Name: Techniques de manipulation pour réduire le stress chez la souris (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-09-25T14:45:00.000+00:00
Duration: 9 min 3 s
Description: Découvrez la technique de manipulation 3D pour réduire l'anxiété chez la souris en recherche biomédicale. Cette méthode améliore le bien-être animal et la reproductibilité des données expérimentales.

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Les auteurs remercient le comité de soins aux animaux de CAMH d’avoir soutenu ce travail, ainsi que les soignants d’animaux de CAMH qui ont fourni des commentaires détaillés sur l’utilité de la procédure, motivant l’exécution des expériences décrites et la soumission du protocole détaillé pour d’autres utilisateurs. Ce travail a été financé en partie par le Défi BreakThrough de CAMH, décerné à TP, et par des fonds internes de CAMH.

<ol><li>Deacon, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Housing%2C+husbandry+and+handling+of+rodents+for+behavioral+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Housing, husbandry and handling of rodents for behavioral experiments.</a> Nature Protocols. 1 (2), 936(2006).</li>
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<li>Gouveia, K., Hurst, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimising+reliability+of+mouse+performance+in+behavioural+testing%3A+the+major+role+of+non-aversive+handling%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Optimising reliability of mouse performance in behavioural testing: the major role of non-aversive handling.</a> Scientific Reports. 7, 44999(2017).</li>
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<li>Sensini, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+handling+technique+and+handling+frequency+on+laboratory+mouse+welfare+is+sex-specific%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">The impact of handling technique and handling frequency on laboratory mouse welfare is sex-specific.</a> Scientific Reports. 10 (1), 17281(2020).</li>
<li>Ghosal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+handling+limits+the+impact+of+stress+on+metabolic+endpoints%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%26+Behavior%22%5BJournal%5D)">Mouse handling limits the impact of stress on metabolic endpoints.</a> Physiology & Behavior. 150, 31-37 (2015).</li>
<li>Novak, J., Bailoo, J. D., Melotti, L., Rommen, J., Würbel, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Exploration+Based+Cognitive+Bias+Test+for+Mice%3A+Effects+of+Handling+Method+and+Stereotypic+Behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">An Exploration Based Cognitive Bias Test for Mice: Effects of Handling Method and Stereotypic Behaviour.</a> PLoS One. 10 (7), 0130718(2015).</li>
<li>Gouveia, K., Waters, J., Hurst, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+Handling+Tutorial%5BTitle%5D)+AND+%22NC3Rs%22%5BJournal%5D)">Mouse Handling Tutorial.</a> NC3Rs. , (2016).</li>
<li>Gouveia, K., Hurst, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reducing+Mouse+Anxiety+during+Handling%3A+Effect+of+Experience+with+Handling+Tunnels%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Reducing Mouse Anxiety during Handling: Effect of Experience with Handling Tunnels.</a> PLoS One. 8 (6), 66401(2013).</li>
<li>Henderson, L. J., Smulders, T. V., Roughan, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identifying+obstacles+preventing+the+uptake+of+tunnel+handling+methods+for+laboratory+mice%3A+An+international+thematic+survey%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Identifying obstacles preventing the uptake of tunnel handling methods for laboratory mice: An international thematic survey.</a> PLoS One. 15 (4), 0231454(2020).</li>
<li>Percie Du Sert, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ARRIVE+guidelines+2.0%3A+Updated+guidelines+for+reporting+animal+research%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+Biology%22%5BJournal%5D)">The ARRIVE guidelines 2.0: Updated guidelines for reporting animal research.</a> PLOS Biology. 18 (7), 3000410(2020).</li>
