Name: Isolement de cellules valvulaires primaires humaines pour la modélisation in vitro de maladies (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-04-16T14:15:00.000+00:00
Duration: 7 min 31 s
Description: Découvrez l'isolation de cellules valvulaires endothéliales et interstitielles primaires humaines pour modéliser la calcification valvulaire aortique. Ce protocole assure 40% de viabilité cellulaire jusqu'à 61 heures post-extraction.

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Nous tenons à remercier Jason Dobbins pour sa discussion perspicace et sa lecture critique de ce manuscrit. Nous tenons à remercier le Center for Organ Recovery and Education pour son aide et son soutien et remercions les donneurs de tissus et leurs familles d’avoir rendu cette étude possible. Tous les échantillons de patients sont prélevés auprès de personnes inscrites à des études approuvées par le comité d’examen institutionnel de l’Université de Pittsburgh conformément à la Déclaration d’Helsinki. Les tissus cadavériques obtenus par l’intermédiaire du Center for Organ Recovery and Education (CORE) ont été approuvés par le Comité de surveillance de la recherche et de la formation clinique impliquant des défunts (CORID) de l’Université de Pittsburgh.
Quelques figurines créées avec Biorender.com.
CSH est soutenu par le National Heart, Lung, and Blood Institute K22 HL117917 et R01 HL142932, l’American Heart Association 20IPA35260111.

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</ol>

IS reçoit le soutien de la recherche institutionnelle d’Atricure et de Medtronic et agit à titre de consultant pour Medtronic Vascular. Aucun de ces conflits n’est lié à ce travail. Tous les autres auteurs n’ont rien à divulguer.

L’obtention de tissus témoins et de tissus pathogènes chez l’homme est essentielle pour la modélisation in vitro et ex vivo des maladies; Cependant, alors que l’on parle souvent des défis de combler l’écart entre le banc et le chevet du patient, l’ordre inverse - passer du bloc opératoire au banc - est souvent tout aussi décourageant. Il est essentiel pour un scientifique fondamental d’obtenir des échantillons primaires de tissus humains en collaboration avec un chirurgien scientifique investi qui dispose d’une équipe d’...

