Name: Visualisation de l’innervation immunoréactive du peptide lié au gène de la calcitonine du dura mater crânien de rat avec immunofluorescence et traçage neuronal (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-01-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 28 s
Description: Découvrez la visualisation des fibres nerveuses immunoréactives au CGRP et des vaisseaux sanguins dans la dure-mère crânienne de rat par immunofluorescence sur montage entier. Cette méthode permet d'étudier les interactions neurovasculaires en trois dimensions.

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Cette étude a été soutenue par le projet du National Key R&D Program of China (code de projet n° 2019YFC1709103; n° 2018YFC1707804) et de la National Natural Science Foundation of China (code de projet n° 81774211; n° 81774432; n° 81801561).

Cette étude a été approuvée par le Comité d’éthique de l’Institut d’acupuncture et de moxibustion de l’Académie chinoise des sciences médicales (numéro de référence D2018-09-29-1). Toutes les procédures ont été effectuées conformément au National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (National Academy Press, Washington, D.C., 1996). Douze rats mâles adultes Sprague-Dawley (poids 220 ± 20 g) ont été utilisés dans cette étude. Les animaux [numéro de licence SCXK (JING) 2017-0005] ont été fournis par les National Institutes for Food and Drug Control.
1. Innervation de la dura mater crânienne de rat
<ol><li>
Perfusions
	<ol>
<li>Injecter par voie intrapéritonéale une surdose de solution de tribromoéthanol (250 mg/kg) au rat pour induire l’euthanasie.</li>
		<li>Une fois que l’haleine s’arrête, perfuser transcardiaquement avec 100 mL de solution saline normale à 0,9 %, suivie de 250 à 300 mL de paraformaldéhyde à 4 % dans un tampon phosphate de 0,1 M (PB, pH 7,4).</li>
		<li>Après perfusion, retirez la peau de la tête et ouvrez le crâne pour exposer la dura mater et la face dorsale du cerveau. Disséquer ensuite la dura mater crânienne le long du tronc cérébral jusqu’au bulbe olfactif dans le motif de montage entier(Figure 1). Effectuer une post-fixation dans du paraformaldéhyde à 4 % pendant 2 h, puis cryoprotéger dans du saccharose à 25 % dans du PB 0,1 M pendant plus de 24 h à 4 °C.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Immunohistochimie de fluorescence pour le mcrp et le étiquetage de la phalloïde REMARQUE: Une combinaison de la souillure fluorescente de CGRP et du phalloidin a été appliquée pour indiquer la corrélation spatiale des fibres nerveuses dural et des vaisseaux sanguins dans le mater crânien de dura de rat dans le modèle de tout-monter.<ol>
<li>Rincer la dura mater crânienne dans 0,1 M PB pendant environ 1 min.</li>
		<li>Incuber le mater de dura dans une solution de blocage contenant 3% sérum d’âne normal et 0,5% Triton X-100 dans 0,1 M PB pendant 30 min.</li>
		<li>Transférer la dura mater dans l’anticorps anti-CGRP de souris (1:1000) dans 0,1 M PB contenant 1% de sérum d’âne normal et 0,5% de Triton X-100 pendant la nuit à 4 °C11.</li>
		<li>Laver la dura mater trois fois en PB 0,1 M le lendemain.</li>
		<li>Incuber le dura mater dans une solution mélangée d’anticorps secondaire Alexa Fluor 488 anti-âne (1:500) et de phalloïde 568 (1:1000) dans 0,1 M PB contenant 1% de sérum d’âne normal et 0,5% de Triton X-100 pendant 1,5 h à température ambiante (26 °C).</li>
		<li>Laver la dura mater trois fois en PB 0,1 M.</li>
		<li>Coupez les bords et montez-les sur des lames de microscope (voir la table des matériaux).</li>
		<li>Mettez des lamelle avec 50% de glycérine avant l’observation.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Observation et enregistrement
	<ol>
<li>Observez les échantillons fluorescents sous un microscope fluorescent ou un système d’imagerie confocale.</li>
		<li>Prenez les images de la dura mater à monture entière par un microscope fluorescent équipé d’un appareil photo numérique (4x, NA: 0,13), et utilisez un temps d’exposition de 500 ms. Les mosaïques d’images de la dura mater ont été complétées par un logiciel de microscope fluorescent (voir table des matériaux).</li>
		<li>Prenez des images des fibres nerveuses CGRP-immunoreactive et des vaisseaux sanguins phalloïdine-marqués dans le mater de dura utilisant un microscope confocal. Les longueurs d’onde d’excitation et d’émission étaient de 488 nm (vert) et de 594 nm (rouge). Le trou d’épingle confocal est de 110 (20x) et 105 μm (40x). La résolution de capture d’image est de 640 x 640 pixels.</li>
		<li>Capturez 20 images dans des images de 2 μm de chaque section épaisse de 40 μm et effectuez l’intégration d’image unique dans la mise au point avec un système logiciel associé au traitement d’image confocale pour l’analyse 3D comme suit : Définir le plan focal de départ | Définir le plan focal d’extrémité | Définir la taille de l’étape | Choisissez le motif de profondeur | | de capture d’image Série Z.
</li>
		<li>Utilisez un logiciel de retouche photo pour ajuster la luminosité et le contraste des images afin d’optimiser la visualisation. Faites attention à ne pas supprimer les données des images.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Étude de traçage rétrograde avec FG
<ol><li>Interventions chirurgicales
