Quantification des densités cellulaires et des propriétés antigéniques par lévitation magnétique

Cette technique permet de séparer différents types de cellules et de cellules subissant divers processus basés uniquement sur la densité avec peu ou pas de manipulation dans un court laps de temps. Les principaux avantages de cette méthode sont qu’elle est peu invasive, nécessite de petits volumes, fournit des résultats rapides, ne dépend pas des lectures classiques et n’a pas besoin de personnel spécialisé. Cette technique peut être appliquée pour détecter plusieurs maladies, par exemple l’anémie et la septicémie.

Pour commencer, utilisez l’autopiqueur en un clic pour piquer le doigt du donneur de sang positif au facteur rhésus et prélever 10 microlitres de sang dans un millilitre de DPBS. Ajouter un microlitre de colorant fluorescent dans une suspension millilitre des cellules positives du facteur rhésus pour colorer la membrane plasmique par fluorescence et incuber à 37 degrés Celsius pendant 15 minutes. Aézez les cellules en les faisant tourner à 5 600 fois G pendant 15 secondes et lavez la pastille trois fois à l’aide d’un millilitre de DPBS.

Resuspendez la pastille dans un millilitre de HBSS avec du calcium et du magnésium. Utilisez l’autopiqueur en un clic pour piquer le doigt du donneur de sang à facteur rhésus négatif et prélever deux microlitres de sang. Pour préparer le tube expérimental contenant uniquement des billes, ajoutez 174 microlitres de HBSS avec du calcium et du magnésium, un microlitre de perles témoins d’IgG, un microlitre de perles lourdes d’une densité de 1,2 gramme par millilitre et 24 microlitres de gadolinium de 500 millimolaires.

Pour préparer le tube témoin expérimental contenant des IgG, ajoutez 172 microlitres de HBSS avec du calcium et du magnésium, un microlitre de billes témoins d’IgG, un microlitre de perles lourdes, un microlitre de sang négatif au facteur rhésus, un microlitre de suspension sanguine positive au facteur rhésus coloré et 24 microlitres de gadolinium 500 millimolaires. Pour préparer le tube expérimental de l’échantillon, ajoutez 172 microlitres de HBSS avec du calcium et du magnésium, un microlitre de perles enduites d’anti-RhD, un microlitre de perles lourdes, un microlitre de sang négatif au facteur rhésus, un microlitre de suspension sanguine positive au facteur rhésus coloré et 24 microlitres de gadolinium 500 millimolaires. Configurez le dispositif de lévitation magnétique.

Et chargez 50 microlitres de l’échantillon dans un tube capillaire jusqu’à ce que le tube soit rempli. Scellez les extrémités du tube capillaire avec un scellant capillaire en veillant à ce qu’il n’y ait pas de bulles. Placez le tube capillaire dans le support capillaire entre les aimants supérieur et inférieur, ajustez la scène et la mise au point pour une visualisation optimale.

Attendez environ cinq à 20 minutes que les cellules et les billes se déposent à leur position d’équilibre magnétique. En utilisant ce protocole, les cellules sanguines ont été séparées en fonction de la hauteur de lévitation à l’aide du dispositif de lévitation magnétique. Des perles de faible et haute densité ont été utilisées pour fournir des hauteurs de lévitation de densité et des références de taille.

Les cellules polymorphonucléaires lévitaient au-dessus des globules rouges à une concentration d’ions gadolinium de 21 millimolaires. Les vieilles cellules sanguines lévitaient à une concentration d’ions gadolinium de 60 millimolaires. Les globules rouges, les cellules polymorphonucléaires et les lymphocytes ont été séparés à une concentration d’ions gadolinium de 40 millimolaires en fonction de leurs densités intrinsèques.

L’antigène du facteur rhésus a été détecté sur les globules rouges à l’aide de billes recouvertes d’IgG et d’anticorps anti-RhD. Les complexes de globules rouges de billes n’ont pas été générés dans l’échantillon témoin d’IgG, mais les globules rouges colorés par fluorescence capturés par les perles positives du facteur rhésus ont été détectés. La liaison de l’anti-RhB aux cellules positives du facteur rhésus a créé un complexe de cellules perles au centre à la densité intermittente des perles non liées et des globules rouges négatifs.

De plus, la formation complexe a été confirmée par l’observation de la fluorescence émise. Les complexes de billes B formés entre les perles de haute et de basse densité recouvertes d’anticorps contre CR1 et CD47 indiquent la présence de vésicules extracellulaires dérivées de globules rouges. Coiper le capillaire sans introduire de bulles est l’étape la plus difficile et nécessite de la pratique.

Cette méthode pourrait fournir des informations pour l’hématologie, en particulier axée sur les maladies des globules rouges.