La valvulopathie aortique calcifiée (CAVD) est une pathologie chronique caractérisée par une inflammation, une fibrose et une macrocalcification des feuillets valviques aortiques. Le remodelage progressif et la calcification des feuillets (appelé sclérose aortique) peuvent entraîner une obstruction du flux sanguin (sténose aortique) qui contribue à un accident vasculaire cérébral et conduit à une insuffisance cardiaque. Actuellement, le seul traitement de la CAVD est le remplacement chirurgical ou transcathéter de la valve aortique (SAVR et TAVR, respectivement). Il n’y a pas d’option non chirurgicale pour arrêter ou inverser la progression de la CAVD, et sans remplacement valvulaire, les taux de mortalité approchent 50% dans les 2-3 ans 1,2,3. La définition des mécanismes sous-jacents à l’origine de cette pathologie permettra d’identifier de nouvelles approches thérapeutiques potentielles.
Chez un adulte en bonne santé, les feuillets valviques aortiques ont une épaisseur d’environ un millimètre et leur fonction principale est de maintenir le flux sanguin unidirectionnel hors du ventricule gauche4. Chacun des trois feuillets est composé d’une couche de cellules endothéliales valvulaires (CVE) qui tapisse la surface externe du feuillet et fonctionne comme une barrière. Les CVE maintiennent l’homéostasie valvulaire en régulant la perméabilité, l’adhésion cellulaire inflammatoire et la signalisation paracrine 5,6,7. Les cellules interstitielles valvulaires (CIV) constituent la majorité des cellules de la notice valvulaire8. Les CIV sont disposés en trois couches distinctes dans la notice. Ces couches sont connues sous le nom de ventricularis, de spongiosa et de fibrosa9. Le ventricule fait face au ventricule gauche et contient des fibres de collagène et d’élastine. La couche intermédiaire, la spongiose, contient une teneur élevée en protéoglycane qui offre une flexibilité de cisaillement pendant le cycle cardiaque. La couche externe de fibrose est située près de la surface d’écoulement du côté aortique et est riche en collagène fibrillaire de type I et de type III qui fournit la force nécessaire pour maintenir la coaptation pendant la diastole10,11,12. Les CIV résident dans un état de repos, cependant, des facteurs tels que l’inflammation, le remodelage de la matrice extracellulaire (ECM) et le stress mécanique peuvent perturber l’homéostasie VIC 8,9,13,14,15,16. Avec la perte d’homéostasie, les CIV activent et acquièrent un phénotype de type myofibroblaste capable de prolifération, de contraction et de sécrétion de protéines qui remodèlent le millieuextracellulaire 17. Les CIV activés peuvent se transformer en cellules calcifiantes, ce qui rappelle la différenciation d’une cellule souche mésenchymateuse (CSM) en un ostéoblaste 15,17,18,19,20,21,22,23,24,25.
La calcification semble s’initier dans la couche de fibrose riche en collagène à partir des contributions des CVÉ et des VIC, mais se dilate et envahit les autres couches de la foliole8. Ainsi, il est clair que les CVÉ et les CIV répondent aux stimuli pour réguler positivement l’expression des gènes ostéogéniques, mais les événements précis conduisant à l’activation des gènes ostéogéniques, ainsi que l’interaction complexe entre les cellules et la matrice extracellulaire du feuillet, restent mal définis. Les modèles murins ne sont pas une source idéale pour étudier les facteurs non génétiques de la pathogenèse de la CAVD, car les souris ne développent pas de CAVDde novo 26,27, d’où la nécessité d’utiliser des tissus humains primaires et des lignées cellulaires primaires isolées de ces tissus. En particulier, l’obtention de ces cellules en grand nombre et de bonne qualité est impérative, car le domaine des cultures cellulaires 3D et de la modélisation organoïde est en pleine expansion et est susceptible de devenir une alternative humaine ex vivo aux modèles murins.
Le but de la présente méthode est de partager un flux de travail qui a établi les conditions pour isoler et cultiver efficacement les CVÉ et les CIV obtenus à partir de valves prélevées chirurgicalement de donneurs humains. Des études antérieures ont montré l’isolement réussi des CVÉ et des CIV à partir de valves porcines28 et murines29, à notre connaissance, c’est la première à décrire l’isolement de ces cellules dans les tissus humains. Le protocole décrit ici est applicable aux valves excisées humaines et contourne et améliore considérablement les dommages causés par le temps d’approvisionnement souvent long entre l’excision tissulaire et le traitement en laboratoire en introduisant l’utilisation d’une solution de stockage frigorifique, une solution tamponnée cliniquement utilisée dans les transplantations d’organes qui stabilise considérablement les cellules du tissu excisé. Le protocole décrit ici montre également comment déterminer le phénotype cellulaire et garantir une efficacité élevée de la survie cellulaire avec une contamination croisée cellulaire minimale.