<li>Golde, W. T., Gollobin, P., Rodriguez, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid%2C+simple%2C+and+humane+method+for+submandibular+bleeding+of+mice+using+a+lancet%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">A rapid, simple, and humane method for submandibular bleeding of mice using a lancet.</a> Lab Animal. 34 (9), 39-43 (2005).</li>
<li>Guilloux, J. P., Seney, M., Edgar, N., Sibille, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+behavioral+z-scoring+increases+the+sensitivity+and+reliability+of+behavioral+phenotyping+in+mice%3A+relevance+to+emotionality+and+sex%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Integrated behavioral z-scoring increases the sensitivity and reliability of behavioral phenotyping in mice: relevance to emotionality and sex.</a> Journal of Neuroscience Methods. 197 (1), 21-31 (2011).</li>
<li>LaFollette, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+Animal+Welfare+Meets+Human+Welfare%3A+A+Cross-Sectional+Study+of+Professional+Quality+of+Life%2C+Including+Compassion+Fatigue+in+Laboratory+Animal+Personnel%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Veterinary+Science%22%5BJournal%5D)">Laboratory Animal Welfare Meets Human Welfare: A Cross-Sectional Study of Professional Quality of Life, Including Compassion Fatigue in Laboratory Animal Personnel.</a> Frontiers in Veterinary Science. 7 (114), (2020).</li>
<li>Sorge, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+exposure+to+males%2C+including+men%2C+causes+stress+and+related+analgesia+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Olfactory exposure to males, including men, causes stress and related analgesia in rodents.</a> Nature Methods. 11 (6), 629-632 (2014).</li>
<li>Bailoo, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Cage+Enrichment+on+Behavior%2C+Welfare+and+Outcome+Variability+in+Female+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Behavioral+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Effects of Cage Enrichment on Behavior, Welfare and Outcome Variability in Female Mice.</a> Frontiers in Behavioral Neuroscience. 12, (2018).</li>
<li>Spangenberg, E. M., Keeling, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+welfare+of+laboratory+mice+in+their+home+environment+using+animal-based+measures+-+a+benchmarking+tool%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">Assessing the welfare of laboratory mice in their home environment using animal-based measures - a benchmarking tool.</a> Laboratory Animals. 50 (1), 30-38 (2016).</li>
<li>Theil, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epidemiology+of+fighting+in+group-housed+laboratory+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">The epidemiology of fighting in group-housed laboratory mice.</a> Scientific Reports. 10 (1), 16649(2020).</li>
<li>Weber, E. M., Dallaire, J. A., Gaskill, B. N., Pritchett-Corning, K. R., Garner, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aggression+in+group-housed+laboratory+mice%3A+why+can%27t+we+solve+the+problem%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">Aggression in group-housed laboratory mice: why can't we solve the problem.</a> Lab Animal. 46 (4), 157-161 (2017).</li>
<li>Cloutier, S., Baker, C., Wahl, K., Panksepp, J., Newberry, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Playful+handling+as+social+enrichment+for+individually-+and+group-housed+laboratory+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Animal+Behaviour+Science%22%5BJournal%5D)">Playful handling as social enrichment for individually- and group-housed laboratory rats.</a> Applied Animal Behaviour Science. 143 (2), 85-95 (2013).</li>
<li>Panksepp, J., Burgdorf, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((50-kHz+chirping+%28laughter%3F%29+in+response+to+conditioned+and+unconditioned+tickle-induced+reward+in+rats%3A+effects+of+social+housing+and+genetic+variables%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">50-kHz chirping (laughter?) in response to conditioned and unconditioned tickle-induced reward in rats: effects of social housing and genetic variables.</a> Behavioural Brain Research. 115 (1), 25-38 (2000).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêts à divulguer.

