Immersion alternative dans le glucose pour produire une hyperglycémie prolongée chez le poisson zèbre

Ce protocole induit non envahissantement l’hyperglycémie chez le poisson zèbre pendant jusqu’à 8 semaines. À l’aide de ce protocole, une étude approfondie des effets indésirables de l’hyperglycémie peut être réalisée.

Ce protocole induit l’hyperglycémie chez les poissons zèbres dans un modèle de montée et de chute qui imite l’hyperglycémie qui est vue dans le type deux diabète. Le principal avantage de cette technique est qu’il s’agit d’une technique non invasive qui permet de s’assurer que l’hyperglycémie est la cause de toute altération observée chez les poissons hyperglycémiques. Ce protocole pourrait potentiellement être employé pour explorer des avenues thérapeutiques ou des produits pharmaceutiques qui ciblent des complications de l’hyperglycémie.

Ce protocole comporte de nombreuses étapes, mais lorsque les étapes sont suivies correctement et avec soin, il devrait rapidement devenir une seconde nature. N’oubliez pas cependant de toujours traiter les animaux avec douceur et humanité tout au long du protocole. Commencez par mettre en place six réservoirs, deux pour chaque groupe expérimental.

Utilisez des réservoirs de deux litres, si le nombre total de poissons est inférieur à 20 et des réservoirs de quatre litres si le nombre total de poissons est supérieur à 20. Étiquetez l’un des deux réservoirs, le réservoir de logement et l’autre réservoir de solution. Gardez les réservoirs dans un bain-marie à 28 à 29 degrés Celsius pour maintenir la température de l’eau.

Le premier jour, placez le poisson dans leurs solutions de traitement respectives pendant 24 heures. Le deuxième jour, transférer les poissons de leurs solutions de traitement à l’eau pendant 24 heures. Le troisième jour, transférez le poisson de l’eau vers des solutions de traitement.

Poursuivre cette exposition alternée pour le reste de l’expérience. Transfert quotidien des poissons témoins traités à l’eau d’eau à eau. Assurez-vous que les poissons sont nourris et transférés dans la même fenêtre de deux heures chaque jour pendant toute la durée de l’expérience.

Transférer les poissons de chaque groupe de traitement du réservoir de logement au réservoir de solution correspondant à l’aide d’un filet à poisson standard. Replacez le réservoir contenant le poisson dans le bain-marie et remplacez la pierre d’air et le couvercle du réservoir. Ce réservoir est maintenant le réservoir de logement et le réservoir qui contenait auparavant le poisson est maintenant le réservoir de solution.

Jetez l’ancienne solution et nettoyez le réservoir avec les couvercles du réservoir, les conduites d’air, les pierres d’air et les filets pour éviter l’accumulation de glucose et de mannitol. Utilisez de l’eau et une éponge dédiée pour chaque condition de traitement afin de nettoyer correctement les réservoirs. Séchez les réservoirs de solution nouvellement nettoyés avec une serviette en papier et préparez les solutions pour le lendemain en utilisant ce réservoir.

Assurez-vous que les autres articles sont séchés et séparés par des groupes de traitement appropriés. Pour préparer les solutions de sucre, remplissez chaque réservoir de solution avec deux ou quatre litres d’eau système. Mesurez la quantité correcte de glucose et de mannitol à l’aide d’une balance à chargement par le haut et séparez les bateaux de pesage pour chaque produit chimique.

Ajouter la partie aliquote de glucose ou de mannitol pesée dans le réservoir de solution propre approprié. Remuer les solutions avec des tiges de verre séparées jusqu’à ce que les sucres soient complètement dissous. Retournez ensuite les réservoirs de solution au bain-marie et couvrez-les de leurs couvercles correspondants.

Pour préparer la solution d’eau, remplissez les réservoirs expérimentaux avec de l’eau système Retournez ces réservoirs de solution au bain-marie et couvrez-les de leurs couvercles correspondants. Des valeurs de sucre de sang ont été sensiblement élevées après des traitements de glucose de quatre semaines et de huit semaines. Avec l’hyperglycémie définie comme trois fois les moyennes de contrôle des groupes traités par l’eau et traités par mannitol.

Le tissu rétinien rassemblé après quatre semaines d’hyperglycémie a eu une augmentation des niveaux acides fibrillaires glial de protéine ou de GFAP. L’expression de GFAP est observée dans les cellules gliales de Mueller dans la rétine, qui sont altérées dans la rétinopathie diabétique. Cette augmentation de GFAP a été associée à une augmentation des niveaux nucléaires de kappaB de facteur.

Suggérant que l’hyperglycémie induite déclenche une réponse inflammatoire et un gliosis réactif. Les enregistrements d’ERG après quatre semaines de traitement ont identifié une réponse diminuée dans les rétines traitées par glucose comparées aux contrôles traités par mannitol. Des amplitudes du photorécepteur et des composants bipolaires de cellules ont été diminuées chez les poissons hyperglycemic.

Cette procédure peut être complétée par d’autres tests d’hyperglycémie. Par exemple, un test de mémoire peut être utilisé pour examiner les déficits cognitifs ou enregistrer des réponses visuelles telles que la réponse optomotrice pour évaluer les complications basées sur la vision. Une fois cette technique établie, notre laboratoire a pu l’utiliser pour étudier les complications induites par l’hyperglycémie dans le modèle des poissons zèbres.

Nous avons observé ces complications relativement rapidement, après quatre semaines de traitement.