<table><tbody><tr><td>0,45 &mu ; m filter</td><td>Thermo Scientific</td><td>7211345</td><td>Plaque de préparation avec revêtement en collagène</td></tr><tr><td>Plaque de culture cellulaire de 10 cm</td><td>Greiner Bio-One</td><td>664160</td><td>Culture cellulaire/expansion de lignées cellulaires</td></tr><tr><td>10 mL pipette sérologique</td><td>Fisher</td><td>14955234</td><td>Isolement VEC/VIC, culture cellulaire, expansion de lignées cellulaires</td></tr><tr><td>1000 &mu ; Embouts filtrants en L</td><td>VWR</td><td>76322-154</td><td>Culture cellulaire/expansion de lignées cellulaires</td></tr><tr><td>10XL embouts</td><td>filtrants VWR</td><td>76322-132</td><td>Culture cellulaire/expansion de lignées</td></tr><tr><td>cellulaires 15 mL tubes coniques</td><td>Thermo Scientific</td><td>339650</td><td>Stockage de tissus, isolement VIC/VEC</td></tr><tr><td>16 % de solution aqueuse de paraformaldéhyde</td><td>Microscopie électronique Sciences</td><td>15710S</td><td>Fixateur de tissus et de cellules</td></tr><tr><td>190 proof éthanol</td><td>Decon</td><td>2801</td><td>Désinfection</td></tr><tr><td>1x DPBS : pas de calcium, pas de magnésium</td><td>Gibco</td><td>14190250</td><td>solution saline. Isolation VIC/VEC</td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Fisher</td><td>BP2944100</td><td>Solution saline. Préparation tissulaire, isolement VIC/VEC</td></tr><tr><td>20 &mu ; Embouts filtrants L</td><td>VWR</td><td>76322-134</td><td>Culture cellulaire/expansion de lignées cellulaires</td></tr><tr><td>Éthanol 200 proof</td><td>Decon</td><td>2701</td><td>Déparaffinisation d’échantillons de tissus</td></tr><tr><td>2-propanol</td><td>Fisher</td><td>A416P 4</td><td>Fabrication de plaques recouvertes de collagène</td></tr><tr><td>Pipette sérologique</td><td>Fisher</td><td>14955233</td><td>Isolement VEC/VIC, culture cellulaire, expansion de lignées cellulaires</td></tr><tr><td>50 mL Tubes coniques</td><td>Thermo Scientific</td><td>339652</td><td>Stockage de tissus, isolation VIC/VEC</td></tr><tr><td>Antenne de 60 mm</td><td>GenClone</td><td>25-260</td><td>Isolation VEC</td></tr><tr><td>Plaque de culture cellulaire à 6 puits</td><td>Corning</td><td>3516</td><td>Culture cellulaire/expansion de lignées cellulaires</td></tr><tr><td>Acide acétique, glaciaire</td><td>Fisher</td><td>BP2401 500</td><td>Fabrication de plaques recouvertes de collagène</td></tr><tr><td>AlexaFluor 488 phalloïdine</td><td>Invitrogen</td><td>A12379</td><td>Fluorescent f-actine counterstain</td></tr><tr><td>Belzer UW Cold Storage Transplant Solution</td><td>Bridge to Life</td><td>BUW0011L</td><td>Solution de stockage tissulaire</td></tr><tr><td>Albumine sérique bovine, fraction V - Sans acides gras 25g</td><td>Bioworld</td><td>220700233</td><td>confirmation VEC avec CD31+ Dynabeads</td></tr><tr><td>Calponine 1 anticorps&nbsp ;</td><td>Abcam</td><td>ab46794</td><td>Anticorps primaire (coloration VIC positive)</td></tr><tr><td>CD31 (PECAM-1) (89C2)</td><td>Signalisation