Cette étude et le développement de méthodes sont basés sur l’observation que les techniques de manipulation chez la souris sont encore négligées par la communauté scientifique, et que certains laboratoires sont encore réticents à mettre en œuvre des techniques d’accoutumant ou de manipulation pour réduire le stress et la réactivité de leurs animaux avant les expériences. Tout en représentant un engagement de temps, la manipulation des animaux fournit des effets bénéfiques aux animaux qui peuvent contribuer au succès des ...

Les souris et les rats sont des atouts essentiels aux études précliniques1,2 à des fins multiples, y compris les études endocriminales, physiologiques, pharmacologiques ou comportementales2. Du nombre croissant d’études impliquant des animaux, il est apparu que des variables environnementales incontrôlées, y compris l’interaction humaine, influencent divers résultats dans la recherche biomédicale3,4,5. Ceci est responsable de la variabilité significative observée entre les expériences et les laboratoires de recherche4,5, ce qui pose une mise en garde majeure dans la recherche animale.
Diverses approches ont été mises en œuvre dans le but de limiter l’impact des facteurs de stress environnementaux et de réduire la réactivité à l’interaction humaine. Par exemple, pour limiter l’impact des facteurs de stress environnementaux, la normalisation des conditions de logement et les systèmes de logement automatisés6,7 ont été mis en œuvre dans tous les laboratoires. En ce qui concerne l’interaction avec les êtres humains, les approches couramment utilisées pour la manipulation et le transport des animaux ne tiennent guère compte de l’inconfort et du stress des animaux. Par exemple, ramasser les animaux par la queue ou utiliser des forceps8 augmente l’anxiété de base9,10,11, réduit l’exploration9,12 et contribue grandement à la variabilité interindi individuelle au sein et entre les études13,14. En conséquence, d’autres approches ont été développées, telles que la technique de manipulation des tasses, qui est applicable aux souris et aux rats. Dans cette approche, les animaux sont « sortis » de leur cage et tenus par les expérimentateurs avec leurs mains formant une tasse9,10,11. Une autre alternative utile à la manipulation de la queue implique l’utilisation d’un tunnel en polycarbonate pour transférer les souris9,10,15. Cette approche élimine l’interaction directe entre la souris et l’expérimentateur. Les approches en coupe et en tunnel ont montré une efficacité dans la réduction des comportements anxieux et de la peur de l’expérimentateur qui peuvent être exagérées par des techniques de manipulation aversives, telles que la manipulation de la queue9,10.
Par conséquent, de plus en plus de preuves démontrent l’utilité d’une manipulation appropriée des souris pour réduire la variabilité entre les individus9,11et améliorer le bien-être des animaux10. Cependant, les techniques mentionnées ci-dessus sont encore confrontées à des limites. La technique de manipulation des gobelets a été mise en œuvre avec des horaires allant de 10 jours (10 séances sur 2 semaines16)à 15 semaines17,ce qui représente une quantité considérable de temps pour le personnel de l’installation et les expérimentateurs. De plus, l’efficacité de la manipulation de la tasse varie selon la souche9 et la manipulation conventionnelle de la tasse dans les mains ouvertes peut conduire à des souris naïves ou à des souches particulièrement sautillantes de la main9,18. La manutention des tunnels se traduit par des résultats plus cohérents et généralement plus rapides dans l’effleage19. Les tunnels sont également utilisés comme enrichissement de la cage domestique. Ils aident les animaux à s’habituer à la manipulation rapide et offrent les avantages supplémentaires de l’enrichissement. La manipulation en tunnel, cependant, a des limites lors du transfert d’animaux entre appareils. Fait intéressant, Hurst et West9, et Henderson et al.20 ont démontré que l’utilisation d’une manipulation manuelle douce et brève pour transférer les animaux du tunnel à l’appareil n’affecte pas leur phénotype.
Pour fournir une alternative aux méthodes existantes, avec une accoutumance réalisable dans un court laps de temps, cet article décrit une nouvelle technique qui développe la technique de manipulation de la tasse, ne nécessitant donc aucun équipement particulier. Cette approche utilise des jalons pour évaluer le niveau de confort des souris avec le processus de manipulation. Il montre son efficacité pour diminuer la réactivité et le stress des souris (aux niveaux comportemental et hormonal), facilite la manipulation de routine et contribue à réduire la variabilité entre les animaux. Les détails de cette technique sont fournis ici, et son efficacité pour réduire les comportements anxieux, améliorer l’interaction avec les expérimentateurs et limiter la libération d’hormones de stress périphériques (corticostérone) est démontrée dans deux études distinctes (souris mâles et femelles), en comparaison avec la manipulation en tunnel (contrôle positif) et les techniques de manipulation de la queue (contrôle négatif).