	<ol>
<li>Déterminer la zone de coordonnées d’intérêt chez le rat crânien dura mater.</li>
		<li>Préparez une micro-seringue de 10 μL et testez-la avec de la paraffine liquide.</li>
		<li>Anesthésier les rats avec une solution de tribromoéthanol (150 mg/kg) par injection intrapéritonéale. Vérifiez la profondeur de l’anesthésie par le manque de réponse au pincement des pincements.</li>
		<li>Rasez la tête du rat avec un rasoir électrique.</li>
		<li>Mettez des barres d’oreille émoussées au rat et placez-le sur le dispositif stéréotaxique. Ensuite, mettez le porte-bouche et appliquez une pommade ophtalmique sur les yeux.</li>
		<li>Nettoyez le site chirurgical de la peau de la tête à l’aide de 10% d’iode povidone suivi de 75% d’éthanol.</li>
		<li>Faites une incision le long de la ligne médiane du cuir chevelu.</li>
		<li>Enlever brutalement le périoste et les tissus musculaires du crâne à l’aide d’applicateurs stériles à bout de coton(figure 1A).</li>
		<li>Percez un petit trou (~5-7 mm) à l’aide d’une perceuse à bavure avec un trépan à pointe ronde (#106) sur les os pariétal et temporel gauches au-dessus du MMA12,et assurez-vous que le mater crânien dura a été maintenu intact(Figure 1B).</li>
		<li>Construire une berge autour du trou avec du silicate dentaire pour limiter la propagation du traceur(figure 1C).</li>
		<li>Ajouter 2 μL de 2% FG dans le trou autour de MMA avec une micro-seringue de 10 μL (Figure 1D).</li>
		<li>Couvrez le trou avec un petit morceau d’éponge hémostatique.</li>
		<li>Mettez un morceau de film de paraffine sur le trou et scellez les bords avec de la cire d’os pour éviter la fuite de traceur et pour éviter de contaminer les tissus environnants.</li>
		<li>Suturer la plaie avec du fil stérile.</li>
		<li>Gardez les rats dans une zone chaude jusqu’à ce qu’ils aient complètement récupéré.</li>
		<li>Retournez les rats dans leurs cages et ajoutez un antibiotique et un analgésique dans l’eau potable.</li>
	</ol></li>
	<li>Perfusions et sections
	<ol>
<li>Après 7 jours de survie, perfuser ces rats comme mentionné ci-dessus dans les procédures décrites à la section 1.1.</li>
		<li>Disséquer les DRG TG et C1-4, puis les post-fixer et les cryoprotéger comme mentionné ci-dessus à la section 1.1.3(Figure 1F).</li>
		<li>Couper le TG et les DRG à l’épaisseur de 30 μm sur un système de microtome cryostat dans la direction sagittale et monté sur des lames de verre revêtues de silane.</li>
	</ol></li>
	<li>Doubles immunofluorescences pour le FG- et CGRP-étiquetage dans le TG et les DRG REMARQUE: Bien que le FG-étiquetage puisse être directement observé avec l’éclairage UV sous la lampe au mercure sans coloration supplémentaire13,14,15,16,les neurones marqués avec FG ont été examinés plus avant dans TG et DRGs cervicaux utilisant de doubles immunofluorescences avec FG et CGRP pour révéler les origines des fibres nerveuses CGRP-immunoreactive dural dans le TG et les DRG.<ol>
<li>Encerclez les sections avec le stylo histochimique.</li>
		<li>Incuber les sections pendant 30 minutes dans une solution bloquante contenant 3% de sérum d’âne normal et 0,5% de Triton X-100 dans 0,1 M PB.</li>
		<li>Transférer les échantillons dans la solution d’anti-fluorogold de lapin (1:1000) et d’anticorps anti-CGRP de souris (1:1000) dans 0,1 M PB contenant 1% de sérum d’âne normal et 0,5% de Triton X-100 pendant la nuit à 4 °C.</li>
		<li>Laver les sections trois fois dans 0,1 M PB le lendemain.</li>
		<li>Incuber dans une solution mixte d’anticorps secondaire anti-lapin Alexa Fluor 594 (1:500) et anti-souris Alexa Fluor 488 (1:500) d’âne dans 0,1 M PB contenant 1% de sérum d’âne normal et 0,5% de Triton X-100 pendant 1,5 h à température ambiante.</li>
		<li>Laver et appliquer des lamelle de couverture sur les sections en tant que procédures décrites aux étapes 1.2.6 et 1.2.8.</li>
	</ol></li>
	<li>Observation et enregistrement
	<ol>
<li>Prenez des images des neurones marqués FG dans TG et DRGs sous éclairage UV par microscope fluorescent équipé d’un appareil photo numérique.</li>
		<li>Capturez des images des neurones marqués FG et CGRP dans TG et DRG sous un microscope fluorescent équipé d’un appareil photo numérique.</li>
		<li>Utilisez le logiciel d’édition pour ajuster la luminosité et le contraste des images et pour ajouter des étiquettes dans les images.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Kekere, V., Alsayouri, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy%2C+Head+and+Neck%2C+Dura+Mater%5BTitle%5D)+AND+%22StatPearls%22%5BJournal%5D)">Anatomy, Head and Neck, Dura Mater.</a> StatPearls. , StatPearls Publishing. Treasure Island (FL). (2020).</li>
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</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Dans cette étude, nous avons avec succès démontré la distribution et l’origine des fibres nerveuses CGRP-immunoreactive dans le mater crânien de dura utilisant l’immunofluorescence, la reconstruction 3D et les approches neurales de traçage avec l’anticorps CGRP et le traceur neural FG, fournissant les preuves histologiques et chimiques pour mieux comprendre le réseau neurovascular dural.
Comme on le savait, cgrp joue un rôle essentiel dans la pathogénie de la migraine4,...