cellulaire</td><td>3528</td><td>Anticorps primaire (coloration VEC positive)</td></tr><tr><td>CD31+ Dynabeads</td><td>Invitrogen</td><td>11155D</td><td>Confirmation VEC avec CD31+ Dynabeads CDH5</td></tr><tr><td>Signalisation cellulaire</td><td>2500</td><td>Anticorps primaire (coloration VEC positive)</td><td></td></tr><tr><td>Passoire cellulaire avec 0,70 &mu ; m pores</td><td>Corning</td><td>431751</td><td>Isolation VIC</td></tr><tr><td>Collagène 1, protéine de queue de rat</td><td>Gibco</td><td>A1048301</td><td>Fabrication de plaques recouvertes de collagène</td></tr><tr><td>Collagénase II</td><td>Worthington Biochemical Corporation</td><td>LS004176</td><td>Digestion tissulaire. Préparation des tissus, isolement VIC/VEC</td></tr><tr><td>Conflikt Spray désinfectant prêt à l’emploi</td><td>Decon</td><td>4101</td><td></td></tr><tr><td>Désinfection Countess II Compteur de cellules automatisé</td><td>Invitrogen</td><td>A27977</td><td>Compteur de cellules automatisé</td></tr><tr><td>Countess II lamelles de lames réutilisables</td><td>Invitrogen</td><td>2026h</td><td>Compteur de cellules automatisé requis couvercle de lames</td></tr><tr><td></td><td>Fisher</td><td>125485E</td><td>Montage d’échantillons de soupape</td></tr><tr><td>Flacons cryogéniques</td><td>Olympus Plastics</td><td>24-202</td><td>Congélation d’échantillons de cellules/tissus</td></tr><tr><td>Désinfection de l’eau de Javel avec CLOROMAX - Formule concentrée&nbsp ;</td><td>Clorox</td><td>N/A</td><td>Désinfection</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>10569044</td><td>Milieu de croissance. Expansion VIC</td></tr><tr><td>EBM - Milieu de cellules endothéliales, milieu basal, sans rouge de phénol 500</td><td>Lonza Walkersville</td><td>CC3129</td><td>Milieu de croissance. Expansion VEC</td></tr><tr><td>EGM-2 Endothélial Cell Medium-2 - 1 kit SingleQuot Kit</td><td>Lonza Walkersville</td><td>CC4176</td><td>Supplément de milieu de croissance. Expansion VEC</td></tr><tr><td>EVOS FL Microscope</td><td>Life Technologies</td><td>Numéro de modèle : AME3300</td><td>Imagerie fluorescente</td></tr><tr><td>EVOS XL Microscope</td><td>Life Technologies</td><td>AMEX1000</td><td>Visualisation des cellules pendant l’expansion de la lignée cellulaire</td></tr> Sérum de veau fœtal - Premium Select R&<tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td> D Systems</td><td>S11550</td><td>VIC</td></tr><tr><td>expansion Ciseaux fins</td><td>Fine Science Tools</td><td>14088-10</td><td>Préparation des tissus, isolement VIC/VEC</td></tr><tr><td>Fisherbrand Cell Scrapers</td><td>Fisher</td><td>08-100-241</td><td>Expansion VIC</td></tr><tr><td>Fungizone</td><td>Gibco</td><td>15290-026</td><td>Antifongique : Préparation des tissus, isolement VIC/VEC</td></tr><tr><td>Gentamicin</td><td>Gibco</td><td>15710-064</td><td>Antibiotique : Préparation des tissus, isolation VIC/VEC</td></tr><tr><td>Lames de verre</td><td>Globe Scientific Inc</td><td>1358L</td><td>Montage