<table><tbody><tr><td>23 g x 1 po Aiguille hypodermique stérile BD PrecisionGlide à usage général. Type de paroi régulière et biseau régulier.</td><td>BD</td><td>2546-CABD305145</td><td>Aiguilles pour prélèvement sanguin</td></tr><tr><td>BD Vacutainer&reg ; Tubes EDTA de prélèvement de sang veineux avec lavande BD Hemogard&trade ; bouchon, 2,0 ml (13x75mm), 100/pqt</td><td>BD</td><td>367841</td><td>EDTA Tubes revêtus pour le prélèvement sanguin</td></tr><tr><td>Lit o épis &frac14 ; &rdquo; Litière pour animaux de laboratoire</td> en épis de maïs <td>Bed-O-Cobs</td><td>BEDO1/4</td><td>Nouvelle litière pour l’alimentation supprimée</td></tr><tr><td>Centrifugeuse</td><td>Eppendorf</td><td>Centrifuge 5424 R</td><td>Pour la centrifugation du sang.</td></tr><tr><td>Corticostérone Kit ELISA</td><td>Arbres Dosages</td><td>K003-H1W</td><td></td></tr><tr><td>Appareil photo numérique</td><td>Panasonic</td><td>HC-V770</td><td>Appareil photo pour enregistrer les interactions EPM/Expérimentateur</td></tr><tr><td>Elevated Plus Maze</td><td>Home Made</td><td>n/a</td><td>Labyrinthe personnalisé composé de quatre bras en plexiglas noir (deux bras ouverts (29 cm de long sur 7 cm de large) et deux bras fermés (29 cm de long x 7 cm de large avec des murs de 16 cm de haut)) qui forment une forme en croix avec les deux bras ouverts opposés l’un à l’autre maintenu à 55 cm au-dessus du sol</td></tr><tr><td>Éthanol</td><td>Medstore Maison Marque</td><td>39753-P016-EA95</td><td>Diluer à 70 % avec de l’eau distillée, pour le nettoyage</td></tr><tr><td>Ethovision XT 15</td><td>Noldus</td><td>n/a</td><td>Logiciel automatisé de suivi des animaux</td></tr><tr><td>Laboratoire Rongeurs Diet</td><td>LabDiet</td><td>Rongeurs Diet 5001</td><td>Régime standard pour rongeurs</td></tr><tr><td>Carte mémoire</td><td>Kingstone Technology</td><td>SDA3/64GB</td><td>Pour l’enregistrement vidéo et transfert de fichiers</td></tr><tr><td>Nouveauté Chambre d’alimentation supprimée</td><td>Fait maison n</td><td>/a</td><td>Chambre d’essai en plexiglas d’essai sur mesure avec sols et murs transparents de 62 cm de long, 31 cm de large sur 40 cm de haut.</td></tr><tr><td>Tubes en parlycarbonate</td><td>Fait maison</td><td>n/a</td><td>13 cm de longueur et 5cm de diamètre</td></tr><tr><td>Purina Yesterday' s news literie de journaux recyclés</td><td>Purina</td><td>n/a</td><td>Standard</td></tr><tr><td>Bedding Spectrophotomètre</td><td>Biotek</td><td>Epoch Microplate Reader</td><td></td></tr></tbody></table>

