Name: Un modèle murin pour la pancréatite chronique par perfusion de TNBS dans les voies biliaires (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-28T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 44 s
Description: Découvrez la technique optimisée d'infusion de TNBS dans les voies biliaires pour créer un modèle murin de pancréatite chronique chez la souris C57BL/6. Cette méthode permet d'étudier la douleur neuropathique et la fibrose pancréatique.

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Cette étude a été soutenue par le ministère des Anciens Combattants (VA-ORD BLR&D Merit I01BX004536) et les subventions # 1R01DK105183, DK120394 et DK118529 à HW. Nous remercions le Dr Hongju Wu d’avoir partagé son expérience technique.

Toutes les procédures ont été menées avec l’approbation des comités institutionnels de soins et d’utilisation des animaux de l’Université médicale de Caroline du Sud et du Ralph H. Johnson Medical Center. Des souris mâles C57BL/6J âgées de 8 à 10 semaines ont été utilisées dans cette étude. Les souris étaient logées sous un cycle standard de 12 lumières / 12 ténèbres avec un accès ad libitum à la nourriture et à l’eau.
1. Préparation de la solution injectable de TNBS
<ol><li>Préparer de l’éthanol à 10 % dans une solution saline à 0,9 %. Dissoudre le TNBS de base (voir tableau des matériaux)dans de l’éthanol à 10 % jusqu’à une concentration finale de 7,5 mM en ajoutant 7,5 μL de TNBS dans 1 mL d’éthanol à 10 %. ATTENTION : Le TNBS présente un danger chimique. Préparez la solution à l’intérieur d’une hotte et utilisez un équipement de protection individuelle tel que des gants, des lunettes et une blouse de laboratoire pour éviter tout contact direct avec le TNBS.</li>
	<li>Chargez 50 μL de solution de TNBS à 0,75 % dans une seringue à insuline avec une aiguille de calibre 31. Charger 50 μL d’éthanol à 10 % dans une solution saline dans une seringue de la même taille que la commande du véhicule. Placez les seringues sur de la glace et protégez-les de la lumière jusqu’à ce que cela soit nécessaire.</li>
</ol>2. Préparation et chirurgie de la souris
<ol><li>Rasez les cheveux de la zone chirurgicale abdominale.</li>
	<li>Injecter une dose préventive de l’analgésique (p. ex. buprénorphine 0,1 mg/kg d’AP) avant la chirurgie.</li>
	<li>Induire et maintenir la souris sous anesthésie générale avec 1,5-2% d’isoflurane et 1 L/min d’oxygène. Confirmez l’anesthésie en pinçant les orteils et en observant l’animal faute de réflexe.</li>
	<li>Placez la souris sur un coussin chirurgical chauffé pendant la chirurgie. Appliquez une pommade vétérinaire sur chaque œil lorsque la souris est sous anesthésie.</li>
	<li>Désinfectez le site chirurgical en essuyant la zone chirurgicale 3x avec 2% d’iode, suivi de 70% d’alcool (Table des matières).</li>
	<li>Effectuez une laparotomie avec des micro-ciseaux pour générer une incision de 0,5 à 1 cm.</li>
	<li>Exposez doucement le duodénum et localisez le canal biliaire commun à l’aide de cotons-tiges (Table des matériaux).</li>
	<li>Placez un micro-clip hémo droit (Table des matériaux) sur le conduit commun proximal pour empêcher l’écoulement de TNBS ou de solutions de véhicule dans le foie et la vésicule biliaire (Figure 1A, B).</li>
	<li>Exposez doucement le duodénum et insérez l’aiguille dans le canal pancréatique à travers la papille de Vater.</li>
