Name: Établissement d’un modèle de pancréatite aiguë sévère chez la souris par injection rétrograde de taurocholate de sodium dans le canal biliopancréatique (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-04-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 10 s
Description: Découvrez comment établir un modèle de pancréatite aiguë sévère chez la souris par injection rétrograde de taurocholate de sodium dans le canal biliopancréatique. Cette méthode permet d'étudier les mécanismes moléculaires et les interventions thérapeutiques.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Nous sommes reconnaissants du soutien des subventions suivantes: une subvention de recherche translationnelle de NCRCH [2020WSA01], une subvention scientifique KJXW de la Commission de la santé de Suzhou pour les jeunes chercheurs [KJXW2020002], un plan scientifique et technologique de la ville de Suzhou (SKY2021038 et SKJY2021050), une subvention du programme académique prioritaire de développement des établissements d’enseignement supérieur du Jiangsu (PAPD) et un plan de recherche et de développement social primaire de la province du Jiangsu (BE2018659).

Toutes les expériences impliquant des animaux ont été approuvées par le Comité d’éthique animale de l’Université Soochow. Toutes les interventions chirurgicales ont été effectuées sous anesthésie complète. Les analgésiques n’ont pas été utilisés pour éviter toute interférence avec l’évolution naturelle de la maladie selon la littérature précédente28,29. L’approbation de l’absence d’analgésie a également été accordée par le Comité d’éthique animale de l’Université Soochow.
1. Préparation
<ol><li>Jeûnez une souris de type sauvage C57BL/6 8-12 h avant la chirurgie.</li>
	<li>Préparer une solution de TC à 5 % (p/v) (93 mM) diluée dans du chlorure de sodium à 0,9 %. Filtrer la solution à travers un filtre de 0,22 μm.</li>
	<li>Autoclavez les instruments et matériaux chirurgicaux, y compris les pinces, les ciseaux, le porte-lame, le porte-aiguille, le clip hémostatique, les pinces vasculaires et les rideaux stériles, à l’aide d’un stérilisateur à pression à une température de 121 ° C pendant 30 min.</li>
	<li>Préparez une microsyringe maison. Pour ce faire, installez manuellement une pointe d’insuline jetable et une pointe de pipette en plastique prolongée sur une seringue Microliter à pointe plate de 25 μL. Stériliser par irradiation.</li>
</ol>2. Anesthésie et préparation préopératoire
<ol><li>Peser des souris mâles de type sauvage C57BL/6 âgées de 6 à 8 semaines (environ 21 à 23 g). Induire une anesthésie générale avec une injection intrapéritonéale de solution de pentobarbital sodique à 1% à une dose de 50 mg/ kg.</li>
	<li>Fixez la souris en position couchée sur une plaque plate en mousse irrirrayonnée avec le ruban adhésif.</li>
	<li>Préparez la région opératoire de chaque animal en retirant sa fourrure avec une crème d’épilation du niveau du processus xiphoïde jusqu’à la ligne de connexion de la colonne iliaque antérieure antérieure bilatérale, avec les côtés gauche et droit parallèles à la ligne axillaire avant.</li>
	<li>Préparez un champ chirurgical stérile avec un accent particulier sur la zone chirurgicale, composée de la zone préparée sur l’animal et le devant du chirurgien.<ol>
<li>Désinfectez la paillasse.</li>
		<li>Nettoyez le site d’incision avec de multiples applications de solution de gommage chirurgical. Essuyez la peau deux à trois fois avec 0,5% d’iodophore et laissez-la sécher pendant 1 à 2 minutes à chaque fois.</li>
		<li>Couvrez la souris avec des rideaux stériles.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. Intervention chirurgicale
REMARQUE: La figure 1 illustre l’anatomie et la morphologie du pancréas de la souris avant et après l’injection rétrograde de TC dans le canal biliopancréatique par micro-injection.
