Techniques de manipulation pour réduire le stress chez la souris

Je m’appelle Dr Thomas Prevot. Je suis scientifique au Center for Addiction and Mental Health, ou CAMH, et professeur adjoint au Département de psychiatrie de l’Université de Toronto. Mon groupe s’intéresse particulièrement à la réduction de l’anxiété de base et de la réactivité chez les souris afin de réduire la variabilité des données et d’améliorer le bien-être des animaux.

Les souris se sont avérées être des atouts inestimables dans la science fondamentale et la recherche préclinique, cependant, très peu de laboratoires dans le monde contrôlent l’anxiété de base et la réactivité de leurs animaux de laboratoire, ce qui complique la reproductibilité des données entre les laboratoires. Les variables environnementales incontrôlées, telles que les conditions de logement, l’enrichissement de l’environnement et l’exposition au stress, sont un facteur important contribuant à l’anxiété de base. Bien que la normalisation des conditions de logement et de l’enrichissement ait contribué à améliorer ce problème, l’exposition au stress lors de l’interaction avec les expérimentateurs est encore largement négligée chez la souris.

La manipulation de la queue, le processus consistant à soulever la souris par la queue, est toujours la technique de manipulation de la souris largement utilisée, bien qu’elle soit particulièrement stressante. Bien que des alternatives à la manutention de la queue aient émergé, y compris la manipulation en tunnel et la manipulation des gobelets. L’adoption de ces techniques a été lente.

Nous décrivons ici une nouvelle technique, similaire à la manipulation des tasses, qui peut être mise en œuvre avec aussi peu que trois jours d’accoutumant, ou la manipulation 3D. En augmentant progressivement le degré et la complexité de l’interaction et en progressant en réponse à la réactivité de la souris à certains jalons de manipulation, nous pouvons réduire le stress et faciliter la manipulation de routine. Nous évaluons l’efficacité de la manipulation 3D chez la souris dans des tests comportementaux, évaluons les comportements anxieux, l’interaction avec les expérimentateurs et les niveaux d’hormone de stress périphérique, la corticostérone, et fournissons une comparaison avec les techniques de manipulation en tunnel et de manipulation de la queue.

Ouvrez doucement la cage et placez le couvercle sur le côté. Introduisez votre main gantée dans la cage de la maison avant d’essayer de ramasser la souris. Laissez la souris s’habituer à la présence de la main pendant environ 30 secondes.

Essayez ensuite de ramasser la souris dans des mains en coupe. Si la souris ne peut pas être facilement ramassée, coupez les deux mains ensemble et utilisez-les pour guider la souris vers le coin de la cage. Utilisez ensuite les deux mains pour ramasser la souris.

Une fois la souris retirée de la cage, gardez vos mains aussi plates et ouvertes que possible. Laissez la souris explorer librement. Cela fournit une plate-forme plate sur laquelle la souris peut marcher et limite le risque de morsure.

Tenez la main ouverte et plate, la paume vers le haut. Placez votre autre main à côté de la souris et laissez la souris se déplacer librement d’une main à l’autre, sans aucune retenue. Après une minute de manipulation avec les mains plates, détendez la paume de votre main et coupez légèrement la souris dans votre tête, avant de rouler doucement la souris entre les mains.

Continuez pendant quatre minutes, en alternant entre un roulement doux entre les mains et une exploration libre de vos mains ouvertes. Au cours des deux dernières minutes, effectuez un test d’abri. Laissez la souris se déplacer sur le bord de votre main et rapprochez les deux mains.

Très lentement, coupez vos mains pour que la souris rentre dans un abri formé par les mains. Assurez-vous de laisser une ouverture afin que la souris puisse s’échapper si nécessaire. Essayez de garder la souris à l’abri pendant cinq à 10 secondes sans aucune retenue.

Répétez le test de l’abri trois à quatre fois au cours des deux dernières minutes. Ne précipitez pas le processus. Si la souris semble stressée par le fait d’être confinée à l’intérieur de la main, continuez à rouler entre les mains et à explorer librement pendant 30 secondes, puis réessayez le test de l’abri.

Laissez l’exploration libre dans les mains pendant 30 secondes, puis remplacez doucement la souris dans sa cage. Nettoyez la paillasse des matières fécales et de l’urine avec de l’éthanol à 70% ou une solution de nettoyage appropriée. Nettoyez les gants des matières fécales et de l’urine au besoin et, lorsque vous changez de cage, rincez les gants avec de l’éthanol à 70% ou changez de gant.

Dès le deuxième jour, il devrait déjà être possible de retirer la souris de la cage dans des mains en coupe. Si la souris semble réactive, effectuez la main plate et l’exploration libre des têtes ouvertes pendant 30 secondes à une minute. Sinon, passez au test de roulis entre les mains et d’abri.

Jouez le rôle entre les mains et les étapes d’abri du premier jour pendant deux à trois minutes. Effectuez chaque étape plusieurs fois. Si la souris semble à l’aise dans le test d’abri, essayez de caresser la souris sur le dos et la tête.

Si la souris ne tente pas de fuir le contact, passez au piqué du nez. Touchez doucement la souris sur le bout du museau. S’il ne mord pas ou ne tente pas de tourner la tête, c’est un bon signe d’accoutumant.