	<li>Une fois que l’aiguille est à l’intérieur du conduit, placez un clip micro-hémo incurvé (Table des matériaux) sur le duodénum entourant l’aiguille (Figure 1A) pour fixer l’aiguille en place et empêcher la solution injectée de pénétrer dans le duodénum.</li>
	<li>Infuser progressivement la solution (TNBS ou véhicule) dans le canal pancréatique pendant une minute. REMARQUE: Le TNBS doit être perfusé lentement pendant une minute de temps, et il est facile de contrôler la vitesse de perfusion lorsque le pancréas est perfusé avec une seringue à insuline avec une aiguille de 5/16 pouce et 31G. Gardez la main aussi stable que possible pour éviter de piquer le canal biliaire. Si le TNBS est injecté avec succès, la couleur jaune peut être visible à l’intérieur du pancréas.</li>
	<li>Après la perfusion, retirez soigneusement la micro-pince près du foie, puis retirez la micro-pince qui maintient l’aiguille et le duodénum.</li>
	<li>Revenir soigneusement au duodénum à sa position d’origine.</li>
	<li>Laisser 0,5 mL de solution saline stérile chaude (36-37 °C) dans la cavité abdominale avant la fermeture, pour aider le duodénum à retrouver sa position d’origine et aider à la récupération du péristaltisme.</li>
	<li>Fermez l’incision dans la couche musculaire à l’aide d’une suture continue avec un point de suture 5-0. Fermez la peau à l’aide d’une suture interrompue avec un point de suture 4-0.</li>
	<li>Placez la cage contenant des souris sur un coussin chauffant pour permettre la récupération de l’anesthésie.</li>
	<li>Confirmez que les souris sont chaudes et capables de mouvements spontanés avant de les renvoyer dans la salle de détention.</li>
	<li>Continuer à fournir un analgésique (p. ex., buprénorphine 0,1 mg/kg p.i.) toutes les 12 h et de la chaleur supplémentaire pendant 48 h après la chirurgie.</li>
</ol>3. Surveillance du comportement de la souris
<ol><li>Retirez les sutures au jour 7 après la chirurgie.</li>
	<li>Surveillez la santé et le comportement de la souris quotidiennement pendant la première semaine après la chirurgie. Surveillez les signes de détresse tels que la vocalisation, la posture du dos voûté ou la réduction de la locomotion. Mesurez le poids corporel tous les deux jours.</li>
	<li>Utilisez les monofilaments de Von Frey (VFF) pour mesurer l’hypersensibilité mécanique abdominale avant et 2, 3 semaines après la chirurgie comme décrit9,14.<ol>
<li>Appliquez des VFF de différentes forces appliquées dans l’ordre croissant sur la région abdominale supérieure 10x tous les 1-2 s. Considérez le soulèvement, la rétraction ou le léchage de l’abdomen (réponse de sevrage) comme une réponse positive.</li>
		<li>Appliquez un stimulus plus fort si une réponse positive n’est pas observée, et un stimulus plus faible si une réponse positive est observée. Le seuil de retrait est la force à laquelle la souris répond 50% du temps.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Collecte et analyse histologique du tissu pancréatique
<ol><li>Sacrifiez les souris sous anesthésie par luxation cervicale et disséquez soigneusement le pancréas de l’intestin et d’autres organes.</li>
	<li>Fixez le pancréas dans du paraformaldéhyde à 10% pendant 24 h, incorporez-le dans de la paraffine, coupez des sections de tissu de 5 μm d’épaisseur et placez-les sur des lames de verre pour les tacher.</li>
	<li>Effectuer la coloration à l’hématoxyline-éosine et à la coloration trichrome de Masson à l’aide des méthodes standard indiquées précédemment4.</li>
</ol>

