Modélisation de l’AVC chez la souris: occlusion transitoire de l’artère cérébrale moyenne via l’artère carotide externe

Différents modèles d’occlusion de l’artère cérébrale moyenne (MCAo) sont utilisés dans la recherche expérimentale sur les accidents vasculaires cérébraux. Ici, un modèle expérimental d’AVC de MCAo transitoire via l’artère carotide externe (ECA) est décrit, qui vise à imiter l’AVC humain, dans lequel le thrombus cérébrovasculaire est enlevé en raison d’une lyse spontanée du caillot ou d’un traitement.

Dans le modèle de filament décrit ici, la restauration complète du flux sanguin et son enregistrement sont des exigences pour assurer un afflux productible chez les souris, en particulier dans les études translationnelles sur les accidents vasculaires cérébraux. Ce modèle présente deux avantages principaux par rapport aux autres modèles d’AVC décrits précédemment. Aucune craniotomie n’est nécessaire et une redépifuture complète du vaisseau sanguin est obtenue.

Le modèle de filament est une intervention chirurgicale complexe impliquant la manipulation de différentes artères. La visualisation et l’explication de tout cela sont des étapes petites mais importantes, qui pourraient accélérer la période d’apprentissage des neurochirurgiens. Connectez la couverture chauffante pour maintenir la température de la zone d’opération et la température corporelle de la souris pendant l’anesthésie à 37 degrés Celsius.

Préparez des ciseaux et des pinces autoclaves, une solution d’éthanol à 70% et une pommade pour les yeux au dexpanthénol, et conservez plusieurs morceaux de coton et de suture en polyester tressé enduit de Cinq O, prêts à l’emploi. Préparez une solution saline à 0,9% dans une seringue d’un millilitre sans aiguille pour garder le site d’incision hydraté. Préparez un support pour la sonde laser Doppler en coupant la pointe d’une pointe de pipette de 10 microlitres.

Une fois la souris complètement anesthésiée, placez-la en position couchée dans la zone d’opération. Insérez doucement la sonde rectale pour surveiller la température tout au long des interventions chirurgicales. Après avoir désinfecté le site chirurgical, coupez ce cuir chevelu entre l’oreille gauche et l’œil pour exposer l’os du crâne.

Ensuite, coupez et retirez le muscle temporal pour visualiser les multiples artères cérébrales ou MCA sous le crâne. Fixez la partie extérieure de la pointe en tenant la sonde laser Doppler ou la fibre sur le dessus du MCA gauche avec de la colle et fermez la peau de sorte que la peau soit également collée. Appliquez deux à trois gouttes de colle durcisseuse pour accélérer le processus.

Assurez-vous que la fibre laser Doppler n’est pas collée et peut être facilement retirée du porte-embout à tout moment. Tournez la souris en position couchée, puis mettez le museau dans le cône d’anesthésie et fixez les pattes avec du ruban adhésif. Désinfectez la peau et les cheveux entourant la poitrine et faites une incision médiane de deux centimètres de long dans le cou.

Utilisez une pince pour séparer la glande sous-maxillaire de la peau et le muscle sternomastoïde. Utilisez des rétracteurs pour exposer le champ chirurgical et trouver l’artère carotide commune gauche ou CCA. Disséquez le CCA libre du tissu conjonctif et des nerfs environnants sans endommager le nerf vagal et effectuez une ligature transitoire avant la bifurcation.

Disséquez l’artère carotide externe ou ECA et nouez un nœud permanent à la partie visible la plus distale. Placez une autre suture sous l’ECA et près de la bifurcation, puis préparez un nœud lâche à utiliser plus tard. Disséquez l’artère carotide interne ou ICA et placez-y un clip microvasculaire d’environ cinq millimètres au-dessus de la bifurcation.

Assurez-vous de ne pas endommager le nerf vagal. Ensuite, coupez un petit trou dans l’ECA entre les ligatures serrées et lâches, en veillant à ne pas couper toute la ECA. Introduisez le filament et avancez-le vers le CCA.

Resserrez la ligature lâche dans l’ECA autour de la lumière pour fixer momentanément le filament dans cette position. Retirer le clip microvasculaire et prévenir les saignements. Après avoir retiré le clip microvasculaire, insérez le filament à travers l’ICA jusqu’à ce que l’origine du MCA soit atteinte.

Fixez le filament dans cette position en resserrant davantage le nœud autour de l’ECA. Enregistrez les valeurs Doppler laser avant et après l’insertion du filament. Retirez l’enrouleur et déplacez le muscle sternomastoïde dans la glande sous-maxillaire avant de suturer la plaie.

Retirez la sonde laser Doppler et placez l’animal dans une chambre de récupération à 37 degrés Celsius pendant une heure. Placez la souris en position couchée dans la zone d’opération avec son museau dans le masque d’anesthésie, puis fixez les pattes de l’animal avec du ruban adhésif. Insérez la sonde laser Doppler dans le support de la sonde.

Retirez la suture de la plaie et utilisez une pince pour séparer la peau, la glande sous-maxillaire et le muscle sternomastoïde. Utilisez des rétracteurs pour exposer le champ chirurgical. Desserrez la suture ECA qui resserre le filament et tirez doucement le filament.

Évitez d’endommager le revêtement en caoutchouc de silicone du filament pendant le retrait. Enregistrez les valeurs Doppler laser avant et après le retrait du filament. Attachez fermement la suture ECA et confirmez l’augmentation du flux sanguin cérébral dans le dispositif laser Doppler.

Ouvrez la ligature transitoire avant la bifurcation du CCA pour rétablir le flux sanguin complet. Retirez l’enrouleur et déplacez le muscle sternomastoïde dans la glande sous-maxillaire avant de suturer la plaie. Ensuite, placez l’animal dans une chambre de récupération à 37 degrés Celsius pendant une heure pour récupérer de l’anesthésie.

Après la récupération, retournez les souris dans leurs cages dans une pièce à température contrôlée et prenez soin des animaux en ajoutant des granulés de nourriture humide et de l’hydrogel dans de petites boîtes de Pétri sur le sol de la cage et en injectant une analgésie toutes les 12 heures jusqu’au troisième jour après la chirurgie. Une fois que le flux sanguin dans le CCA est rétabli après avoir retiré le filament, une redivruption complète du cerveau se produit, ce qui est similaire à la situation observée après une thrombectomie mécanique réussie chez les patients humains. Les animaux victimes d’AVC présentaient un changement significatif dans le score neurologique composite et focal, mais pas dans le score neurologique général par rapport aux animaux simulés.

Le volume d’infarctus récupéré a également été effectué à l’aide d’une coloration violette crésol de coupes cérébrales coronales en série 24 heures après l’induction de l’AVC. La zone lésionnelle comprend le cortex somatosensoriel et moteur, ainsi que des structures sous-corticales, telles que le striatum. La moyenne du volume de l’infarctus était de 61 à 62 millimètres carrés, ce qui représente 48% de l’hémisphère cérébral affecté.

Il est important d’effectuer une dissection adéquate du CCA, de l’ECA et du RCA sans endommager les tissus adjacents, en particulier le nerf vague, pour avoir une bonne visualisation de toutes les structures, et pour pouvoir insérer le filament et obstruer l’origine MCA.