<ol><li>Faites une incision abdominale médiane d’environ 2 à 3 cm de long.</li>
	<li>Localisez le duodénum de gauche à droite le long de l’estomac. Retirez doucement le duodénum et vers le côté gauche à l’aide d’une pince chirurgicale et d’un coton-tige imbibé de désinfectant pour exposer le pancréas, le canal biliopancréatique et la papille duodénale. Veillez à ne pas blesser la paroi intestinale ou les vaisseaux connexes.</li>
	<li>Utilisez 8-0 sutures pour passer à travers la connexion entre le duodénum et le pancréas autour de la papille, et les tirer vers le côté gauche du corps de la souris pour fixer le duodénum.</li>
	<li>Tirez doucement la peau et le bord inférieur du foie de côté. Serrez le canal hépatique commun, en veillant à ne pas serrer la veine porte ou le pancréas. Serrez le canal biliopancréatique proximal.</li>
	<li>Percer le micro-injecteur dans le canal biliopancréatique distal rétrogradement. Fixez la pointe de l’aiguille près de la papille duodénale avec une pince. Infuser 10 μL de TC à 5 % dans le canal pancréatique à raison de 5 μL/min.</li>
	<li>Gardez le canal biliopancréatique fermé pendant 5 minutes pour obtenir une pression stable. Ensuite, retirez le micro-injecteur et retirez les pinces.</li>
	<li>Restaurez le duodénum à la position anatomique d’origine et vérifiez le saignement.</li>
	<li>Fermez la plaie avec 6-0 sutures et désinfectez avec 0,5% d’iodophore.</li>
</ol>4. Récupération et prise en charge postopératoire
<ol><li>Récupérez les animaux de l’anesthésie sur un coussin thermique à 37 °C. N’envoyez pas les animaux opérés dans la salle postopératoire temporelle tant que tous les animaux ne se sont pas réveillés.</li>
	<li>Administrer 0,8 mL de solution saline à 0,9 % par voie sous-cutanée et lentement pour la supplémentation en liquide.</li>
	<li>Surveillez les animaux après l’opération pour leur état général et les signes d’infections ou de maladies.</li>
</ol>5. Tests sérologiques et évaluation histologique
<ol><li>24 h après l’opération, anesthésier les souris avec du pentobarbital sodique en utilisant la même dose et la même voie d’injection.</li>
	<li>Prélever tout le sang de l’aorte abdominale (environ 0,8 mL par souris) et tourner à 1 500 x g pendant 15 min pour isoler le sérum pour des tests supplémentaires.</li>
	<li>Recueillir les tissus du pancréas.</li>
	<li>Ouvrez la cavité thoracique pour recueillir les tissus pulmonaires.</li>
	<li>Mesurer les indices de fonction biochimique du sérum, y compris l’amylase, la lipase, la fonction hépatique (alanine transaminase (ALT) et aspartate transaminase (AST)) et la fonction rénale (urée et créatine), à l’aide de kits commerciaux conformément aux instructions des fabricants.</li>
	<li>Homogénéiser les tissus du poumon et du pancréas et mesurer le niveau de myéloperoxydase (MPO) à l’aide d’un kit commercial selon les instructions du fabricant.</li>
	<li>Ouvrez la cavité thoracique et perfuser avec 20 mL de solution saline tamponnée au phosphate (PBS) deux fois, puis collectez le pancréas. Immerger dans une solution de paraformaldéhyde à 4% pendant 24 h. Déshydrater dans une série de concentrations d’alcool et incorporer dans la paraffine.</li>
	<li>Utilisez un microtome pour préparer des coupes de tissu pancréatique de 5 μm d’épaisseur.</li>
	<li>Effectuer une coloration H & E pour l’évaluation histologique du pancréas.</li>
	<li>Évaluer les scores pathologiques selon les critères proposés par Schmidt et al.30.</li>
</ol>

<ol><li>Lee, P. J., Papachristou, G. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+into+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Gastroenterology+and+Hepatology%22%5BJournal%5D)">New insights into acute pancreatitis.</a> Nature Reviews Gastroenterology and Hepatology. 16 (8), 479-496 (2019).</li>
<li>Mandalia, A., Wamsteker, E. J., DiMagno, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+understanding+and+managing+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22F1000Research%22%5BJournal%5D)">Recent advances in understanding and managing acute pancreatitis.</a> F1000Research. 7, 959(2018).</li>
<li>Banks, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Classification+of+acute+pancreatitis-2012%3A+revision+of+the+Atlanta+classification+and+definitions+by+international+consensus%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Classification of acute pancreatitis-2012: revision of the Atlanta classification and definitions by international consensus.</a> Gut. 62 (1), 102-111 (2013).</li>
<li>Munir, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+immunomodulatory+therapy+for+severe+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology+Letters%22%5BJournal%5D)">Advances in immunomodulatory therapy for severe acute pancreatitis.</a> Immunology Letters. 217, 72-76 (2020).</li>