Pour le test de caresses et de piqûres de nez, ne précipitez pas le processus. Si la souris semble stressée par le fait d’être confinée à l’intérieur des mains, ou ne veut pas être touchée, continuez à rouler entre les mains pendant quelques minutes, puis réessayez. Arrêtez cette séance après environ trois minutes de manipulation, si l’animal réagit bien au refuge, caresse la tête et pique le nez.

Et si l’animal semble prêt à explorer vos mains sans aucun signe de stress, comme des tentatives d’évasion, sauter des mains ou éviter le contact avec les mains. Si la souris continue de présenter des signes de stress ou ne réagit pas bien au test d’abri ou au test de piqûre nasale, continuez la séance jusqu’à cinq minutes, comme le premier jour. Remplacez la souris dans sa cage et nettoyez la paillasse et les gants.

Le troisième jour, suivez les mêmes étapes ce deuxième jour-là. Prenez la souris dans la paume de la main. Transférez la souris entre les mains.

Confinez doucement la souris dans des mains en coupe. Si la souris répond bien à ces étapes, essayez de la caresser et de tenter le test de piqûre de nez. Le troisième jour, la souris doit être suffisamment détendue pour s’asseoir dans la paume de sa main sans bouger, et vous devriez pouvoir suivre ces étapes sur environ deux à trois minutes.

Remplacez la souris dans sa cage et nettoyez la paillasse et les gants. Le troisième jour. si l’animal est retenu à des fins expérimentales, telles que le gavage oral ou l’injection intra-péritonéale, les souris peuvent être soumises au test de pincement du cou.

Saisissez la souris par la nuque, entre votre pouce et votre index et soulevez la souris de cinq centimètres au-dessus de votre main pendant deux à trois secondes. C’est normalement une position inconfortable pour les souris adultes, et si les souris restent presque immobiles, elles sont bien habituées à la manipulation et seront faciles à retenir pour les injections. Replacez la souris sur votre main plate et laissez-la explorer librement pendant une minute.

Les animaux ont été testés pour leur volonté d’interagir volontairement avec l’expérimentateur et la facilité de manipulation dans un contexte expérimental. Dans la première étude, les souris manipulées par la manipulation de tubes ou la manipulation 3D étaient moins susceptibles de fuir lorsqu’un expérimentateur tente de ramasser une souris. De plus, une souris manipulée à l’aide de la technique 3D a passé plus de temps dans le même quadrant que la main de l’expérimentateur, ce qui indique une volonté accrue d’interagir avec l’expérimentateur.

Dans la deuxième étude, les souris manipulées par la manipulation de tubes ou la manipulation 3D étaient moins susceptibles de fuir lorsqu’un expérimentateur tente de ramasser la souris que les souris manipulées par la queue. Cependant, dans la deuxième étude, la technique de manipulation n’a pas influencé de manière significative le temps passé dans le même quadrant que la main de l’expérimentateur. L’effet de la manipulation en 3D et en tunnel a été comparé à la manipulation de la queue dans deux tests de comportements anxieux, le test d’alimentation supprimé de nouveauté et le labyrinthe plus élevé.

Dans la première étude, dans le test d’alimentation supprimée de nouveauté, il y avait une tendance à réduire l’anxiété chez les souris manipulées en tunnel et manipulées en 3D. Dans le labyrinthe plus élevé, il n’y avait pas d’effet global de manipulation. Lorsqu’il est résumé comme un score Z, il y avait une réduction significative de l’anxiété globale chez les souris manipulées en tunnel et en 3D par rapport aux souris manipulées par la queue.

Dans la deuxième étude, il n’y avait aucun effet global de la manipulation sur les mesures d’anxiété dans le test d’alimentation supprimée de nouveauté ou le labyrinthe plus élevé. Lorsqu’elle est résumée comme un score Z, la technique de manipulation n’a eu aucun effet global sur l’anxiété. Comme mesure physiologique du stress, nous avons recueilli du sérum sur des souris manipulées par la queue, manipulées en 3D et manipulées en tunnel 15 minutes après une brève séance de manipulation et testé les niveaux de corticostérone.

Il n’y avait pas d’effet global de la manipulation dans la première étude. Dans la deuxième étude, la manipulation 3D a considérablement réduit les niveaux de corticostérone par rapport à la manipulation de la queue. Sur la base d’observations selon lesquelles les techniques de manipulation chez la souris ne sont pas largement reconnues par la communauté scientifique, nous avons décrit l’utilisation d’une nouvelle technique de manipulation.

Dans les deux études présentées, la manipulation en tunnel et en 3D a réduit les tentatives de fuite des souris lorsqu’elles sont ramassées, ce qui pourrait faciliter la manipulation de routine. De plus, chez les souris mâles plus âgées, cette technique a réduit les comportements anxieux et augmenté l’interaction avec l’expérimentateur. Chez les jeunes femmes.

cette technique a diminué les niveaux de corticostérone observés en réponse à la manipulation. La mise en œuvre de cette technique a le potentiel de réduire la variabilité des données, d’améliorer le bien-être des animaux et de faciliter la manipulation de routine.