Gonadectomie et procédures de prélèvement sanguin dans le modèle de téléostéen de petite taille Medaka japonais (Oryzias latipes)

Cette méthode aidera à répondre à des questions clés concernant la fonction physiologique des gonades, y compris le rôle des stéroïdes sexuels dans la plasticité et la régulation du système neuroendocrinien chez les téléostéens et, dans une plus large mesure, chez les vertébrés. Ce protocole permet de réaliser une gonadectomie à un taux de réussite élevé chez les petits modèles de médeka téléostéen, qui est largement utilisé dans le milieu de la recherche. Afin de réussir et d’atteindre un taux de survie élevé, cette technique nécessite une formation appropriée, notamment pour évaluer les gonades et suturer les poissons.

Commencez par retirer le poisson de la solution anesthésique et placez-le horizontalement sur le côté sous un microscope de dissection. Pour effectuer l’ovariectomie chez les femelles, grattez les écailles dans la zone d’incision. Faites doucement une incision de deux à 2,5 millimètres entre les côtes et les nageoires pelvienne et anale à l’aide d’une lame de rasoir.

Pincez doucement l’abdomen du poisson tout en retirant les ovaires à l’aide d’une pince fine à pointe large. Il est important d’éviter de casser les côtes, ce qui peut entraîner la mort. Coupez l’extrémité des ovaires à l’aide de la pince fine et mettez-les de côté.

Pour réaliser l’orchidectomie chez les hommes, faites une incision entre les côtes au-dessus de l’anus et ouvrez l’incision lentement à l’aide de pinces fines. Saisissez doucement les testicules avec la pince et retirez-les lentement. Coupez ensuite l’extrémité des testicules pour les retirer complètement.

Après avoir effectué la procédure, suturez l’incision de la même manière pour les hommes et les femmes. Placez le fil de nylon à côté de la zone d’incision et poignardez la peau du côté droit de l’incision à travers la cavité interne du corps, à l’aide d’une pince ultra-fine pour prélever le fil. Ensuite, percez la peau du côté gauche de l’incision à travers la cavité externe du corps pour retirer le fil.

Fermez l’ouverture de l’incision, faites deux nœuds et coupez l’excédent de fil. Placez les poissons dans l’eau de récupération isotonique et laissez-les y pendant au moins 24 heures avant de les transférer dans le système d’aquarium. Assemblez le tiroir à sang en fixant une aiguille en verre sur le capillaire en silicone.

Cassez la pointe de l’aiguille à l’aide d’une pince à pointe large et enduisez l’intérieur de l’aiguille d’une solution anticoagulante en aspirant et en soufflant. Dirigez l’aiguille vers la zone du pédoncule du poisson, en visant la veine du pédoncule caudal, et prélevez le sang à l’aide de la bouche jusqu’à ce qu’au moins 1/4 du volume total de l’aiguille soit rempli. Relâchez l’aiguille et placez un morceau de ruban adhésif près du côté pointu.

Placez un couvercle avec un trou sur un tube de collecte et placez l’aiguille à l’intérieur du tube à travers le trou avec la pointe de l’aiguille à l’extérieur. Placez les poissons dans l’eau de récupération et laissez-les y pendant au moins 24 heures avant de les transférer dans le système d’aquarium. Faites tourner le sang pendant une à deux secondes à 1 000 fois G pour recueillir le sang dans le tube.

Le taux de survie après l’ovariectomie était de 100 % chez les femmes et de 94 % chez les hommes après l’orchidectomie. Tous les poissons ont survécu à la procédure d’échantillonnage sanguin. Les femelles opérées par Sham ont montré la position OV.

Tous les ovules ont été fécondés et ont poursuivi leur développement embryonnaire. Lorsque la procédure de gonadectomie a été effectuée correctement, la forme du corps du poisson a légèrement changé et aucun morceau de gonade n’est resté. L’incision et la suture ont complètement disparu quatre semaines après la gonadectomie.

Après quatre mois, tous les poissons présentaient toujours un phénotype sain et aucun tissu gonadique n’a été trouvé. L’analyse sanguine chez les femelles a révélé que le niveau d’E2 chez les poissons OVX était significativement plus bas que chez les poissons opérés 24 heures après la chirurgie. Après quatre mois, le niveau d’E2 chez les poissons OVX était encore significativement inférieur à celui des poissons opérés en simulacre.

Les poissons partiellement OVX, où seulement 1/3 à 1/2 de la gonade a été enlevée, ont montré des niveaux d’E2 significativement plus faibles que les poissons opérés en simulacre, et des niveaux d’E2 significativement plus élevés que les poissons entièrement OVX. La concentration de 11-KT chez les mâles orchidectomisés était significativement plus faible que chez les poissons opérés 24 heures après la chirurgie. Après quatre mois, le niveau de 11 KT était toujours inférieur à celui des poissons exploités en alternance.

Les poissons partiellement orchidectomisés présentaient des niveaux de 11-KT inférieurs à ceux des poissons opérés en alternance et des niveaux plus élevés que les poissons entièrement orchidectomisés. Pour s’assurer que la procédure est réussie, il est essentiel de retirer la gonade aussi soigneusement et complètement que possible, sans endommager d’autres organes à l’intérieur du poisson. Comme on sait que les stéroïdes sexuels jouent un rôle important dans la plasticité des cellules cérébrales et hypophysaires, cette technique fournit un outil puissant pour étudier les mécanismes sous-jacents dans les petits modèles téléostéens.