Développement d’une bande immunochromatographique à flux latéral pour la détection rapide et quantitative de composés de petites molécules

La procédure décrit la préparation de l’or colloïdal et l’assemblage des bandelettes immunochromatographiques. Tout d’abord, l’acide chloroaurique et le citrate de sodium ont été utilisés pour la synthèse de l’or colloïdal. Le citrate de sodium a été ajouté à la solution d’acide chloroaurique et bouilli pour obtenir de l’or colloïdal avec une taille de particule appropriée.

Synthèse, le conjugué d’anticorps colloïdaux d’or. Après centrifugation, les particules d’or colloïdales ont été dissoutes dans une solution appropriée, puis remises en suspension pour obtenir une solution d’or colloïdal. Immergez la membrane en fibre de verre dans la conjugaison pour préparer le tampon conjugué.

Déposer l’antigène artificiel et les anticorps secondaires sur la membrane NC comme ligne T et ligne C. Fixez la membrane CN, la membrane absorbante, le tampon d’échantillon et la membrane en fibre de verre dans le panneau de PVC respectivement. Découpez le carton assemblé en bande de 3,5 millimètres de large.

Confect solution d’acide de chlorure d’or à pourcentage complet et solution de citrate de sodium à 1% respectivement. Allumez l’agitateur magnétique et placez la fiole sur un mélangeur. Ajouter 120 millilitres d’eau distillée dans une fiole à fond rond et la chauffer à ébullition sur un agitateur magnétique thermostatique.

Continuez à bouillir et ajoutez rapidement 0,5 millilitre d’acide chloroaurique à pourcentage complet et cinq millilitres de citrate de sodium à 1%. Continuer à chauffer pendant cinq à 10 minutes. Observez la couleur de la solution passer du jaune pâle au rouge vin.

Éteignez l’alimentation du mélangeur magnétique thermostatique, refroidissez à la température ambiante et placez le mélange dans une bouteille propre. Conserver à quatre centigrades. Les nanoparticules d’or montrent l’effet Tyndall.

La taille et la morphologie des nanoparticules d’or ont été déterminées par spectroscopie ultraviolette et imagerie au microscope électronique à transmission. Ajouter 100 microlitres de solution de chlorure de sodium à huit tubes. Ajuster les solutions d’or colloïdal à un pH de 5 à 12 en utilisant 0,1 mol par litre de carbonate de potassium.

Ajouter 100 microlitres de solution d’or colloïdal à huit tubes contenant du chlorure de sodium. Tenez-vous debout pour le poteau plusieurs minutes après le mélange. Observez le changement de couleur de chaque solution de tube et enregistrez le tube qui reste rouge.

Choisissez la valeur de pH avec la plus faible quantité de carbonate de potassium ajouté et une couleur de solution stable comme valeur de pH optimale pour la préparation du conjugué. Adapté la même approche. Observez le changement de couleur et enregistrez le tube qui reste rouge.

Choisissez la quantité d’anticorps avec la plus faible concentration de mAB et une couleur de solution stable comme quantité optimale de mAB. Prenez une solution d’or colloïdal de 10 millilitres et utilisez 0,1 mol par litre de carbonate de potassium pour ajuster la solution à la valeur de pH optimale. Ajouter lentement les MAB SSd avec la concentration appropriée et agiter à température ambiante pendant 30 minutes.

Centrifuger le mélange à 2000 tr/min pendant 20 minutes à quatre centigrades. Enlever le précipité contenant les impuretés de l’or colloïdal précipité. Centrifuger le mélange à 10 000 tr/min pendant 40 minutes.

Jetez le surnageant. Le précipité est un conjugué mAB d’or colloïdal. Ajouter l’acide chlorhydrique Tris, le BSA, le Tween 20 et le PEG 20 000, puis bien mélanger pour préparer le tampon de resuspension.

Ajouter le tampon de ressuspension et dissocier le précipité. La bande de matériau de membrane, y compris la membrane de cellulose de verre, la membrane de cellulose de polyester et le panneau de PVC. Le matériau de la membrane, doit suivre et évaluer au microscope stérile pour se débarrasser de l’inhomogénéité.

Tout d’abord, placez la membrane CN sur le panneau de PVC à deux centimètres du bord de l’extrémité de la section de la carte. Deuxièmement, laissez tomber deux milligrammes par millilitre SSd-BSA sur la membrane NC à deux centimètres du bord supérieur comme ligne de test et laissez tomber 1,5 milligramme par millilitre d’IgG anti-souris en or sur la membrane NC à deux centimètres du bord inférieur comme ligne de contrôle. Fixez le tampon absorbant à la feuille de PVC au-dessus de la membrane CN et chevauchez la membrane CN de deux millimètres.

Coupez la membrane en fibre de verre à cinq centimètres de long et deux centimètres de large et utilisez-la comme tampon conjugué. Immergez la membrane de fibre de verre dans la solution conjuguée mAB de nanoparticules d’or. Faire tremper pendant un moment pour faire absorber les nanoparticules d’or mAB.

Sécher la large membrane dans l’incubateur à 37 degrés. Collez le tampon conjugué prétraité sous la membrane NC et la longueur de chevauchement avec la membrane NC doit être de 0,1 centimètre. Coupez la membrane Fusion3 en 1,8 centimètre de long et 3,5 centimètres de large et utilisez-la comme tampon d’échantillonnage.

Ensuite, placez le tampon d’échantillon sur la carte en PVC et chevauchez le tampon conjugué de deux millimètres. Découpez, assemblez le carton en bandes de 3,5 millimètres de large à l’aide d’une machine de découpe et compactez-le à l’aide d’un système de laminage par lots. Enfin, placez les bandelettes réactives dans la coque.

Scellez-les dans un sac en aluminium contenant du dessiccant et le magasin à l’abri de la lumière. L’ICS est maintenant assemblé. Déposer 50 microlitres de solution d’échantillon sur le trou d’échantillon pour observer le processus de chromatographie.

Ensuite, analysez les bandes à l’aide d’un lecteur de bandes portable. La machine peut fournir le rapport entre la ligne de test et la ligne de commande. Évaluez la spécificité, la sensibilité, la répétabilité et la stabilité du test ICS.

Les solutions d’or colloïdal préparées ont été lues. Les analyses au microscope électronique à transmission ont révélé que les particules étaient de forme polyédrique et étaient uniformément réparties avec un diamètre moyen de 14 nanomètres. Les images au microscope électronique à transmission à haute résolution ont montré un motif de frange continue avec un espacement de 0,117 nanomètre de nanoparticules d’or.

L’absorption visible ultraviolette indique que différentes tailles de particules d’or colloïdales peuvent être obtenues en modifiant la proportion de citrate de sodium et d’acide chloroaurique. Dans l’expérience quantitative, les bandelettes avec les résultats des tests de saikosaponine D ont été scannées à l’aide d’un lecteur ICS portable. Nous avons calculé une courbe standard en reliant les non-concentrations de saikosaponine D à l’absorption correspondante à chaque concentration.

Après une étude méthodologique, la méthode peut être appliquée pour la détection quantitative et semi-qualitative de composés de petites molécules. Cette procédure comprend la préparation de l’or colloïdal, la synthèse de nanoparticules d’or conjuguées mAB, l’assemblage de la bandelette et l’investigation méthodologique. Ce travail fournit un protocole détaillé pour le développement de bandelettes immunochromatographiques à utiliser dans la détection rapide et quantitative de petites molécules.

Après avoir regardé cette vidéo, j’espère que vous avez une bonne compréhension pour la préparation de la bande immunochromatographique. Merci d’avoir regardé et bonne chance pour vos expériences.