La dura mater crânienne est la couche la plus externe des méninges pour protéger le cerveau et contient des vaisseaux sanguins abondants et différents types de fibres nerveuses1,2. De nombreuses études ont montré que le dura mater crânien sensibilisé peut être le facteur clé conduisant à l’apparition de maux de tête, impliquant la vasodilatation et l’innervation anormales3,4,5. Ainsi, la connaissance de la structure neurovascular dans le mater crânien de dura est importante pour comprendre la pathogénie des maux de tête, particulièrement pour la migraine.
Bien que l’innervation de dura ait été précédemment étudiée avec l’immunohistochemistry conventionnel, la corrélation spatiale des fibres nerveuses et des vaisseaux sanguins dans le mater crânien de dura ont été moins étudiées6,7,8,9. Afin d’indiquer la structure neurovasculaire dural plus en détail, le peptide gène-connexe de calcitonine (CGRP) et la phalloïdine ont été choisis comme marqueurs pour souiller respectivement les fibres nerveuses dural et les vaisseaux sanguins dans le mater crânien de dura de tout-monter avec l’immunofluorescence et l’histochimie fluorescente10. Il peut s’agir d’un choix optimal pour obtenir une vue tridimensionnelle (3D) de la structure neurovasculaire. En plus, le fluorogold (FG) a été appliqué sur le secteur autour de l’artère méningitique moyenne (MMA) dans le mater crânien de dura pour déterminer l’origine des fibres nerveuses CGRP-immunoreactive, et tracé au ganglion de trigeminal (TG) et aux ganglions dorsaux cervicaux (C) de racine (DRGs), alors que les neurones FG-labeled étaient plus loin examinés ainsi que CGRP utilisant l’immunofluorescence.
Le but de cette étude était de fournir un outil efficace pour étudier la structure neurovascular dans le mater crânien de dura pour l’innervation CGRP-immunoreactive et son origine. En tirant parti du mater transparent de dura de tout-monter et en combinant l’immunofluorescence, le tracé rétrograde, les techniques confocale, et la reconstruction 3D, nous nous attendions à présenter une vue 3D originale de la structure neurovascular dans le mater crânien de dura. Ces approches méthodologiques peuvent être encore servies pour explorer la pathogénie de différents maux de tête.

