1 a abouti à un taux de guérison de 25%La réponse avec anti-PD-1 fournit une occasion de le tester de nouvelles combinaisons, pour améliorer encore le taux de réponse. Il est important que la tumeur restante reste attachée à la peau, sinon l’approvisionnement en sang sera coupé et la tumeur deviendra nécrotique.

Après cette procédure, les tumeurs peuvent être analysées par une variété de méthodes, telles que la cytométrie de flux afin d’évaluer comment la chirurgie affecte les cellules d’infiltration tumorale. Ce modèle de souris nous a permis d’explorer comment la cicatrisation des plaies influe sur les immunothérapies cancéreuses.