Un test cellulaire basé sur un rapporteur pour surveiller l’efficacité de l’épissage

Ce protocole décrit un test cellulaire pour la surveillance de l’efficacité de l’épissage, à l’aide d’un rapporteur de gestion adaptable. Ce test rapporteur peut être utilisé pour étudier les effets des mutations associées à la maladie dans les sites Exxon ou d’épissure, et pour concevoir une thérapie, en particulier une particule, afin d’améliorer la reconnaissance des sites d’épissure mutants à cinq points. Le passage dans les cellules Hela aspire le milieu usé et incube les cellules avec trois millilitres de 0,2 5% trébuche en contenant un millimolaire EDTA, à 37 degrés Celsius pendant trois minutes.

Après incubation à sept millilitres de DMEM frais et transfert de la suspension cellulaire dans un tube de 10 millilitres. Centrifuger les cellules. Ensuite, remettez en suspension la pastille cellulaire dans 10 millilitres de DMEM frais et plaquez les cellules sur une nouvelle boîte de culture tissulaire à 20% de confluence, pour une transsfection transitoire.