d’échantillons de soupape</td></tr><tr><td>Chèvre anti-souris 488</td><td>Invitrogen</td><td>A11001</td><td>Anticorps secondaire fluorescent</td></tr><tr><td>de chèvre anti-souris 594</td><td>Invitrogen</td><td>A11005</td><td>Anticorps secondaire fluorescent</td></tr><tr><td>de chèvre anti-lapin 488</td><td>Invitrogen</td><td>A11008</td><td>Fluorescent Anticorps secondaire</td></tr><tr><td>Chèvre anti-Lapin 594</td><td>Invitrogen</td><td>A11012</td><td>Anticorps secondaire fluorescent</td></tr><tr><td>Invitrogen Countess II FL Lame réutilisable</td><td>Invitrogen</td><td>A25750</td><td>Compteur de cellules automatisé requis Lame</td></tr><tr><td>Invitrogen NucBlue Fixed Cell ReadyProbes Reagent (DAPI)</td><td>Invitrogen</td><td>R37606</td><td>Contre-coloration fluorescente</td></tr><tr><td>du noyau LM-HyCryo-STEM - 2X Milieu de cryoconservation pour cellules souches</td><td>HyClone Laboratories, Inc.</td><td>SR30002</td><td>Stockage de cellules congelées</td></tr><tr><td>Support de montage Fisher</td><td>Chemical Permount</td><td>SP15-100</td><td>Montage d’échantillons de soupape</td></tr><tr><td>Conteneur de congélation Mr. Frosty</td><td>Nalgene</td><td>51000001</td><td>Conteneur pour congélation contrôlée d’échantillons</td></tr><tr><td>Mycoplasma-ExS Spray</td><td>PromoCell</td><td>PK-CC91-5051</td><td>Désinfection</td></tr><tr><td>Pénicilline-Streptomycine</td><td>Gibco</td><td>15140163</td><td>Antibiotique. Expansion VIC</td></tr><tr><td>Plasmocin</td><td>Invivogen</td><td>ANTMPT</td><td>Anti-mycoplasme. Isolement et expansion VIC/VEC</td></tr><tr><td>Anticorps SM22a</td><td>Abcam</td><td>ab14106</td><td>Anticorps primaire (coloration positive VIC)</td></tr><tr><td>Ciseaux à motif standard</td><td>Outils de science fine</td><td>14001-14</td><td>Préparation des tissus, isolement VIC/VEC</td></tr><tr><td>Coton-tige stérile</td><td>Puritan</td><td>25806 10WC</td><td>Isolement VEC</td></tr><tr><td>Swingsette cassette de tissu humain</td><td>Simport Scientific</td><td>M515-2</td><td>Récipient d’enrobage de tissus</td></tr><tr><td>Taylor Forceps (17cm)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11016-17</td><td>Préparation des tissus, isolement VIC/VEC</td></tr><tr><td>Solution Trypan Blue, 0,4</td> %<td>Gibco</td><td>15250061</td><td>solution de comptage cellulaire</td></tr><tr><td>TrypLE Express</td><td>Enzyme Gibco</td><td>12604021</td><td>Splitting VIC/VECs</td></tr><tr><td>Kit Von Kossa</td><td>Polysciences</td><td>246331</td><td>Coloration des coupes de paraffine des tissus pour la calcification</td></tr><tr><td>Anticorps contre le facteur de von Willebrand</td><td>Abcam</td><td>ab68545</td><td>Anticorps primaire (coloration VEC positive)</td></tr><tr><td>Xylènes</td><td>Fisher Chemical</td><td>X3S-4</td><td>Échantillons de tissus déparaffinisants</td></tr><tr><td>&alpha ;Anticorps SMA</td><td>Abcam</td><td>ab7817</td><td>Anticorps primaire (coloration VIC positive)</td></tr></tbody></table>