<li>Peery, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burden+of+gastrointestinal+disease+in+the+United+States%3A+2012+update%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Burden of gastrointestinal disease in the United States: 2012 update.</a> Gastroenterology. 143 (5), 1179-1187 (2012).</li>
<li>Hines, O. J., Pandol, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+severe+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22BMJ%22%5BJournal%5D)">Management of severe acute pancreatitis.</a> BMJ. 367, 6227(2019).</li>
<li>James, T. W., Crockett, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+acute+pancreatitis+in+the+first+72+hours%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Management of acute pancreatitis in the first 72 hours.</a> Current Opinion in Gastroenterology. 34 (5), 330-335 (2018).</li>
<li>Silva-Vaz, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+models+of+acute+pancreatitis%3A+a+critical+appraisal+of+clinical+relevance%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Murine models of acute pancreatitis: a critical appraisal of clinical relevance.</a> International Journal of Molecular Sciences. 20 (11), 2794(2019).</li>
<li>Hyun, J. J., Lee, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+models+of+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Endoscopy%22%5BJournal%5D)">Experimental models of pancreatitis.</a> Clinical Endoscopy. 47 (3), 212-216 (2014).</li>
<li>Renner, I. G., Wisner, J. R., Rinderknecht, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+exogenous+secretin+on+ceruletide-induced+acute+pancreatitis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Protective effects of exogenous secretin on ceruletide-induced acute pancreatitis in the rat.</a> Journal of Clinical Investigation. 72 (3), 1081-1092 (1983).</li>
<li>Niederau, C., Ferrell, L. D., Grendell, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caerulein-induced+acute+necrotizing+pancreatitis+in+mice%3A+protective+effects+of+proglumide%2C+benzotript%2C+and+secretin%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Caerulein-induced acute necrotizing pancreatitis in mice: protective effects of proglumide, benzotript, and secretin.</a> Gastroenterology. 88 (5), 1192-1204 (1985).</li>
<li>Foitzik, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exocrine+hyperstimulation+but+not+pancreatic+duct+obstruction+increases+the+susceptibility+to+alcohol-related+pancreatic+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+in+Surgery%22%5BJournal%5D)">Exocrine hyperstimulation but not pancreatic duct obstruction increases the susceptibility to alcohol-related pancreatic injury.</a> Archives in Surgery. 129 (10), 1081-1085 (1994).</li>
<li>Schneider, L., Dieckmann, R., Hackert, T., Gebhard, M. M., Werner, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+alcohol-induced+pancreatic+injury+is+similar+with+intravenous+and+intragastric+routes+of+alcohol+administration%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Acute alcohol-induced pancreatic injury is similar with intravenous and intragastric routes of alcohol administration.</a> Pancreas. 43 (1), 69-74 (2014).</li>
<li>Huang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acid+ethyl+ester+synthase+inhibition+ameliorates+ethanol-induced+Ca2%2B-dependent+mitochondrial+dysfunction+and+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Fatty acid ethyl ester synthase inhibition ameliorates ethanol-induced Ca2+-dependent mitochondrial dysfunction and acute pancreatitis.</a> Gut. 63 (8), 1313-1324 (2014).</li>
<li>Sun, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NRF2+mitigates+acute+alcohol-induced+hepatic+and+pancreatic+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Food+and+Chemical+Toxicology%22%5BJournal%5D)">NRF2 mitigates acute alcohol-induced hepatic and pancreatic injury in mice.</a> Food and Chemical Toxicology. 121, 495-503 (2018).</li>
<li>Kui, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+into+the+methodology+of+L-arginine-induced+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">New insights into the methodology of L-arginine-induced acute pancreatitis.</a> PLoS One. 10 (2), 0117588(2015).</li>
<li>Creutzfeldt, W., Schmidt, H., Horbach, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+the+effects+of+a+trypsin+inhibitor+%28Trasylol%29+on+Enzyme+activities+and+morphology+in+taurocholate+and+calciphylaxis+pancreatitis+of+the+rat+%28a+contribution+to+the+pathogenesis+of+pancreatitis%29%5BTitle%5D)+AND+%22Klin+Wochenschr%22%5BJournal%5D)">Studies on the effects of a trypsin inhibitor (Trasylol) on Enzyme activities and morphology in taurocholate and calciphylaxis pancreatitis of the rat (a contribution to the pathogenesis of pancreatitis).</a> Klin Wochenschr. 43, 15-22 (1965).</li>