<ol><li>Klauss, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+induced+vs.+classical+animal+models+of+chronic+pancreatitis%3A+a+critical+comparison%5BTitle%5D)+AND+%22The+Federation+of+American+Societies+for+Experimental+Biology+Journal%22%5BJournal%5D)">Genetically induced vs. classical animal models of chronic pancreatitis: a critical comparison.</a> The Federation of American Societies for Experimental Biology Journal. 32, 5778-5792 (2018).</li>
<li>Liao, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histone+deacetylase+2+is+involved+in+%C2%B5-opioid+receptor+suppression+in+the+spinal+dorsal+horn+in+a+rat+model+of+chronic+pancreatitis+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Medicine+Reports%22%5BJournal%5D)">Histone deacetylase 2 is involved in µ-opioid receptor suppression in the spinal dorsal horn in a rat model of chronic pancreatitis pain.</a> Molecular Medicine Reports. 17 (2), 2803-2810 (2018).</li>
<li>Gui, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trypsin+activity+governs+increased+susceptibility+to+pancreatitis+in+mice+expressing+human+PRSS1R122H%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Trypsin activity governs increased susceptibility to pancreatitis in mice expressing human PRSS1R122H.</a> The Journal of Clinical Investigation. 130 (1), 189-202 (2020).</li>
<li>Sun, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+Stem+Cell+Therapy+Mitigates+Chronic+Pancreatitis+via+Differentiation+into+Acinar-like+Cells+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Adipose Stem Cell Therapy Mitigates Chronic Pancreatitis via Differentiation into Acinar-like Cells in Mice.</a> Molecular Therapy. 25 (11), 2490-2501 (2017).</li>
<li>Aghdassi, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+investigating+chronic+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Fibrogenesis+and+Tissue+Repair%22%5BJournal%5D)">Animal models for investigating chronic pancreatitis.</a> Fibrogenesis and Tissue Repair. 4 (1), 26(2011).</li>
<li>Scoggins, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((p53-dependent+acinar+cell+apoptosis+triggers+epithelial+proliferation+in+duct-ligated+murine+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">p53-dependent acinar cell apoptosis triggers epithelial proliferation in duct-ligated murine pancreas.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 279 (4), 827-836 (2000).</li>
<li>Bradley, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+duct+pressure+in+chronic+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Pancreatic duct pressure in chronic pancreatitis.</a> The American Journal of Surgery. 144 (3), 313-316 (1982).</li>
<li>Zhao, J. B., Liao, D. H., Nissen, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+pancreatitis%3A+can+it+be+translated+to+human+pain+study%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Animal models of pancreatitis: can it be translated to human pain study.</a> World Journal of Gastroenterology. 19 (42), 7222-7230 (2013).</li>
<li>Winston, J. H., He, Z. J., Shenoy, M., Xiao, S. Y., Pasricha, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+behavioral+changes+in+nociception+in+a+novel+rat+model+of+chronic+pancreatitis+for+the+study+of+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Molecular and behavioral changes in nociception in a novel rat model of chronic pancreatitis for the study of pain.</a> Pain. 117 (1-2), 214-222 (2005).</li>
<li>Cattaruzza, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+receptor+potential+ankyrin+1+mediates+chronic+pancreatitis+pain+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Transient receptor potential ankyrin 1 mediates chronic pancreatitis pain in mice.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 304 (11), 1002-1012 (2013).</li>
<li>Bai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anterior+insular+cortex+mediates+hyperalgesia+induced+by+chronic+pancreatitis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Brain%22%5BJournal%5D)">Anterior insular cortex mediates hyperalgesia induced by chronic pancreatitis in rats.</a> Molecular Brain. 12 (1), 76(2019).</li>
<li>Puig-Diví, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+chronic+pancreatic+disease+by+trinitrobenzene+sulfonic+acid+infusion+into+rat+pancreatic+ducts%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Induction of chronic pancreatic disease by trinitrobenzene sulfonic acid infusion into rat pancreatic ducts.</a> Pancreas. 13 (4), 417-424 (1996).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PAX4+Gene+Transfer+Induces+alpha-to-beta+Cell+Phenotypic+Conversion+and+Confers+Therapeutic+Benefits+for+Diabetes+Treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">PAX4 Gene Transfer Induces alpha-to-beta Cell Phenotypic Conversion and Confers Therapeutic Benefits for Diabetes Treatment.</a> Molecular Therapy. 24 (2), 251-260 (2016).</li>
<li>Ceppa, E. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serine+proteases+mediate+inflammatory+pain+in+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Serine proteases mediate inflammatory pain in acute pancreatitis.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 300 (6), 1033-1042 (2011).</li>
<li>Puig-Divi, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+chronic+pancreatic+disease+by+trinitrobenzene+sulfonic+acid+infusion+into+rat+pancreatic+ducts%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Induction of chronic pancreatic disease by trinitrobenzene sulfonic acid infusion into rat pancreatic ducts.</a> Pancreas. 13 (4), 417-424 (1996).</li>
<li>Xu, G. Y., Winston, J. H., Shenoy, M., Yin, H., Pasricha, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+excitability+and+suppression+of+A-type+K%2B+current+of+pancreas-specific+afferent+neurons+in+a+rat+model+of+chronic+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Enhanced excitability and suppression of A-type K+ current of pancreas-specific afferent neurons in a rat model of chronic pancreatitis.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 291 (3), 424-431 (2006).</li>
<li>Drewes, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pain+in+chronic+pancreatitis%3A+the+role+of+neuropathic+pain+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Pain in chronic pancreatitis: the role of neuropathic pain mechanisms.</a> Gut. 57 (11), 1616-1627 (2008).</li>
</ol>

