Un dépistage comportemental des crises induites par la chaleur dans des modèles murins d’épilepsie

Le but de la méthode est de dépister l’hyperthermie ou les crises induites par la chaleur dans des modèles murins. Le protocole décrit l’utilisation d’une chambre construite sur mesure avec une surveillance continue de la température corporelle pour déterminer si une température corporelle élevée entraîne des convulsions.

Les mutations GEFS+ provoquent des convulsions fébriles chez les patients. La capacité d’étudier les crises induites par l’hypothermie chez les souris GEFS+ nous permet d’examiner la relation entre des mutations spécifiques et le profil épileptique. Le régulateur de température numérique permet de régler le gradient de température dans le boîtier de chauffage de manière reproductible.

Ainsi, la température corporelle de la souris peut être augmentée à un rythme lent et régulier. Ce protocole peut être utilisé pour identifier des thérapies potentielles, telles que des médicaments ou des restrictions alimentaires, qui peuvent être utilisées pour réduire ou éliminer les convulsions fébriles. Pour insérer la sonde de température rectale dans la souris sans blessure, nous vous recommandons d’anesthésier brièvement la souris et de lubrifier la pointe de la sonde rectale.

Commencez par allumer la chambre de chauffage de la souris avec le bouton d’alimentation, puis appuyez sur le bouton de chauffage. À l’aide du clavier du régulateur de température numérique, réglez la température de la chambre chauffante à 50 degrés Celsius. Tapisser le sol de la chambre de chaleur avec de la literie en torchis.

Montez une caméra d’enregistrement vidéo devant la chambre de chaleur. Tapisser une boîte de Petri de 140 millimètres de diamètre avec d’épaisses couches de papier de soie et la placer sur de la glace pour servir de tampon de refroidissement. Pour le test de dépistage, assurez-vous que le poids corporel de la souris est de 15 grammes ou plus.

Avant de commencer la procédure, vérifiez que la souris est complètement anesthésiée avec un pincement d’orteil. Enduisez la pointe métallique de la sonde de température rectale d’un lubrifiant et insérez-la doucement dans la souris. Fixez la sonde rectale à la queue de la souris avec du ruban adhésif.

Placez la souris dans une nouvelle cage de récupération bordée de litière en torchis. Démarrez une minuterie et observez la souris pendant cinq minutes tout en surveillant la température corporelle centrale, jusqu’à ce que la souris se rétablisse complètement de l’anesthésie et que la température se stabilise à 35 à 36 degrés Celsius. Au bout de cinq minutes, notez la température corporelle de la souris comme la température corporelle initiale à zéro minute.

Transférez rapidement la souris sur le sol de la chambre chauffante préchauffée pour commencer l’essai expérimental. Une fois la souris placée dans la chambre de souris préchauffée, démarrez la caméra et le chronomètre, augmentez la température de la chambre de chauffage à intervalles réguliers, de sorte que la température corporelle de la souris augmente à un rythme de 25, 2,5 degrés Celsius par minute. Commencez à enregistrer la température corporelle de la souris à des intervalles d’une minute pendant toute la durée de l’expérience.

À 9,5 minutes, réglez la température de la chambre de chaleur à 55 degrés Celsius pour stabiliser la température de la chambre de chaleur à 55 degrés Celsius à la 10e minute. De même, atteignez une température stable de la chambre de chaleur à 60 degrés Celsius à la 20ème minute. Chaque essai de dépistage des crises dure 30 minutes.

Si la souris subit une crise, enregistrez la température corporelle de la souris pendant la crise, comme une température seuil de saisie. Prenez note des caractéristiques de comportement de saisie affichées par la souris, puis prenez rapidement la souris dans la chambre et placez-la sur le coussin de refroidissement. Si une souris ne subit pas de crises induites par la chaleur au cours de la période d’observation de 30 minutes ou si la température corporelle de la souris atteint 44 degrés Celsius, placez la souris sur le coussin de refroidissement.

Lorsque la température corporelle de la souris descend à 36 à 37 degrés Celsius, transférez la souris dans une cage de récupération. Pour retirer la sonde rectale de la souris, coupez soigneusement le ruban entre la queue de la souris et le fil de la sonde rectale. Essuyez et nettoyez l’extrémité métallique de la sonde rectale avec de l’éthanol à 70%.

Observez la souris jusqu’à ce qu’elle récupère avant de la renvoyer dans la cage de la maison. Continuez à surveiller l’état de la souris. Marquez la fin de l’essai expérimental.

Réinitialisez la température de la chambre chauffante de la souris à 50 degrés Celsius et laissez-la s’équilibrer avant le prochain essai. Dans le test de saisie de chaleur, la température corporelle moyenne des souris a été enregistrée chaque minute à l’aide du protocole de chauffage, et le taux de changement de la température corporelle au fil du temps a été évalué. Il n’y avait pas de différence dans le taux de changement de température corporelle entre les souris mutantes hétérozygotes et les souris de type sauvage, dans les antécédents génétiques respectifs.

Les groupes expérimentaux et témoins de souris ont montré un comportement différent lorsqu’ils étaient exposés à une augmentation périodique de la température corporelle. Toutes les souris mutantes hétérozygotes issues de la génétique 129X1 ou B6NJ présentaient des crises induites par la chaleur. Aucune des souris de type sauvage dans le fond enrichi 129X1 n’a connu de crises, tandis que seulement un tiers des souris du fond B6NJ sensible aux crises ont montré des convulsions.

Une température seuil de saisie moyenne de souris mutantes 129X1 n’était pas significativement différente de la température moyenne du seuil de crise observée chez les souris B6NJ. Un tiers des souris de type sauvage B6NJ qui présentaient des crises induites par la chaleur avaient une température seuil de crise significativement plus élevée que celle des souris mutantes hétérozygotes B6NJ. La gravité des crises a été mesurée à l’aide de l’échelle de Racine modifiée.

Le score maximal de Racine des souris mutantes hétérozygotes dans le fond enrichi 129X1 n’était pas significativement différent de celui des souris mutantes hétérozygotes dans le fond génétique B6NJ. Lors du réglage du protocole de chauffage, assurez-vous que la température corporelle de la souris n’augmente pas à un rythme supérieur à 25 degrés Celsius par minute, sinon cela peut être nocif pour la santé de l’animal. Il serait très cool de combiner le protocole de chauffage avec des enregistrements EEG simultanés, ce qui nous permettrait de corréler différents modèles d’activité cérébrale avec différents types de comportement épileptique.