isolement de cellules valvulaires primaires humaines pour la modélisation in vitro de maladies

Isolation of Human Primary Valve Cells for In vitro Disease Modeling

La valvulopathie aortique calcifiée (CAVD) est présente chez près d’un tiers de la population âgée. L’épaississement, le raidissement et la calcification de la valve aortique provoquent une sténose aortique et contribuent à l’insuffisance cardiaque et aux accidents vasculaires cérébraux. La pathogenèse de la maladie est multifactorielle et les stress tels que l’inflammation, le remodelage de la matrice extracellulaire, l’écoulement turbulent et le stress et la tension mécaniques contribuent à la différenciation ostéogénique des cellules endothéliales valvulaires et interstitielles valvulaires. Cependant, les facteurs initiateurs précis qui conduisent la transition ostéogénique d’une cellule saine dans une cellule calcifiante ne sont pas entièrement définis. De plus, le seul traitement actuel pour la sténose aortique induite par la CAVD est le remplacement valvulaire aortique, par lequel la valve native est retirée (remplacement chirurgical de la valve aortique, SAVR) ou une valve de remplacement entièrement repliable est insérée via un cathéter (remplacement transcathéter de la valve aortique, TAVR). Ces interventions chirurgicales ont un coût élevé et comportent des risques graves; Il est donc impératif d’identifier de nouvelles cibles thérapeutiques pour la découverte de médicaments. À cette fin, la présente étude développe un flux de travail où les tissus prélevés chirurgicalement sur les patients et les tissus de cadavres de donneurs sont utilisés pour créer des lignées primaires de cellules valvulaires spécifiques au patient pour la modélisation in vitro de la maladie. Ce protocole introduit l’utilisation d’une solution de stockage frigorifique, couramment utilisée dans la transplantation d’organes, pour réduire les dommages causés par le temps d’approvisionnement souvent long entre l’excision tissulaire et le traitement en laboratoire avec l’avantage de stabiliser considérablement les cellules du tissu excisé. Les résultats de la présente étude démontrent que les cellules valvulaires isolées conservent leur capacité proliférative et leurs phénotypes endothéliaux et interstitiels en culture jusqu’à plusieurs jours après le retrait de la valve du donneur. L’utilisation de ces matériaux permet la collecte de cellules témoins et de cellules CAVD, à partir desquelles les lignées cellulaires de contrôle et de maladie sont établies.

Le protocole ci-dessus décrit les étapes nécessaires à la manipulation des tissus valvulaires humains et à l’isolement et à l’établissement de lignées cellulaires viables à partir de ces tissus. Les feuillets de la valve aortique sont traités pour l’incorporation de paraffine, congelés pour un stockage à long terme pour analyse biochimique ou génétique et digérés pour l’isolement des CVÉ et des CIV (Figure 1). Alors que les échantillons chirurgicaux auront probablement un diagnostic clinique...

Ce protocole décrit la collecte de valves aortiques humaines extraites au cours de procédures chirurgicales de remplacement de valve aortique ou de tissu cadavérique, ainsi que l’isolement, l’expansion et la caractérisation ultérieurs de cellules endothéliales et interstitielles valvulaires primaires spécifiques au patient. Sont inclus des détails importants concernant les processus nécessaires pour assurer la viabilité cellulaire et la spécificité du phénotype.

Isolement de cellules valvulaires primaires humaines pour la modélisation in vitro de maladies

Calcific aortic valve disease (CAVD) is present in nearly a third of the elderly population. Thickening, stiffening, and calcification of the aortic valve ...

L’isolement de la cellule endothéliale et interstitielle valvulaire primaire humaine est essentiel pour comprendre le mécanisme sous-jacent de la pathogenèse de la valvulopathie aortique calcifiée. Lorsque la valve est excisée du tissu natif, la viabilité cellulaire diminue. Nous avons donc identifié une méthode qui prolonge la viabilité cellulaire.Après avoir reçu les échantillons de tissu valvulaire extraits, extraire la racine aortique et immerger le tissu dans un tube conique de 50 millilitres contenant une solution de rinçage stérile. Après une incubation de 10 minutes dans un seau à glace sur une bascule, vaporiser les tubes avec de l’éthanol à 70%. Dans une hotte de culture tissulaire stérile, transférer le tissu dans une boîte de Petri et exciser deux feuillets de valve.Placez une notice dans un flacon cryogénique et congelez le tissu dans de l’azote liquide pour un stockage de moins 80 degrés Celsius. Pour fixer le tissu pour la coloration de la teneur en calcium, couper le deuxième feuillet en deux du nodule à la charnière et placer les deux morceaux de tissu dans une cassette qui est immergée dans 4% de paraformaldéhyde. Ensuite, placez toute la configuration sur la basc

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JoVE Journal

Biology

Biologie

Nous fournissons une méthode pour isoler et cultiver des populations pures de cellules endothéliales valvulaires cardiaques (VEC). VEC peuvent être isolées de chaque côté de la pointe ou un dépliant et immédiatement après, sous-jacente des cellules interstitielles (CIV) isolement est simple.