<li>Liu, Z. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+taurocholate-induced+model+of+severe+acute+pancreatitis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">A simple taurocholate-induced model of severe acute pancreatitis in rats.</a> World Journal of Gastroenterology. 15 (45), 5732-5739 (2009).</li>
<li>Cavdar, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controversial+issues+in+biliary+pancreatitis%3A+when+should+we+perform+MRCP+and+ERCP%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreatology%22%5BJournal%5D)">Controversial issues in biliary pancreatitis: when should we perform MRCP and ERCP.</a> Pancreatology. 14 (5), 411-414 (2014).</li>
<li>Perides, G., van Acker, G. J., Laukkarinen, J. M., Steer, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+acute+biliary+pancreatitis+induced+by+retrograde+infusion+of+bile+acids+into+the+mouse+pancreatic+duct%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Experimental acute biliary pancreatitis induced by retrograde infusion of bile acids into the mouse pancreatic duct.</a> Nature Protocols. 5 (2), 335-341 (2010).</li>
<li>Orabi, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cluster+of+differentiation+38+%28CD38%29+mediates+bile+acid-induced+acinar+cell+injury+and+pancreatitis+through+cyclic+ADP-ribose+and+intracellular+calcium+release%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Cluster of differentiation 38 (CD38) mediates bile acid-induced acinar cell injury and pancreatitis through cyclic ADP-ribose and intracellular calcium release.</a> Journal of Biological Chemistry. 288 (38), 27128-27137 (2013).</li>
<li>Fanczal, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRPM2-mediated+extracellular+Ca%282%2B%29+entry+promotes+acinar+cell+necrosis+in+biliary+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">TRPM2-mediated extracellular Ca(2+) entry promotes acinar cell necrosis in biliary acute pancreatitis.</a> Journal of Physiology. 598 (6), 1253-1270 (2020).</li>
<li>Huang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caffeine+protects+against+experimental+acute+pancreatitis+by+inhibition+of+inositol+1%2C4%2C5-trisphosphate+receptor-mediated+Ca2%2B+release%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Caffeine protects against experimental acute pancreatitis by inhibition of inositol 1,4,5-trisphosphate receptor-mediated Ca2+ release.</a> Gut. 66 (2), 301-313 (2017).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dehydrocholic+acid+ameliorates+sodium+taurocholate-induced+acute+biliary+pancreatitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+and+Pharmaceutical+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Dehydrocholic acid ameliorates sodium taurocholate-induced acute biliary pancreatitis in mice.</a> Biology and Pharmaceutical Bulletin. 43 (6), 985-993 (2020).</li>
<li>Hagiwara, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antithrombin+III+prevents+cerulein-induced+acute+pancreatitis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Antithrombin III prevents cerulein-induced acute pancreatitis in rats.</a> Pancreas. 38 (7), 746-751 (2009).</li>
<li>Hagiwara, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Danaparoid+sodium+prevents+cerulein-induced+acute+pancreatitis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Danaparoid sodium prevents cerulein-induced acute pancreatitis in rats.</a> Shock. 32 (1), 94-99 (2009).</li>
<li>Wittel, U. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taurocholate-induced+pancreatitis%3A+a+model+of+severe+necrotizing+pancreatitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Taurocholate-induced pancreatitis: a model of severe necrotizing pancreatitis in mice.</a> Pancreas. 36 (2), 9-21 (2008).</li>
<li>Barlass, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphine+worsens+the+severity+and+prevents+pancreatic+regeneration+in+mouse+models+of+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Morphine worsens the severity and prevents pancreatic regeneration in mouse models of acute pancreatitis.</a> Gut. 67 (4), 600-602 (2018).</li>
<li>Wu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systematic+review+of+NSAIDs+treatment+for+acute+pancreatitis+in+animal+studies+and+clinical+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Research+in+Hepatology+and+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">A systematic review of NSAIDs treatment for acute pancreatitis in animal studies and clinical trials.</a> Clinical Research in Hepatology and Gastroenterology. 44, 100002(2020).</li>
<li>Schmidt, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+better+model+of+acute+pancreatitis+for+evaluating+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+in+Surgery%22%5BJournal%5D)">A better model of acute pancreatitis for evaluating therapy.</a> Annals in Surgery. 215 (1), 44-56 (1992).</li>