Tous les auteurs déclarent qu’ils n’ont pas de conflit d’intérêts.

L’infusion de TNBS dans les voies biliaires pour induire une pancréatite chronique est techniquement difficile chez la souris, car jusqu’à 22,5% des souris peuvent mourir dans les 3-4 jours suivant la perfusion du médicament10. Ici, ce rapport a affiné la procédure sur la base d’études antérieures et a réduit la mortalité précoce des souris à <10%. Par exemple, l’augmentation du volume de médicaments (de 35 μL à 50 μL) peut garantir que les médicaments atteignent l’ensemble du pancréas. L’utilisat...

La pancréatite chronique (PC) est une maladie inflammatoire chronique caractérisée par l’atrophie du pancréas, la fibrose, les douleurs abdominales et la perte éventuelle des fonctions exocrine et endocrinienne1. Les traitements médicaux et chirurgicaux actuels ne sont pas curatifs mais sont entrepris pour soulager les symptômes qui sont la conséquence de la maladie: douleurs abdominales réfractaires, dysfonctionnement endocrinien et exocrinien. Par conséquent, des traitements plus efficaces sont nécessaires de toute urgence2. Les modèles animaux constituent un outil essentiel pour développer une meilleure compréhension de la maladie et étudier les traitements potentiels3. Plusieurs modèles murins pour la PC ont été développés, dont des modèles de céruléine et / ou d’alcool sont couramment utilisés. Il a été démontré que la céruléine, un oligopeptide stimulant la sécrétion pancréatique, induit de manière reproductible un modèle CP présentant une atrophie pancréatique, une fibrose, entre autres4. Un autre modèle courant utilise des injections en série de L-arginine, qui produit une insuffisance exocrine similaire à celle observée chez les patients humains5. La PC peut également être induite par une ligature complète ou partielle du canal pancréatique, ainsi que par une hypertension du canal pancréatique6,7. Malgré la variété des modèles animaux disponibles pour la PC, aucun de ces modèles ne reproduit efficacement la douleur abdominale ressentie par les patients atteints dePC 8.
Des études antérieures ont montré que l’injection pancréatique locale d’acide 2,4,6-trinitrobenzène sulfonique (TNBS) reproduit la douleur persistante ressentie par les patients atteints dePC 9,10,11. Les souris traitées par TNBS ont démontré une hypersensibilité abdominale et une augmentation des comportements liés à la douleur ainsi qu’une « hypersensibilité généralisée » aux stimuli douloureux, un phénomène qui a été observé chez les patients atteints de PC10. En plus d’imiter avec précision la douleur CP, le modèle TNBS reproduit également d’autres caractéristiques pathologiques de la condition humaine telles que la fibrose, l’infiltration de cellules mononucléaires et le remplacement des cellules acineuses par du tissu adipeux10,12. Cependant, la perfusion de TNBS par les voies biliaires est une procédure techniquement difficile chez la souris qui peut causer la mort. À notre connaissance, il n’existe aucun protocole visuel pour montrer comment la perfusion dans les voies biliaires est effectuée. Dans cet article, nous démontrons la procédure de perfusion de TNBS pour générer un modèle murin CP. Cette procédure aidera à générer des modèles animaux précieux pour l’étude de la PC et d’autres maladies du pancréas et peut être utilisée pour infuser d’autres matériaux (par exemple, virus, cellules) dans le pancréas13.

