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Imagerie et analyse de fluorescence résolues dans le temps de l’invasion des cellules cancéreuses...
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JoVE Journal Biology
Time-Resolved Fluorescence Imaging and Analysis of Cancer Cell Invasion in the 3D Spheroid Model

Imagerie et analyse de fluorescence résolues dans le temps de l’invasion des cellules cancéreuses dans le modèle sphéroïde 3D

Full Text
7,022 Views
07:42 min
January 30, 2021

DOI: 10.3791/61902-v

Louisiane Perrin1, Theodore Tucker1, Bojana Gligorijevic1,2

1Bioengineering Department,Temple University, 2Cancer Biology Program,Fox Chase Cancer Center

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This study presents a protocol for the fabrication of a spheroid imaging device, enabling dynamic and longitudinal fluorescence imaging of cancer cell spheroids to investigate mechanisms of cell invasion in real-time. The technique demonstrates enhanced efficiency and cost-effectiveness for modeling solid tumor invasiveness.

Key Study Components

Research Area

  • Cancer biology
  • Cell invasion dynamics
  • Imaging techniques

Background

  • Invasion of cancer cells into the extracellular matrix is crucial for understanding metastasis.
  • Current methods often lack efficiency and scalability for high-throughput applications.
  • Imaging spheroids can provide insights into cellular behaviors in a more biologically relevant context.

Methods Used

  • 3D printing and PDMS fabrication for spheroid imaging device
  • Cancer cell spheroids of mammary carcinoma
  • Longitudinal fluorescence imaging

Main Results

  • The protocol successfully enables real-time imaging of cancer cell invasion.
  • Embedding spheroids in collagen facilitated longitudinal studies of invasion over six days.
  • Image processing procedures were validated for analyzing spheroid area and morphology over time.

Conclusions

  • This study validates a novel spheroid imaging technique with potential applications in cancer research.
  • The findings emphasize the importance of real-time monitoring in understanding cancer cell dynamics.

Frequently Asked Questions

What is a spheroid imaging device?
A device designed to enable dynamic imaging of cancer cell spheroids, facilitating studies of invasion and cellular dynamics.
How is the device built?
It involves 3D printing a spacer, mixing PDMS, and curing it between glass plates to create the imaging inserts.
What types of cells can be studied?
While demonstrated with mammary carcinoma, the assay is adaptable for various solid tumors.
What are the main benefits of this method?
It improves experimental efficiency, reduces costs, and allows for enhanced real-time monitoring of cell behavior.
How long can spheroids be imaged?
Spheroids can be imaged longitudinally over an extended period, as tested over six days in this study.
Can the technique be used for other biological applications?
Yes, the method can be adapted for various research applications focused on cell invasion and behavior.
Is image processing required?
Yes, the protocol includes a simple image processing procedure to analyze spheroid invasion quantitatively.

Présenté ici est un protocole pour la fabrication d’un dispositif d’imagerie sphéroïde. Ce dispositif permet l’imagerie dynamique ou longitudinale de fluorescence des sphéroïdes de cellules cancéreuses. Le protocole offre également une procédure simple de traitement d’image pour l’analyse de l’invasion des cellules cancéreuses.

Ce protocole peut être utilisé pour étudier les mécanismes régissant l’invasion des cellules cancéreuses dans la matrice extracellulaire en temps réel. Le principal avantage de cette technique est qu’il utilise un dispositif d’imagerie sphéroïde simple, ce qui rend l’essai d’invasion sphéroïde plus facile à mettre en place et améliore son efficacité et son coût. Tandis que nous démontrons utilisant l’essai d’invasion sphéroïde pour modéliser le carcinome mammaire, cet essai est un excellent modèle pour l’invasion de n’importe quelle tumeur pleine dans le tissu sain environnant.

Après l’impression 3D de l’espaceur, weight out un rapport de 10:1 de polymère de base à cross-linker dans une tasse en plastique et utiliser une pipette jetable pour bien mélanger la solution PDMS résultant dans la tasse. Placez la tasse dans une chambre à vide et relâchez rapidement la pression du vide pour éliminer tout air emprisonné à la surface du mélange et dissiper les bulles d’air restantes. Incuber l’espaceur imprimé 3D à 100 degrés Celsius pendant cinq minutes pour augmenter sa flexibilité et nettoyer deux plaques de verre avec 100% isopropanol.

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Biologie numéro 167 sphéroïde cancérologue invasion étiquetage fluorescent imagerie longitudinale microscopie en accéléré microfabrication

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