<li>Junyuan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quercetin+protects+against+intestinal+barrier+disruption+and+inflammation+in+acute+necrotizing+pancreatitis+through+TLR4%2FMyD88%2Fp38MAPK+and+ERS+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreatology%22%5BJournal%5D)">Quercetin protects against intestinal barrier disruption and inflammation in acute necrotizing pancreatitis through TLR4/MyD88/p38MAPK and ERS inhibition.</a> Pancreatology. 18 (7), 742-752 (2018).</li>
<li>Waldron, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Orai+Ca%282%2B%29+channel+inhibitor+CM4620+targets+both+parenchymal+and+immune+cells+to+reduce+inflammation+in+experimental+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">The Orai Ca(2+) channel inhibitor CM4620 targets both parenchymal and immune cells to reduce inflammation in experimental acute pancreatitis.</a> Journal of Physiology. 597 (12), 3085-3105 (2019).</li>
<li>Petersen, O. H., Gerasimenko, J. V., Gerasimenko, O. V., Gryshchenko, O., Peng, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+roles+of+calcium+and+ATP+in+the+physiology+and+pathology+of+the+exocrine+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">The roles of calcium and ATP in the physiology and pathology of the exocrine pancreas.</a> Physiological Reviews. 101 (4), 1691-1744 (2021).</li>
</ol>

Le modèle SAP induit par TC est un excellent outil de recherche. Comme le montre cette étude, ce modèle est très facilement réalisé dans les laboratoires généraux sans utiliser d’appareils spécifiques. Lorsqu’il est utilisé en combinaison avec l’histologie et l’analyse biochimique, il fournit une approche rentable (réactifs peu coûteux) et rapide (fenêtre de temps de 24 heures) pour induire et évaluer l’AP. L’ajustement de la concentration de TC offre également la possibilité de produire des AP légères et modérées. Perid...

La pancréatite aiguë (AP) est une inflammation aiguë du pancréas caractérisée par une obstruction du canal pancréatique principal avec distension canalaire ultérieure et autodigestion du pancréas par ses enzymes anormalement activées. Ses manifestations cliniques comprennent une inflammation locale ou systémique, des douleurs abdominales et une élévation de l’amylase sérique1,2. Selon la classification de gravité3, l’AP peut se présenter sous des formes légères, modérées et sévères, et parmi elles, la pancréatite aiguë sévère (SAP) est la condition la plus préoccupante en raison de son taux de mortalité élevé de plus de 30 %4. Aux États-Unis, l’AP est l’une des raisons les plus courantes d’hospitalisation, touchant plus de 200 000 patients5. De plus, l’AP, en particulier SAP, augmente chaque année et affecte les groupes d’âge plus jeunes6. Cependant, il y a un manque d’options de traitement efficaces dans la pratique clinique actuelle6,7. Par conséquent, il est nécessaire d’explorer les mécanismes moléculaires impliqués dans l’AP, facilitant ainsi l’amélioration du traitement.
Des modèles animaux expérimentaux bien établis sont nécessaires pour étudier les mécanismes impliqués dans l’AP et évaluer l’efficacité des différentes modalités de traitement. Avec l’accessibilité facile des souches transgéniques et knockout et leur petite taille, qui minimise les doses de médicaments nécessaires à l’évaluation in vivo, les souris sont préférées pour la recherche AP. Par conséquent, plusieurs modèles d’AP ont été développés chez la souris8,9.
Travaillant à partir d’un modèle de rat de pancréatite légère induite par l’administration intraveineuse de caerulein10, Niederau et al. ont développé un modèle murin SAP présenté avec une nécrose à cellules acineuses induite à l’aide du même médicament et de la même voie d’injection11. Bien que ce modèle présente plusieurs avantages, notamment la non-invasivité, l’induction rapide, la reproductibilité étendue et l’applicabilité, l’inconvénient majeur est que seule une forme légère d’AP est développée dans la plupart des cas, limitant ainsi sa pertinence clinique. L’alcool est considéré comme l’un des principaux facteurs étiologiques de l’AP; cependant, Foitzik et coll. ont rapporté qu’il ne cause des lésions pancréatiques que lorsqu’il est associé à d’autres facteurs, comme l’hyperstimulation exocrine12. De plus, bien que des modèles d’AP induits par l’alcool se soient développés par différentes voies d’administration et que des doses de médicaments aient été rapportées13,14,15, leur principal inconvénient est la difficulté de les reproduire. L’administration intrapéritonéale de L-arginine peut également induire l’AP chez la souris16; cependant, sa faible pertinence clinique entrave son application. Le taurocholate, un sel biliaire, a été proposé pour la première fois par Creutzfeld et al. en 1965 pour induire une affection ressemblant à l’AP humaine par perfusion de canal pancréatique17. Bien qu’il existe des controverses quant à sa pertinence clinique en physiopathologie18,19, la pancréatite induite par le taurocholate reste un modèle indispensable pour la SAP.