<table><tbody><tr><td>Alexa Fluor 488 âne anti-souris IgG (H+L)</td><td>Invitrogen de Thermo Fisher Scientific</td><td>A21202</td><td>Protéger de la lumière ; RRID : AB_141607</td></tr><tr><td>Instrument de stéréotaxie cérébrale</td><td>Narishige</td><td>SR-50</td><td></td></tr><tr><td>CellSens Dimension</td><td>Olympus</td><td>Version 1.1</td><td>Logiciel de microscope fluorescent</td></tr><tr><td>Système d’imagerie confocale</td><td>Olympus</td><td>FV1200</td><td></td></tr><tr><td>Fluorogold (FG)</td><td>Fluorochrome</td><td>52-9400</td><td>Protection contre la lumière</td></tr><tr><td>Système d’imagerie fluorescente</td><td>Olympus</td><td>BX53</td><td></td></tr><tr><td>Microtome de congélation</td><td>Thermo</td><td>Microm International&nbsp ; GmbH</td><td></td></tr><tr><td>Olympus FV10-ASW 4.2a</td><td>Olympus</td><td>Version 4.2</td><td>Système logiciel de traitement d’images confocal</td></tr><tr><td>Micro Drill</td><td>Saeyang Microtech</td><td>Marathon-N7</td><td></td></tr><tr><td>Souris anti-CGRP</td><td>Abcam</td><td>ab81887</td><td>RRID : AB_1658411</td></tr><tr><td>Sérum d’âne normal</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>017-000-121</td><td></td></tr><tr><td>Phalloïdine 568</td><td>Moléculaire& nbsp ; Sondes</td><td>A12380</td><td>Protéger de la lumière</td></tr><tr><td>Photoshop et&nbsp ; Illustration</td><td>Adobe</td><td>CS6</td><td>Logiciel de retouche photo</td></tr><tr><td>Rabbit anti- Fluorogold</td><td>Abcam</td><td>ab153</td><td>RRID : AB_90738</td></tr><tr><td>Sprague Dawley</td><td>National Institutes for Food and Drug Control</td><td>SCXK (JING) 2014-0013</td><td></td></tr><tr><td>Superfrost plus lames de microscope</td><td>Thermo</td><td>#4951PLUS-001</td><td>25x75x1mm</td></tr></tbody></table>

visualisation de l’innervation immunoréactive du peptide lié au gène de la calcitonine du dura mater crânien de rat avec immunofluorescence et traçage neuronal