techniques de manipulation pour réduire le stress chez la souris

Handling Techniques to Reduce Stress in Mice

Les animaux de laboratoire sont soumis à de multiples manipulations par des scientifiques ou des fournisseurs de soins aux animaux. Le stress que cela provoque peut avoir des effets profonds sur le bien-être des animaux et peut également être un facteur de confusion pour des variables expérimentales telles que les mesures de l’anxiété. Au fil des ans, des techniques de manipulation qui minimisent le stress lié à la manipulation ont été développées en mettant l’accent sur les rats et en prêtant peu d’attention aux souris. Cependant, il a été démontré que les souris peuvent être habituées à des manipulations à l’aide de techniques de manipulation. Habituer les souris à la manipulation réduit le stress, facilite la manipulation de routine, améliore le bien-être des animaux, diminue la variabilité des données et améliore la fiabilité expérimentale. Malgré les effets bénéfiques de la manipulation, l’approche tail-pick-up, particulièrement stressante, est encore largement utilisée. Cet article fournit une description détaillée et une démonstration d’une nouvelle technique de manipulation de la souris destinée à minimiser le stress subi par l’animal lors de l’interaction humaine. Cette technique manuelle est réalisée sur 3 jours (technique de manipulation 3D) et se concentre sur la capacité de l’animal à s’habituer à l’expérimentateur. Cette étude montre également l’effet des techniques de manutention des tunnels précédemment établies (à l’aide d’un tunnel en polycarbonate) et de la technique de ramassage de la queue. Leurs effets sur les comportements anxieux sont spécifiquement étudiés, en utilisant des tests comportementaux (Elevated-Plus Maze et Novelty Suppressed Feeding), l’interaction volontaire avec les expérimentateurs et la mesure physiologique (niveaux de corticostérone). La technique de manipulation 3D et la technique de manipulation en tunnel ont réduit les phénotypes anxieux. Dans la première expérience, utilisant des souris mâles âgées de 6 mois, la technique de manipulation 3D a considérablement amélioré l’interaction avec l’expérimentateur. Dans la deuxième expérience, en utilisant une femme de 2,5 mois, il a réduit les niveaux de corticostérone. En tant que tel, la manipulation 3D est une approche utile dans les scénarios où l’interaction avec l’expérimentateur est requise ou préférée, ou où la manipulation de tunnel peut ne pas être possible pendant l’expérience.

Deux études distinctes ont été réalisées avec des souris C57BL/6. Les #1 de l’étude incluaient des mâles de 6 mois et l’étude #2 incluait des femelles de 2,5 mois (N = 36 / étude) de Jackson Laboratories (Cat #000664). Les souris sont arrivées dans l’établissement à l’âge de 2 mois. Alors que l’étude #2 les femmes ont été manipulées et testées deux semaines après leur arrivée, l’étude #1 les hommes n’ont été manipulés et testés qu’à l’âge de 6 mois (retard dû à l’arrêt de la pandémie mondiale). Pendant ce temps, une sour...

Cet article décrit une technique de manipulation chez la souris, la technique de manipulation 3D, qui facilite la manipulation de routine en réduisant les comportements anxieux et présente des détails sur deux techniques connexes existantes (manipulation en tunnel et en queue).

Techniques de manipulation pour réduire le stress chez la souris

Laboratory animals are subjected to multiple manipulations by scientists or animal care providers. The stress this causes can have profound effects ...