<table><tbody><tr><td>10 % Formol tamponné neutre v/v</td><td>Fisher Scientific</td><td>23426796</td><td></td></tr><tr><td>Coussinets de préparation à l’alcool, stériles</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-363-750</td><td></td></tr><tr><td>Système d’anesthésie animale</td><td>VetEquip, Inc.</td><td></td><td></td>901806</tr><tr><td>Chlorhydrate de buprénorphine, injection</td><td>Par Sterile Products, LLC</td><td>NDC 42023-179-05</td><td></td></tr><tr><td>Tubes à centrifuger, 15 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>0553859A</td><td></td></tr><tr><td>Éthanol, absolu (200 proof), qualité biologie moléculaire</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2818500</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux de dissection micro fins 4" droits pointus</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5882</td><td></td></tr><tr><td>Pince Graefe 4" pointe extra délicate</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5136</td><td></td></tr><tr><td>Coussin chauffant</td><td>Amazon</td><td>B07HMKMBKM</td><td></td></tr><tr><td>Hegar-Baumgartner Porte-aiguille 5.25"</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-7850</td><td></td></tr><tr><td>Seringue à insuline avec aiguille de calibre 31</td><td>BD</td><td>324909</td><td></td></tr><tr><td>Coussinets de préparation à l’iode</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-027048</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal Critical Care</td><td>NDC 66794-017-25</td><td></td></tr><tr><td>Micro pince d’application de pince 5.5"</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5410</td><td></td></tr><tr><td>Micro clip, droit, fort, incurvé 1x6mm</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5433</td><td></td></tr><tr><td>Micro clip, droit, largeur de clip 0,75 mm</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5420</td><td></td></tr><tr><td>Solution d’acide picrylsulfonique, TNBS, 1M dans H2O</td><td>Millipore Sigma</td><td>92822-1ML</td><td></td></tr><tr><td>Suture en polypropylène 4-0</td><td>Med-Vet International</td><td>MV-8683</td><td></td></tr><tr><td>Suture en polypropylène 5-0</td><td>Med-Vet International</td><td>MV-8661</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de sodium, solution intraveineuse à 0,9 %</td><td>VWR</td><td>2B1322Q</td><td></td></tr><tr><td>Champ chirurgical, stérile</td><td>Med-Vet International</td><td>DR1826</td><td></td></tr><tr><td>Cassette de tissus</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-272416</td><td></td></tr><tr><td>Von Frey filaments</td><td>Bioseb</td><td>EB2-VFF</td><td></td></tr></tbody></table>

un modèle murin pour la pancréatite chronique par perfusion de tnbs dans les voies biliaires

A Mouse Model for Chronic Pancreatitis via Bile Duct TNBS Infusion

La pancréatite chronique (PC) est une maladie complexe impliquant une inflammation pancréatique et une fibrose, une atrophie glandulaire, des douleurs abdominales et d’autres symptômes. Plusieurs modèles de rongeurs ont été développés pour étudier la PC, dont le modèle de perfusion d’acide sulfonique 2,4,6-trinitrobenzène (TNBS) des voies biliaires reproduit les caractéristiques de la douleur neuropathique observées dans la PC. Cependant, la perfusion de médicaments pour les voies biliaires chez la souris est techniquement difficile. Ce protocole démontre la procédure de perfusion de TNBS des voies biliaires pour la génération d’un modèle murin CP. Le TNBS a été perfusé dans le pancréas par l’ampoule de Vater dans le duodénum. Ce protocole a optimisé le volume de médicaments, les techniques chirurgicales et la manipulation des médicaments pendant la procédure. Les souris traitées par TNBS ont montré des caractéristiques de LA PC reflétées par des réductions de poids corporel et du pancréas, des changements dans les comportements associés à la douleur et une morphologie pancréatique anormale. Avec ces améliorations, la mortalité associée à l’injection de TNBS était minime. Cette procédure est non seulement essentielle pour générer des modèles de maladie pancréatique, mais est également utile dans l’administration locale de médicaments pancréatiques.

Les procédures de perfusion des voies biliaires ont été optimisées pour réduire la mortalité des souris associée à cette procédure10. Le TNBS a d’abord été administré dans un volume total de 35 μL ou 50 μL. L’injection de TNBS dans un volume de 50 μL pourrait atteindre l’ensemble du pancréas et induire un phénotype de maladie plus homogène (Figure 1B). De plus, l’injection de TNBS à l’aide d’une seringue à insuline avec aiguille 31G pourrait mieux contrôler la vitesse...