Visualizing the Calcitonin Gene-Related Peptide Immunoreactive Innervation of the Rat Cranial Dura Mater with Immunofluorescence and Neural Tracing

Le but de cette étude était d’examiner la distribution et l’origine du peptide gène-connexe de calcitonine (CGRP) - fibres nerveuses sensorielles immunoreactive du mater crânien de dura utilisant l’immunofluorescence, la reconstruction (3D) tridimensionnelle et la technique de tracé rétrograde. Ici, les fibres nerveuses et les vaisseaux sanguins ont été souillés utilisant l’immunofluorescence et les techniques histochimiques avec CGRP et le phalloïdine fluorescent, respectivement. La corrélation spatiale des fibres nerveuses CGRP-immuoreactive dural et des vaisseaux sanguins ont été démontrées par reconstruction 3D. Pendant ce temps, l’origine des fibres nerveuses CGRP-immunoreactive ont été détectées par technique neurale de traçage avec le fluorogold (FG) du secteur autour de l’artère méningitique moyenne (MMA) dans le mater crânien de dura au ganglion de trigeminal (TG) et aux ganglions dorsaux cervicaux (C) de racine (DRGs). En outre, les caractéristiques chimiques des neurones FG-marqués dans le TG et le DRGs ont été également examinées ainsi que CGRP utilisant de doubles immunofluorescences. Profitant de l’échantillon transparent de tout-montage et de la reconstruction 3D, on lui a montré que les fibres nerveuses CGRP-immunoreactive et les artérioles phalloidin-étiquetées fonctionnent ensemble ou formant séparément un réseau neurovascular dural dans une vue 3D, alors que les neurones FG-marqués étaient trouvés dans les branches ophtalmiques, maxillaires, et mandibulaires de TG, aussi bien que le C2-3 DRGs ipsilateral du côté de l’application de traceur dans laquelle certains des neurones FG-marqués ont présenté avec l’expression CGRP-immunoreactive. Avec ces approches, nous avons démontré les caractéristiques distributionnelles des fibres nerveuses CGRP-immunoreactive autour des vaisseaux sanguins dans le mater crânien de dura, aussi bien que l’origine de ces fibres nerveuses de TG et de DRGs. Du point de vue de la méthodologie, il peut fournir une référence valable pour comprendre la structure neurovascular compliquée du mater crânien de dura sous l’état physiologique ou pathologique.

Structure neurovasculaire de la dure-mère crânienne Après la souillure histochimique immunofluorescente et fluorescente avec CGRP et phalloïdine, des fibres nerveuses CGRP-immunoreactive et des artérioles dural phalloïdine-marqués et des tissus conjonctifs ont été clairement démontrés dans tout le mater crânien de dura de montage entier dans un modèle 3D(figure 2C,D, E, F). Il a été montré que les fibres nerveuses cgrp-imm...

Ici nous présentons un protocole pour visualiser la corrélation spatiale du peptide gène-connexe de calcitonine (CGRP) - fibres nerveuses immunoreactive et vaisseaux sanguins dans le mater crânien de dura utilisant l’immunofluorescence et l’histochimie fluorescente avec CGRP et phalloidin, respectivement. En outre, l’origine de ces fibres nerveuses a été tracée rétrograde avec un traceur neural fluorescent.

Visualisation de l’innervation immunoréactive du peptide lié au gène de la calcitonine du dura mater crânien de rat avec immunofluorescence et traçage neuronal

The aim of this study was to examine the distribution and origin of the calcitonin gene-related peptide (CGRP)-immunoreactive sensory nerve fibers of the ...

