Utilisation de l’embryon de poulet comme outil puissant dans l’évaluation des cardiotoxicités développementales

Bonjour à tous. Je suis Qixiao Jiang, professeur agrégé au Département de toxicologie de l’École de santé publique de l’Université de Qingdao. Au nom de mon groupe de recherche, je vais présenter les atouts de l’utilisation de l’embryon de poulet dans le développement de notre évaluation de la toxicité cardio.

L’embryon de poulet est un modèle de développement classique qui présente de multiples avantages tels qu’une manipulation facile, une grande accessibilité, un système indépendant fermé, etc. Travailler avec plusieurs polluants environnementaux, tels que l’acide tannique phénolique. Gaz d’échappement diesel, en particulier la matière sur les nanotubes de carbone.

Nous avons plusieurs méthodes d’exposition établies en laboratoire, mais pour une cause plus importante, les évaluations fonctionnelles sont également effectuées régulièrement. Dans cette vidéo, je vais vous montrer les détails, les méthodes d’exposition et les méthodes d’évaluation fonctionnelle morphologique. N’hésitez pas à nous contacter si vous êtes intéressé.

Merci. Voici nos méthodes d’exposition que je peux vous présenter. Maintenant, la première méthode que je vais introduire est une injection de cellule d’air, où vous allez injecter directement dans la cellule d’air.

Nettoyez la surface des œufs avec une solution de poly-iodure. Il s’agit d’une solution de poly-iodure disponible dans le commerce, diluée avec de l’eau désionisée, 1/5. Et puis, je sèche la coquille d’œuf avec du papier de soie, sans frotter.

C’est important parce que le lavage brisera leur couche protectrice à l’extérieur de la coque. Nettoyez tous les œufs dans la pièce sombre et marquez la cellule d’air avec un crayon. Exclure les œufs présentant des fissures sur la coquille.

Excluez également les œufs avec des cellules d’air sur le côté. Si cela a une pointe émoussée, il est très peu probable que ceux-ci éclosent normalement. Désinfectez la zone de la cellule d’air, ainsi que la sonde métallique, avec 75% d’alcool.

Essuyez-les, puis percez un petit trou au centre de la zone de la cellule d’air avec la sonde. Ne collez pas la sonde profondément dans la cellule d’air. Au lieu de cela, ne cassez la coque qu’avec la pointe de la sonde.

Si le trou n’est toujours pas assez grand, cassez à nouveau la coque à proximité du trou existant, jusqu’à ce qu’il soit assez grand pour vous permettre d’insérer la pointe. Insérez la pointe de la pipette dans le trou avec la pointe touchant la membrane interne. Injectez lentement le mélange et maintenez-le là pendant au moins 10 secondes.

Il s’agit de permettre à l’huile distribuée d’être entièrement distribuée. Et puis retirez la pointe. Maintenant, scellez le trou avec une brosse et une goutte de paraffine fondue.

Veillez à ne pas égoutter de paraffine fondue sur la mémoire interne. Une fois scellés, placez les œufs dans l’incubateur jusqu’à ce qu’ils atteignent le stade embryonnaire souhaité. La deuxième, la méthode que je vais introduire est la Micro injection.

Tout d’abord, les œufs doivent être nettoyés et manipulés comme décrit dans la section d’injection d’air. Cette procédure doit être effectuée dans une hotte stérilisée. Stérilisez la zone des cellules d’air et les instruments avec de l’acétone.

Percez un petit trou au centre de la zone de la cellule d’air avec la sonde métallique. Ne collez pas la sonde profondément dans la cellule d’air, sinon la mémoire interne pourrait être endommagée. Ensuite, utilisez le même processus pour agrandir soigneusement le trou jusqu’à ce que le diamètre soit d’environ deux millimètres.

Cela peut permettre la confirmation du rapport de la mémoire interne. Ensuite, chargez la solution dans un micro-injecteur et insérez soigneusement l’aiguille à travers le trou dans la membrane interne pendant environ trois millimètres au total. Distribuer doucement la solution, puis retirer l’aiguille.

Gardez l’aiguille aussi perpendiculaire que possible. Scellez finement le trou avec un petit morceau de ruban adhésif. Couvrez complètement le trou pour éviter la déshydratation de l’embryon et la mort pendant l’incubation ultérieure.

La troisième méthode que je vais introduire est l’infusion de cellules d’air. où vous instillez un contaminant gazeux dans la cellule de l’air. Nettoyez et manipulez les œufs comme décrit dans la section d’injection de cellules d’air.

Et puis vous pouvez lire les œufs jusqu’au jour embryonnaire 17. Manipulez les œufs au jour embryonnaire 17 pour marquer la zone des cellules d’air. Au jour embryonnaire 18, sortez les œufs de l’incubateur, stérilisez la zone des cellules d’air et les instruments, avec de l’acétone.

Et puis percez soigneusement deux petits trous sur les deux côtés de la cellule d’air. L’un est pour l’injection de gaz ou d’aérosol. L’autre est pour agrandir notre air.