La pancréatite chronique (PC) est une maladie caractérisée par une inflammation et une fibrose du pancréas, souvent associée à des douleurs abdominales intraitables. Cet article se concentre sur le raffinement de la technique pour générer un modèle murin de CP par perfusion de voies biliaires avec de l’acide 2,4,6 -trinitrobenzène sulfonique (TNBS).

Un modèle murin pour la pancréatite chronique par perfusion de TNBS dans les voies biliaires

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. ...

La pancréatite chronique est une maladie complexe impliquant une inflammation pancréatique, une fibrose, des douleurs abdominales et d’autres symptômes. Le modèle de perfusion de TNBS des voies biliaires reproduit la douleur neuropathique observée chez les patients atteints de pancréatite chronique. Ce protocole de perfusion de TNBS des voies biliaires a été optimisé pour induire la génération d’un modèle de pancréatite chronique chez la souris.Comme la fusion des médicaments des voies biliaires chez la souris est techniquement difficile, sa visualisation sera utile aux chercheurs qui débutent dans la méthode. Avant et deux et trois semaines après la chirurgie, utilisez les monofilaments Von Frey pour appliquer différents niveaux de force dans l’ordre croissant sur la région abdominale supérieure d’une souris noire C57 de huit à 10 semaines, 10 fois pendant une à deux secondes par application. Envisagez d’augmenter la rétraction ou le léchage de l’abdomen comme une réponse positive.Ensuite, chargez une seringue à insuline équipée d’une aiguille de calibre 31 avec 50 microlitres d’une solution de TNBS à 0,75% fraîchement préparée. Chargez une deuxième seringue avec 50 microlitres d’éthanol à 10 % dans une solution saline comme contrôle du véhicule et placez les deux seringues sur de la glace à l’abri de la lumière. Après avoir confirmé un manque de réponse au réflexe de pédale, retirez les poils de la région abdominale de la souris anesthésiée en rasant ou en appliquant une crème dépilatoire et placez la souris sur un coussinet chirurgical chauffé sous un microscope à dissection.Appliquez une pommade vétérinaire sur chaque œil et désinfectez le site chirurgical avec trois lingettes séquentielles à deux pour cent d’iode et trois lingettes à 70 pour cent d’éthanol utilisez des micro-ciseaux pour faire une incision de 0,5 à un centimètre en un mouvement continu et utilisez des cotons-tiges pour exposer doucement le duodénum et localiser le canal biliaire commun. Pour empêcher l’écoulement du traitement dans le foie et la vésicule biliaire, utilisez le microscope pour placer un micro-hémoclip droit sur le canal commun proximal et insérez l’aiguille de la seringue chargée en TNBS à travers la papille de vater dans le canal pancréatique. Utilisez un micro-hémoclip incurvé pour fixer l’aiguille et infusez la solution dans le canal pancréatique pendant une minute.Lorsque toute la solution a été livrée, retirez soigneusement les micro-pinces et confirmez que le duodénum est revenu à sa position d’origine. Avant la fermeture de la cavité abdominale, ajoutez 500 microlitres de solution saline stérile de 36 à 37 degrés Celsius pour aider le duodénum à retrouver sa position d’origine et aider à la récupération du péristaltisme. Utilisez une suture continue avec un point de cinq O pour fermer l’incision dans la couche musculaire et fermez la peau à l’aide d’une suture interrompue avec un point de quatre O.Placez ensuite la souris dans une cage de récupération sur un coussin chauffant avec surveillance jusqu’à ce qu’elle soit complètement couchée. Surveillez la santé et le comportement de la souris quotidiennement pendant la première semaine après la chirurgie pour détecter les signes de détresse, tels que la vocalisation, une posture du dos voûté ou réduire la locomotion et mesurer le poids corporel tous les deux jours. Comme observé, l’injection de 50 microlitres d’encre comme démontré entraîne l’infiltration de l’ensemble du pancréas, permettant l’induction d’un phénotype de maladie plus homogène.Dans cette analyse représentative, dans les trois premiers jours après la chirurgie, les souris du groupe témoin ont perdu environ six pour cent de leur poids corporel initial avant de récupérer progressivement et de gagner plus de 100% de leur poids corporel d’origine au jour 21. En revanche, les souris qui ont reçu du TNBS ont perdu environ 15% de leur poids corporel d’origine au cours des cinq premiers jours après la chirurgie et ont retrouvé un peu moins de 100% de leur poids corporel d’origine au jour 21. Par rapport aux souris témoins, les animaux injectés de TNBS ont montré une hypersensibilité mécanique abdominale accrue au cours des deuxième et troisième semaines après la chirurgie.La taille et le poids par poids corporel des pancréas ont été significativement réduits chez les souris TNBS par rapport aux pancréas prélevés sur des animaux témoins, suggérant une atrophie pancréatique marquée chez les animaux traités par TNBS, ce qui correspond aux résultats chez les humains atteints de pancréatite chronique sévère et à long terme. L’analyse histologique de coupes de tissu pancréatique de souris contrôlées traitées à l’éthanol a montré une morphologie normale, tandis que les sections de tissus de souris traitées par TNBS ont présenté une réalisation vide avec une perte massive de cellules acineuses qui ont été remplacées par l’infiltration de cellules graisseuses et la fibrose. Empêcher le TNBS injecté de pénétrer dans la vessie et l’intestin est important car un TNBS a des effets néfastes sur les tissus.Pendant la perfusion, gardez la main aussi stable que possible pour éviter la ponction du canal biliaire. En plus d’induire le développement d’une pancréatite chronique, cet art de souris par perfusion de voies biliaires peut être utilisé pour le développement d’autres modèles de maladies pancréatiques. Ce modèle murin de pancréatite chronique TNBS peut être utilisé pour étudier à la fois la pathogenèse et le traitement de la pancréatite chronique ainsi que d’autres maladies pancréatiques.

