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JoVE Journal Biochemistry
Manual Blot-and-Plunge Freezing of Biological Specimens for Single-Particle Cryogenic Electron Microscopy

Congélation manuelle par transfert et par immersion d’échantillons biologiques pour la microscopie électronique cryogénique à particule unique

Full Text
7,393 Views
09:16 min
February 7, 2022

DOI: 10.3791/62765-v

Hoang P. M. Nguyen*1, Kelly L. McGuire*1, Brian D. Cook*1, Mark A. Herzik, Jr.1

1Department of Chemistry and Biochemistry,University of California, San Diego

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Ce manuscrit décrit la méthode de transfert et de plongée pour congeler manuellement des échantillons biologiques pour la microscopie électronique cryogénique à particule unique.

La méthode de plongée manuelle décrite ici est une méthode rentable et fiable pour préparer des échantillons pour la microscopie électronique à transmission. Dans cette vidéo, nous montrerons comment configurer le piston manuel, préparer le cryogène et effectuer un buvard et un plongeon manuels des grilles EM. Préparez l’environnement de plongée manuelle.

Cette procédure doit être effectuée dans une chambre froide maintenue à 40 degrés Celsius avec une humidité supérieure à 95%Nous vous recommandons d’utiliser les matériaux indiqués ici et comme décrit dans le protocole en ligne pour le buvard et le plongeon manuels. Préparez le cryogène Dewar et le piston manuel. Pour assembler le cryogène Dewar, installez d’abord la base de la plate-forme au fond de la mousse de polystyrène bleu Dewar, en vous assurant qu’elle est plate et plane.

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