Contrôlez soigneusement la taille des trous, de sorte que le côté du trou d’injection soit juste suffisant pour que l’aiguille du cathéter soit insérée, tandis que le diamètre du trou en expansion doit être un peu plus grand. Environ un millimètre de diamètre. Maintenant, c’est le sac d’échantillon que nous utilisons pour contenir le gaz ou l’aérosol cible.

Vous pouvez remplacer par n’importe quel appareil que vous utilisez. Versez doucement 10 mL de gaz ou d’aérosol dans une seringue. Et puis, attachez soigneusement la seringue à notre aiguille de cathéter avec la télécommande de l’aiguille interne pour qu’elle soit douce.

Insérez doucement cette aiguille de cathéter dans le trou de perfusion. Une fois qu’il est là, appliquez une pression contre l’aiguille du cathéter. Il s’agit de minimiser les fuites du site d’injection.

Un autre doigt peut être placé avec le trou d’expellation pour votre confirmation de perfusion. Si vous faites la perfusion doucement, le flux d’air du trou d’expulsement devrait être facilement ressenti. C’est l’air d’origine dans la cellule d’air qui est expulsé.

Lorsque la perfusion est terminée, scellez immédiatement les deux trous. Ces bandes et le retour des œufs à votre incubateur. Je peux vous présenter notre processus d’évaluation des points de terminaison.

Anesthésier complètement les animaux avec du pentobarbital 33 mg / kg. Injection IP testée par les ouvreurs. Ensuite, placez les poulets sur la table d’opération.

Stériliser la région de l’abdomen et les électrodes avec de l’éthanol. Ensuite, insérez deux électrodes à aiguille des deux côtés de l’abdomen en continu. Assurez-vous que les aiguilles ne pénètrent pas dans la cavité abdominale en soulevant un peu la peau.

Et insérez l’aiguille à partir de là. Une fois insérée, poussez soigneusement l’aiguille vers l’avant jusqu’à ce qu’elle atteigne le côté de la cavité thoracique. Assurez-vous que l’aiguille ne pénètre pas profondément dans le corps ou ne dépasse pas de la peau.

Ensuite, effectuez les mesures avec un instrument électrocardiographique. D’autres instruments de séminaire capables d’ECG peuvent également être utilisés. Il s’agit de notre deuxième méthode d’évaluation du point final consiste à cartographier Motrin.

C’est la section transversale du cœur sur le chemin de HME. C’est le bon ventricule avec lequel nous allons mesurer. Pour ce faire, nous utilisons deux règles.

Règle 1 et règle 2. Maintenant, nous copions simplement la règle un sur l’écran et nous le redimensionnons à la taille appropriée, puis le faisons pivoter. Et nous le déplaçons de sorte que les deux extrémités de la ligne horizontale reposent sur les 2 extrémités des 3 parois du ventricule droit.

Et maintenant, nous avons sept lignes de mesure qui traversent notre paroi de ventricule droit. Maintenant, nous copions également la règle secondaire dans l’image. Nous le redimensionnons également un peu et le faisons pivoter et le remplaçons afin qu’il soit placé de la même manière.

Cette ligne horizontale est parallèle à la paroi externe du ventricule droit. Et la perpendiculaire traverserait le point où les lignes de la substance blanche de la règle rencontrent la paroi interne ou le ventricule droit. Et puis nous faisons des points de mesure afin qu’il puisse être mesuré plus tard avec l’image J.Nous répétons ce processus 7 fois par échantillon, de sorte que notre mesure représentative du ventricule droit.

Je vais vous montrer un résumé des résultats actuels. Il s’agit de l’injection d’APFO dans l’œuf avant l’incubation, et vous pouvez voir qu’avec l’augmentation de celles de l’injection, la concentration sérique LPF dans le sérum a augmenté efficacement. Selon la démonstration, l’efficacité, de la micro injection.

Vous pouvez voir que A est le contrôle, et le B, est l’endroit où l’antivirus exprime en grande fluorescence q protéine a été injecté. Vous pouvez voir une forte fluorescence. Et c’est la démonstration de l’efficacité de la perfusion d’épithélium.

Vous pouvez voir qu’avec la perfusion, des changements spectaculaires de la fibre optique ont été observés dans le tissu du myocarde. D’accord. Et vous pouvez également voir que les intervalles R-R des poulets à couver 0, 1 et 2 semaines. Il a également changé de manière significative après l’infusion avec échappement diesel.

Indiquant que vous tenez compte de cela, cette méthode. Ici, vous pouvez également voir que l’efficacité de la perfusion d’épithélium dans cet exemple. vous pouvez voir que les ventricules droits du cœur ont effectivement augmenté après avoir été infusés d’aérosol avec des gaz d’échappement diesel.

Et aussi bien sûr, nous utilisons ici les méthodes histomorphométriques. Nous vous montrons simplement. C’est très efficace. D’accord.

Ce sont toutes les méthodes que je vais vous présenter. J’espère que cela pourra faciliter le travail d’autres personnes avec l’embryon de poulet en tant qu’outil de recherche puissant en toxicologie du développement. Bonne journée.