L&#39;isolement des cellules endothéliales valvulaires

Cet article propose une méthode pour isoler et cultiver la caille ou de poulet...

Isolement et culture de cellules progénitrices embryonnaires aviaires valvulaire

Dans cette vidéo, nous démontrons l’isolement des cellules interstitielles de la valve aortique du cœur d’une souris adulte à l’aide d’une procédure de collagénase en deux étapes et leur culture ultérieure dans un faible volume de milieu de croissance.

Isolement des cellules interstitielles valvulaires de souris : une méthode enzymatique pour isoler et cultiver des CIV à partir de la valve aortique de souris

La capacité d’isoler les cellules endothéliales valvulaires cardiaques (VEC) est essentielle pour comprendre les mécanismes de développement, de maintenance et de maladie des valves.  Nous décrivons ici l’isolement des VEC à partir de souris Tie2-GFP embryonnaires et adultes à l’aide de FACS qui permettra de réaliser des études déterminant la contribution des VEC dans les processus de développement et de maladie.

Isolement des cellules endothéliales murines Valve

Ici, nous présentons un modèle d’écoulement ex vivo dans lequel des valves cardiaques murines peuvent être cultivées permettant l’étude de la biologie de la valve.

La culture de la souris cardiaque Vannes dans le système de culture de tissus Miniature

Ce protocole décrit l’isolement, la culture et la calcification des cellules interstitielles vanne dérivé de rat, un modèle hautement physiologique in vitro d’une valvulopathie aortique calcifiée (CAVD). L’exploitation de ce modèle de rat facilite la recherche CAVD dans l’exploration de la cellule et les mécanismes moléculaires qui sous-tendent ce complex processus pathologique.

Isolement et caractérisation des primaires de Rat vanne cellules interstitielles : un nouveau modèle pour étudier la Calcification de la Valve aortique

Dans cette étude, nous décrivons le processus d’isolement des lymphocytes T à partir d’échantillons frais de valves aortiques calcifiées et les étapes analytiques du clonage des lymphocytes T pour la caractérisation des sous-ensembles de leucocytes adaptatifs à l’aide de l’analyse par cytométrie en flux.

Étude de la calcification de la valve aortique par isolement et culture de lymphocytes T à l’aide de cellules nourricières de Buffy Coat irradié

Cet article décrit l’isolement des cellules de valve aortique de souris par un procédé en deux étapes de collagénase. Les cellules valvulaires isolées de la souris sont importantes pour effectuer différents essais, tels que ce test de calcification in vitro, et pour étudier les voies moléculaires menant à la minéralisation de la valve aortique.

Isolement des cellules valvulaires interstitielles de souris pour étudier la calcification de la valve aortique in vitro

Cet article décrit une méthode basée sur la culture d’explants pour l’isolement et la culture de cellules musculaires lisses aortiques humaines primaires spécifiques au patient et de fibroblastes dermiques. En outre, une nouvelle méthode est présentée pour mesurer la contraction cellulaire et l’analyse ultérieure, qui peut être utilisée pour étudier les différences spécifiques au patient dans ces cellules.

Isolement des cellules musculaires lisses aortiques primaires spécifiques au patient et mesures semi-quantitatives de contraction en temps réel in vitro

Hépatocytes primaires constituent un outil précieux pour évaluer biochimiques, moléculaires fonctions, et métabolique dans un système physiologiquement pertinente expérimentale. Nous décrivons un protocole fiable pour le rat en perfusion du foie in situ, ce qui génère constamment hépatocytes viables jusqu'à à 1,0 ×...

L&#39;isolement et la culture primaire de cellules de foie de rat

Découvrez l'isolation de cellules valvulaires endothéliales et interstitielles primaires humaines pour modéliser la calcification valvulaire aortique. Ce protocole assure 40% de viabilité cellulaire jusqu'à 61 heures post-extraction.

Isolement de cellules valvulaires primaires humaines pour la modélisation in vitro de maladies

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