Comme ce modèle est simple à réaliser et est également efficace chez la souris, il est maintenant l’un des modèles AP les plus utilisés pour les études in vivo sur de petits animaux. Perides et al. ont utilisé le taurocholate de sodium (TC) pour induire la SAP chez la souris20, fournissant des informations pour comprendre sa pathologie. Combiné à des techniques de modification génétique, ce modèle nous a permis de confirmer plusieurs gènes spécifiques impliqués dans l’AP. Par exemple, Bicozo et al. ont montré qu’un knockout du gène CD38 protégeait contre un modèle de pancréatite à perfusion de TC et attribuait les mécanismes à des altérations de la signalisation intracellulaire Ca2+21. Fanczal et coll. ont étudié l’implication physiologique de l’expression de TRPM2 dans la membrane plasmique des cellules acineuses et canalaires pancréatiques de souris, et ont démontré une gravité réduite de la SAP induite par TC chez les souris knock-out TRPM22. En outre, ce modèle fournit également un moyen simple et efficace de tester de nombreux nouveaux médicaments in vivo. Par exemple, cette méthode a permis de valider les effets thérapeutiques de la caféine23, de l’acide déshydrocholique24 et de divers antioxydants et anticoagulants25,26. Ces preuves démontrent la polyvalence du modèle SAP induit par TC. Bien que Wittel et coll. aient décrit un modèle murin similaire27, un manque de détails sur les procédures de mise en œuvre pourrait entraîner une incapacité à reproduire les résultats. Dans cet article, nous nous concentrons sur les méthodes utilisant un simple microsyringe fait maison et étudions la SAP induite par TC, fournissant ainsi des conseils possibles non seulement pour une étude plus approfondie de la pathogenèse et du traitement de l’AP, mais également pour une méthode expérimentale parfaitement adaptable pour de nombreuses autres substances.

<table><tbody><tr><td>Iodophor 0,5 %</td><td>Shanghai Likang Désinfectant</td><td>310102</td><td>4 mL/souris</td></tr><tr><td>Chlorure de sodium 0,9 %</td><td>Sinopharm Group Co., Ltd.</td><td>10019318</td><td>0,8 mL/souris</td></tr><tr><td>1 % Pentobarbital sodique</td><td>Sigma</td><td>P3761</td><td>0,2 -0,25 mL/souris</td></tr><tr><td>25 &mu ; L seringue Microliter à embout plat</td><td>Gaoge, Shanghai</td><td>A124019</td><td></td></tr><tr><td>4 % Paraformaldéhyde</td><td>Beyotime, Nantong, Chine</td><td>P0099-500ml</td><td></td></tr><tr><td>5 % taurocholate de sodium (TC)</td><td>Aladdin</td><td>S100834-5g</td><td>10 &mu ; Souris L/SAP</td></tr><tr><td>6-0 Microsuture stérile en nylon avec aiguille filetée (1/2 cercle)</td><td>Cheng-He</td><td>20093</td><td></td></tr><tr><td>75 % d’alcool</td><td>Sinopharm Group Co., Ltd.</td><td>10009218</td><td>4 mL/souris</td></tr><tr><td>8-0 Microsuture stérile en nylon avec aiguille filetée (cercle 3/8)</td><td>Cheng-He</td><td>19064</td><td></td></tr><tr><td>ALT Kit de dosage d’activité</td><td>EPNK, Anhui, Chine</td><td>ALT0012</td><td></td></tr><tr><td>Kit de dosage de l’amylase</td><td>EPNK, Anhui, Chine</td><td>AMY0012</td><td></td></tr><tr><td>Pince coudée pour petit bouledogue avec mâchoire de 12 mm (3 cm)</td><td>Copeaux de tremble Cheng-He</td><td>HC-X022</td><td></td></tr> ou <tr><td> déchiquetage pour la litière de souris</td><td>Beijing Vital River Laboratory Animal Technology</td><td>VR03015</td><td></td></tr><tr><td>AST Activity