Ce protocole peut fournir une référence méthodologique variable pour comprendre la structure neurovascular compliquée du mater crânien de dura sur l’état physiologique ou pathologique. Profitant de la monter de dura de montage entière transparente, la corrélation spatiale des fibres nerveuses immunoréactives dural CGRP et des vaisseaux sanguins peut être démontrée dans une vue 3D. Après euthanasier un rat, perfusé transcardiaquement avec 100 millilitres de solution saline normale à 0,9%, suivis de 250 à 300 millilitres de paraformaldéhyde à 4% dans un tampon phosphate molaire 0,1.Lorsque vous avez terminé, retirez la peau de la tête et ouvrez le crâne pour exposer la dura mater et la face dorsale du cerveau. Disséquer le mater crânien de dura le long du tronc cérébral au bulbe olfactif dans un modèle entier de montage. Rincer le mater crânien dans un tampon phosphate molaire 0,1 pendant environ une minute et l’incuber dans une solution bloquante.Transférer le dura mater dans l’anticorps anti-CGRP de souris pendant la nuit. Le lendemain, laver la dura mater trois fois dans un tampon phosphate molaire 0,1. Incuber le dura mater dans une solution mixte d’anticorps secondaire Alexa Fluor 488 anti-souris et de phalloïde 568 dans 0,1.Tampon phosphate molaire contenant 1% sérum d’âne normal et 0,5% Triton X-100 pendant 1,5 heure à température ambiante. Ensuite, lavez le dura mater trois fois dans un tampon phosphate molaire 0,1, coupez les bords et montez-le sur des lames de microscope. Mettez sur les glissades de couverture avec 50% de glycérine avant l’observation.Imaginez l’ensemble de la monture dura mater avec un microscope fluorescent, puis prenez des images des fibres nerveuses immunoréactives cgrp et des vaisseaux sanguins marqués à la phalloïde dans la douma à l’aide d’un microscope confocal. Rasez la tête du rat avec un rasoir électrique, puis mettez des barres d’oreille émoussées au rat et placez-la sur le dispositif stéréotaxique. Placez le porte-bouche et appliquez une pommade ophtalmique sur les yeux.Nettoyez le côté chirurgical de la peau de la tête à l’aide d’éthanol à 75% et faites une incision le long de la ligne médiane du cuir chevelu. Retirez carrément le périoste et les tissus musculaires du crâne à l’aide d’applicateurs stériles à bout de coton. Percez un petit trou à l’aide d’une perceuse à bavure avec un mors rond sur les os pariétal et temporal gauches au-dessus de l’artère méningée moyenne.Construisez une berge autour du trou avec du ciment de silicate dentaire et ajoutez deux microlitres de fluorogold dans le trou autour de l’artère méningée moyenne avec un microsyringe de 10 microlitres. Couvrez le trou avec un petit morceau d’éponge hémostatique. Mettez un morceau de film de paraffine sur le trou et scellez les bords avec de la cire d’os.Suturer la plaie avec du fil stérile. Gardez les rats dans une zone chaude jusqu’à ce qu’ils aient complètement récupéré. Ensuite, retournez les rats dans leurs cages.Après sept jours de survie, perfuser ces rats avec la solution saline normale de 0,9% suivie du paraformaldéhyde de 4% dans le tampon molaire de phosphate de 0,1. Disséquer le TG et cervical un à quatre DRG, puis les couper à l’épaisseur de 30 micromètres sur un système de microtome cryostat dans la direction sagittale. Et montez les sections sur des lames de verre revêtues de silane.Encerclez les sections avec un stylo histochimique et incuber pendant 30 minutes dans une solution de blocage. Transférer les échantillons dans la solution d’anticorps anti-fluorogold de lapin et d’anticorps anti-CGRP de souris et incuber à quatre degrés Celsius pendant la nuit. Le lendemain, lavez les sections trois fois dans un tampon phosphate molaire 0,1.Incuber les sections lavées dans une solution mixte d’anticorps secondaire anti-lapin Alexa Fluor 594 et d’anticorps secondaire anti-souris Alexa Fluor 488. Ensuite, lavez-les trois fois dans un tampon phosphate molaire 0,1 et appliquez des bordereaux de couverture avec 50% de glycérine pour observation. Prenez des images des neurones marqués par le fluorogold dans TG et DRG sous éclairage UV à l’aide d’un microscope fluorescent.Ensuite, capturez des images des neurones marqués fluorogold et CGRP dans TG et DRGs. Après la souillure histochimique immunofluorescente et fluorescente avec CGRP et le phalloïdine, des fibres nerveuses immunoreactive de CGRP et le phalloidin ont marqué des artérioles dural et des tissus conjonctifs ont été clairement visualisés dans tout le mater crânien entier de dura de montage dans un modèle 3D. Les fibres nerveuses immunoreactives épaisses et minces de CGRP fonctionnent parallèlement aux artères dural autour de la paroi vasculaire ou entre les vaisseaux sanguins.Pendant sept jours après application de fluorogold sur la région de l’artère méningitique moyenne et du mater crânien de dura de rat, les neurones marqués par fluorogold ont été détectés dans le TG et les DRGs cervicaux du côté ipsilateral de l’application de traceur, qui a été directement observée sous l’illumination UV de la microscopie fluorescente. Des neurones marqués par Fluorogold ont été trouvés dans chacun des trois branches de TG, avec des concentrations plus élevées sur les divisions ophtalmiques et maxillaires et avec des concentrations plus faibles sur la division mandibulaire. Certains des neurones marqués par le fluorogold ont également été observés dans les deux à trois DRG cervicaux.Ces photographies représentatives de double immunofluorescence montrent des neurones sensoriels dans TG et DRG. Les neurones marqués avec FG, CGRP, et FG et CGRP ont été visualisés par double immunofluorescence. Lorsque vous tentez ce protocole, n’oubliez pas de disséquer complètement le mater crânien dura et de le coller sur une lame dans un motif de montage entier.