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Cette vidéo décrit la procédure de génération d’un modèle murin atteint de pancréatite biliaire aiguë par perfusion pancréatique de taurocholate de sodium. Ce modèle permet d’étudier les changements physiopathologiques induits par le taurocholate de sodium dans le pancréas.

Modèle de pancréatite biliaire aiguë : méthode de génération d’un modèle murin de pancréatite biliaire aiguë par perfusion du canal pancréatique

Les modèles animaux pour la pancréatite aiguë sévère permettent l’étude des changements physiopathologiques au stade initial, facilitant l’observation de l’évolution des événements inflammatoires. Nous fournissons ici un protocole pour l’induction de la pancréatite biliaire aiguë sévère par perfusion rétrograde de taurocholate de sodium dans le canal pancréatique de souris C57BL/6 anesthésiées.

Pancréatite aiguë sévère induite par le taurocholate de sodium chez les souris C57BL/6

Un modèle murin de pancréatite aiguë sévère est décrit ici. La procédure présentée ici est très rapide, simple et accessible, permettant ainsi potentiellement l’étude des mécanismes moléculaires et des différentes interventions thérapeutiques dans la pancréatite aiguë de manière pratique.

Établissement d’un modèle de pancréatite aiguë sévère chez la souris par injection rétrograde de taurocholate de sodium dans le canal biliopancréatique

Nous avons établi un modèle murin de fibrose hépatique chronique, qui fournit un modèle animal approprié pour l’étude mécaniste de la fibrose hépatique induite par le virus de l’atrésie biliaire (AB) et une plate-forme pour les futurs traitements de l’AB.

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L’administration intrapéritonéale de médicaments est une approche non invasive sûre et efficace pour induire des lésions pancréatiques. Cette étude a comparé cinq protocoles d’injection intrapéritonéale distincts sur des souris pour induire divers degrés de lésions pancréatiques et a établi un modèle de lésions pancréatiques sévères pour étudier les changements pathologiques et les stratégies de traitement de la pancréatite aiguë sévère (PAS).

Préparation d’un modèle murin de pancréatite aiguë sévère par une combinaison de céruleine et d’injection intrapéritonéale de lipopolysaccharide

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