Je m’appelle Dr Thomas Prevot. Je suis scientifique au Center for Addiction and Mental Health, ou CAMH, et professeur adjoint au Département de psychiatrie de l’Université de Toronto. Mon groupe s’intéresse particulièrement à la réduction de l’anxiété de base et de la réactivité chez les souris afin de réduire la variabilité des données et d’améliorer le bien-être des animaux.Les souris se sont avérées être des atouts inestimables dans la science fondamentale et la recherche préclinique, cependant, très peu de laboratoires dans le monde contrôlent l’anxiété de base et la réactivité de leurs animaux de laboratoire, ce qui complique la reproductibilité des données entre les laboratoires. Les variables environnementales incontrôlées, telles que les conditions de logement, l’enrichissement de l’environnement et l’exposition au stress, sont un facteur important contribuant à l’anxiété de base. Bien que la normalisation des conditions de logement et de l’enrichissement ait contribué à améliorer ce problème, l’exposition au stress lors de l’interaction avec les expérimentateurs est encore largement négligée chez la souris.La manipulation de la queue, le processus consistant à soulever la souris par la queue, est toujours la technique de manipulation de la souris largement utilisée, bien qu’elle soit particulièrement stressante. Bien que des alternatives à la manutention de la queue aient émergé, y compris la manipulation en tunnel et la manipulation des gobelets. L’adoption de ces techniques a été lente.Nous décrivons ici une nouvelle technique, similaire à la manipulation des tasses, qui peut être mise en œuvre avec aussi peu que trois jours d’accoutumant, ou la manipulation 3D. En augmentant progressivement le degré et la complexité de l’interaction et en progressant en réponse à la réactivité de la souris à certains jalons de manipulation, nous pouvons réduire le stress et faciliter la manipulation de routine. Nous évaluons l’efficacité de la manipulation 3D chez la souris dans des tests comportementaux, évaluons les comportements anxieux, l’interaction avec les expérimentateurs et les niveaux d’hormone de stress périphérique, la corticostérone, et fournissons une comparaison avec les techniques de manipulation en tunnel et de manipulation de la queue.Ouvrez doucement la cage et placez le couvercle sur le côté. Introduisez votre main gantée dans la cage de la maison avant d’essayer de ramasser la souris. Laissez la souris s’habituer à la présence de la main pendant environ 30 secondes.Essayez ensuite de ramasser la souris dans des mains en coupe. Si la souris ne peut pas être facilement ramassée, coupez les deux mains ensemble et utilisez-les pour guider la souris vers le coin de la cage. Utilisez ensuite les deux mains pour ramasser la souris.Une fois la souris retirée de la cage, gardez vos mains aussi plates et ouvertes que possible. Laissez la souris explorer librement. Cela fournit une plate-forme plate sur laquelle la souris peut marcher et limite le risque de morsure.Tenez la main ouverte et plate, la paume vers le haut. Placez votre autre main à côté de la souris et laissez la souris se déplacer librement d’une main à l’autre, sans aucune retenue. Après une minute de manipulation avec les mains plates, détendez la paume de votre main et coupez légèrement la souris dans votre tête, avant de rouler doucement la souris entre les mains.Continuez pendant quatre minutes, en alternant entre un roulement doux entre les mains et une exploration libre de vos mains ouvertes. Au cours des deux dernières minutes, effectuez un test d’abri. Laissez la souris se déplacer sur le bord de votre main et rapprochez les deux mains.Très lentement, coupez vos mains pour que la souris rentre dans un abri formé par les mains. Assurez-vous de laisser une ouverture afin que la souris puisse s’échapper si nécessaire. Essayez de garder la souris à l’abri pendant cinq à 10 secondes sans aucune retenue.Répétez le test de l’abri trois à quatre fois au cours des deux dernières minutes. Ne précipitez pas le processus. Si la souris semble stressée par le fait d’être confinée à l’intérieur de la main, continuez à rouler entre les mains et à explorer librement pendant 30 secondes, puis réessayez le test de l’abri.Laissez l’exploration libre dans les mains pendant 30 secondes, puis remplacez doucement la souris dans sa cage. Nettoyez la paillasse des matières fécales et de l’urine avec de l’éthanol à 70% ou une solution de nettoyage appropriée. Nettoyez les gants des matières fécales et de l’urine au besoin et, lorsque vous changez de cage, rincez les gants avec de l’éthanol à 70% ou changez de gant.Dès le deuxième jour, il devrait déjà être possible de retirer la souris de la cage dans des mains en coupe. Si la souris semble réactive, effectuez la main plate et l’exploration libre des têtes ouvertes pendant 30 secondes à une minute. Sinon, passez au test de roulis entre les mains et d’abri.Jouez le rôle entre les mains et les étapes d’abri du premier jour pendant deux à trois minutes. Effectuez chaque étape plusieurs fois. Si la souris semble à l’aise dans le test d’abri, essayez de caresser la souris sur le dos et la tête.Si la souris ne tente pas de fuir le contact, passez au piqué du nez. Touchez doucement la souris sur le bout du museau. S’il ne mord pas ou ne tente pas de