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JoVE Journal

Neuroscience

Neurosciences

Source : Shannonhouse, J., et al. Imagerie calcique in vivo Imagerie calcique d’ensembles neuronaux dans des réseaux de neurones sensoriels primaires dans des ganglions de la racine dorsale intacts. J. Vis. Exp. (2023). La vidéo fait la démonstration d’une technique d’imagerie calcique in vivo pour surveiller l’activité neuronale dans les ganglions de la racine dorsale (DRG) d’une souris transgénique. Les neurones DRG expriment un indicateur de calcium qui augmente l’intensité de la...

Imagerie calcique in vivo d’ensembles neuronaux dans les ganglions intacts de la racine dorsale d’une souris

Source : Wang, J., et al. Visualisation de l’innervation immunoréactive du peptide lié au gène de la calcitonine de la dure-mère crânienne du rat avec immunofluorescence et traçage neural. J. Vis. exp. (2021).  Cette vidéo présente une méthode permettant de retracer l’origine des neurones sensoriels dans la dure-mère à l’aide de la microscopie à fluorescence. Un traceur rétrograde est introduit dans la dure-mère exposée d’un rat anesthésié. Le traceur est absorbé par les axones neuronaux...

Étude de l’origine des neurones sensoriels dans la dure-mère à l’aide de la microscopie à fluorescence

protocoles d'immunohistochimie sont utilisées pour étudier la localisation d'une protéine spécifique de la rétine. Les techniques d'imagerie de calcium sont utilisés pour étudier la dynamique du calcium dans les cellules ganglionnaires de la rétine et de leurs axones.

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In vivo Imagerie calcique d’ensembles neuronaux dans des réseaux de neurones sensoriels primaires dans des ganglions du trijumeau intacts

Découvrez la visualisation des fibres nerveuses immunoréactives au CGRP et des vaisseaux sanguins dans la dure-mère crânienne de rat par immunofluorescence sur montage entier. Cette méthode permet d'étudier les interactions neurovasculaires en trois dimensions.

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Visualisation de l’innervation immunoréactive du peptide lié au gène de la calcitonine du dura mater crânien de rat avec immunofluorescence et traçage neuronal

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