Production de poulets de chair à croissance rapide sans germes à partir d’une ligne commerciale pour les études sur le microbiote

Jusqu’à présent, la production d’oiseaux exempts de germes était limitée à la race animale pour la recherche. Nous montrons ici qu’il est possible de le faire avec des animaux commerciaux. Cette technique permet de réaliser des études sur l’influence du microbiote à partir du patrimoine génétique des oiseaux d’élevage.

Lors de la tentative de ce protocole, il est important de contrôler la reproduction de l’espèce choisie dans les conditions standard et de posséder une solide connaissance du travail dans les isolateurs. Commencez par installer des tubes de 50 millilitres, des pipettes en plastique, des aliments irradiés, de l’eau autoclavée et des récipients en plastique scellés stériles dans un isolant rigide sous pression positive. Remplissez le piège germicide de transfert avec une solution d’ammonium quaternaire à 2 % et stérilisez l’isolateur trois fois avec de la vapeur de formaldéhyde en déplaçant les matériaux à l’intérieur de l’isolateur entre chaque stérilisation pour assurer la désinfection de toutes les surfaces de contact.

Au moins deux jours avant d’introduire les œufs, réglez la température de l’isolateur à 37 degrés Celsius. Le jour de l’introduction, réglez l’aréomètre à 65 à 70 % d’humidité relative. Après avoir sélectionné des œufs propres et impeccables, décontaminez immédiatement la surface de l’œuf en les trempant dans une solution d’acide peracétique à 1,5 % pendant cinq minutes, puis transportez les œufs vers l’installation expérimentale à l’aide d’une boîte décontaminée à la vapeur de formaldéhyde.

Conservez les œufs pendant 24 heures à 14 degrés Celsius, puis répétez la stérilisation avec 1,5 % d’acide peracétique et placez les œufs dans un incubateur d’éclosion pendant 19 jours. Le 19e jour, vérifiez la fertilité, la viabilité et le développement de l’embryon à l’aide d’une bougie à œufs légère dans des conditions stériles. Sélectionnez des œufs vivants et embryonnés et décontaminez-les en les vaporisant avec une solution d’acide peracétique à 1,5 % pendant 30 secondes ou jusqu’à ce que toute la surface de chaque œuf soit recouverte.

Transférez les œufs dans les isolateurs d’éclosion stériles et rincez-les à l’eau déminéralisée stérile avant de les placer dans l’espace d’éclosion. Après l’éclosion, les animaux sont maintenus dans les isolateurs stériles, nourris ad libitum avec un régime commercial stérilisé par irradiation gamma et arrosés avec de l’eau du robinet autoclave. Un jour après l’éclosion, prélevez un échantillon fécal directement dans le rectum de différents poussins et regroupez-les dans un tube en verre stérilisé.

Ajoutez un millilitre de selles à neuf millilitres de bouillon de thioglycolate avec résazurine et ajoutez l’échantillon restant à neuf millilitres de bouillon Brain Heart Infusion ou BHI. Incuber les tubes à 37 degrés Celsius sans secouer pendant 18 à 48 heures. À 18 heures, examinez visuellement les tubes pour détecter toute modification du milieu de croissance.

Après 48 heures, prélevez une goutte du bouillon fécal BHI, placez-la sur une lame de verre et observez-la au microscope. Si la présence de bactéries est suspectée, prélever un échantillon de la culture BHI et l’ensemencer sur une plaque de gélose BHI, puis incuber la plaque à 37 degrés pendant 18 à 48 heures. Si des colonies apparaissent, identifiez les bactéries à l’aide d’une technique à haut débit telle que la spectrométrie de masse MALDI-TOF.

Six cycles de génération de poussins exempts de germes ont été réalisés avec des œufs ROSS PM3 provenant de deux fermes françaises différentes. Au total, 853 œufs ont été collectés et après deux étapes de décontamination et 19 jours d’incubation, 86,40 % étaient viables. Sur les œufs viables, 490 ont subi une troisième étape de décontamination et ont été introduits dans différents isolateurs d’éclosion pour un taux d’éclosion moyen de 79,80 %, ce qui représente un taux d’éclosion de 68,94 % par rapport au nombre initial d’œufs collectés.

Les résultats d’éclosion varient considérablement de 41,67 % à 88,16 % des oisillons viables par rapport au nombre d’œufs collectés. Cet effet était directement corrélé à l’âge des poules pondeuses, où les œufs provenant de poules plus âgées étaient moins viables. Les six passages ont été effectués à l’aide de quatre isolateurs d’éclosion différents.

Après contrôle bactériologique, il a été confirmé que les animaux de 14 des 16 isolateurs étaient exempts de germes, ce qui correspond à un taux de réussite de 86,5 %. Cela passe par le respect des procédures de désinfection et surtout, le contrôle de l’introduction des éléments via le sas liquide. Cette procédure permet aux animaux de mesurer l’impact du microbiote sur la physiologie et la santé des oiseaux.

Il peut être adapté et utilisé pour étudier le microbiote d’autres oiseaux d’élevage ou d’animaux sauvages si les œufs sont accessibles.