tourner la tête, c’est un bon signe d’accoutumant.Pour le test de caresses et de piqûres de nez, ne précipitez pas le processus. Si la souris semble stressée par le fait d’être confinée à l’intérieur des mains, ou ne veut pas être touchée, continuez à rouler entre les mains pendant quelques minutes, puis réessayez. Arrêtez cette séance après environ trois minutes de manipulation, si l’animal réagit bien au refuge, caresse la tête et pique le nez.Et si l’animal semble prêt à explorer vos mains sans aucun signe de stress, comme des tentatives d’évasion, sauter des mains ou éviter le contact avec les mains. Si la souris continue de présenter des signes de stress ou ne réagit pas bien au test d’abri ou au test de piqûre nasale, continuez la séance jusqu’à cinq minutes, comme le premier jour. Remplacez la souris dans sa cage et nettoyez la paillasse et les gants.Le troisième jour, suivez les mêmes étapes ce deuxième jour-là. Prenez la souris dans la paume de la main. Transférez la souris entre les mains.Confinez doucement la souris dans des mains en coupe. Si la souris répond bien à ces étapes, essayez de la caresser et de tenter le test de piqûre de nez. Le troisième jour, la souris doit être suffisamment détendue pour s’asseoir dans la paume de sa main sans bouger, et vous devriez pouvoir suivre ces étapes sur environ deux à trois minutes.Remplacez la souris dans sa cage et nettoyez la paillasse et les gants. Le troisième jour. si l’animal est retenu à des fins expérimentales, telles que le gavage oral ou l’injection intra-péritonéale, les souris peuvent être soumises au test de pincement du cou.Saisissez la souris par la nuque, entre votre pouce et votre index et soulevez la souris de cinq centimètres au-dessus de votre main pendant deux à trois secondes. C’est normalement une position inconfortable pour les souris adultes, et si les souris restent presque immobiles, elles sont bien habituées à la manipulation et seront faciles à retenir pour les injections. Replacez la souris sur votre main plate et laissez-la explorer librement pendant une minute.Les animaux ont été testés pour leur volonté d’interagir volontairement avec l’expérimentateur et la facilité de manipulation dans un contexte expérimental. Dans la première étude, les souris manipulées par la manipulation de tubes ou la manipulation 3D étaient moins susceptibles de fuir lorsqu’un expérimentateur tente de ramasser une souris. De plus, une souris manipulée à l’aide de la technique 3D a passé plus de temps dans le même quadrant que la main de l’expérimentateur, ce qui indique une volonté accrue d’interagir avec l’expérimentateur.Dans la deuxième étude, les souris manipulées par la manipulation de tubes ou la manipulation 3D étaient moins susceptibles de fuir lorsqu’un expérimentateur tente de ramasser la souris que les souris manipulées par la queue. Cependant, dans la deuxième étude, la technique de manipulation n’a pas influencé de manière significative le temps passé dans le même quadrant que la main de l’expérimentateur. L’effet de la manipulation en 3D et en tunnel a été comparé à la manipulation de la queue dans deux tests de comportements anxieux, le test d’alimentation supprimé de nouveauté et le labyrinthe plus élevé.Dans la première étude, dans le test d’alimentation supprimée de nouveauté, il y avait une tendance à réduire l’anxiété chez les souris manipulées en tunnel et manipulées en 3D. Dans le labyrinthe plus élevé, il n’y avait pas d’effet global de manipulation. Lorsqu’il est résumé comme un score Z, il y avait une réduction significative de l’anxiété globale chez les souris manipulées en tunnel et en 3D par rapport aux souris manipulées par la queue.Dans la deuxième étude, il n’y avait aucun effet global de la manipulation sur les mesures d’anxiété dans le test d’alimentation supprimée de nouveauté ou le labyrinthe plus élevé. Lorsqu’elle est résumée comme un score Z, la technique de manipulation n’a eu aucun effet global sur l’anxiété. Comme mesure physiologique du stress, nous avons recueilli du sérum sur des souris manipulées par la queue, manipulées en 3D et manipulées en tunnel 15 minutes après une brève séance de manipulation et testé les niveaux de corticostérone.Il n’y avait pas d’effet global de la manipulation dans la première étude. Dans la deuxième étude, la manipulation 3D a considérablement réduit les niveaux de corticostérone par rapport à la manipulation de la queue. Sur la base d’observations selon lesquelles les techniques de manipulation chez la souris ne sont pas largement reconnues par la communauté scientifique, nous avons décrit l’utilisation d’une nouvelle technique de manipulation.Dans les deux études présentées, la manipulation en tunnel et en 3D a réduit les tentatives de fuite des souris lorsqu’elles sont ramassées, ce qui pourrait faciliter la manipulation de routine. De plus, chez les souris mâles plus âgées, cette technique a réduit les comportements anxieux et augmenté l’interaction avec l’expérimentateur. Chez les jeunes femmes.cette technique a diminué les niveaux de corticostérone observés en réponse à la manipulation. La mise en œuvre de cette technique a le potentiel de réduire la variabilité des données, d’améliorer le bien-être des animaux et de faciliter la manipulation de routine.

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