Assay Kit</td><td>EPNK, Anhui, Chine</td><td>AST0012</td><td></td></tr><tr><td>Blood Urea Nitrogen (BUN) Kit de dosage</td><td>EPNK, Anhui, Chine</td><td>BUN0011</td><td></td></tr><tr><td>souris C57BL / 6</td><td>Beijing Vital River Laboratory Animal Technology</td><td>213</td><td></td></tr><tr><td>Kit de dosage de créatine</td><td>EPNK, Anhui, Chine</td><td></td><td></td>CRE0012</tr><tr><td>Lame de microtome</td><td>Beyotime, Nantong, Chine</td><td>E0994</td><td></td></tr><tr><td>Pince hémostatique (9,5 cm, incurvée)</td><td>JZ, Shanghai Medical Instruments Co. Ltd.</td><td>JC3901</td><td></td></tr><tr><td>Kit de dosage de lipase</td><td>Jiancheng, Nanjing, Chine</td><td>A054-2-1</td><td></td></tr><tr><td>Microtome</td><td>Leica biosystem, Allemagne</td><td>RM2245</td><td></td></tr><tr><td>Analyseur de biochimie Mindray</td><td>Mindray, Shenzhen, Chine</td><td>BS-420</td><td></td></tr><tr><td>Kit de dosage MPO</td><td>Jiancheng, Nanjing, Chine</td><td>A044-1-1</td><td></td></tr><tr><td>Souris normale chow</td><td>Trophic, Nantong, Chine</td><td>LAD 1000</td><td></td></tr><tr><td>Solution saline tamponnée au phosphate</td><td>Beyotime, Nantong, Chine</td><td>C0221A</td><td></td></tr><tr><td>Pince micro-bouledogue droite avec mâchoire de 5 mm (1,5 cm)</td><td>JZ, Shanghai Medical Instruments Co. Ltd.</td><td>W40130</td><td></td></tr><tr><td>Pince droite ou courbe (11.0 cm)</td><td>Cheng-He</td><td>HC-X091A ou HC-X090A</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux droits (10.0 cm)</td><td>Cheng-He, Ningbo, Chine</td><td>HC-J039102</td><td></td></tr><tr><td>Thermo Scientific Centrifugeuse</td><td>Thermo Scientific, USA</td><td>Multifuge X1R</td><td></td></tr></tbody></table>

Établissement d’un modèle de pancréatite aiguë sévère chez la souris par injection rétrograde de taurocholate de sodium dans le canal biliopancréatique

Establishment of a Mouse Severe Acute Pancreatitis Model using Retrograde Injection of Sodium Taurocholate into the Biliopancreatic Duct

La prévalence de la pancréatite aiguë (PA), en particulier de la pancréatite aiguë sévère (SAP), augmente chaque année dans les groupes d’âge plus jeunes. Cependant, il y a un manque de traitements efficaces dans la pratique clinique actuelle. Avec l’accessibilité facile des souches transgéniques et knockout et leur petite taille, qui permet des doses minimales de médicaments nécessaires à l’évaluation in vivo , un modèle expérimental bien établi chez la souris est préféré pour la recherche sur l’AP. De plus, le SAP induit par le taurocholate de sodium (TC) est actuellement l’un des modèles les plus largement utilisés et les mieux caractérisés. Ce modèle a été étudié pour de nouvelles thérapies et des événements moléculaires possibles au cours du processus d’AP. Ici, nous présentons la génération d’un modèle de souris AP utilisant du taurocholate de sodium et un simple microsyringe fait maison. En outre, nous fournissons également la méthodologie pour les tests histologiques et sérologiques ultérieurs.

En suivant attentivement les instructions ci-dessus, nous avons obtenu une durée moyenne de chirurgie d’environ 40 min. Les souris étaient légèrement inactives et avaient perdu environ 0,5 à 1,75 g, 0,85 à 1,85 g et 0,5 à 4,73 g de poids à 24 h, 48 h et 72 h après l’opération, respectivement (figure 2).
À partir de la fin de la chirurgie jusqu’à 24 heures après l’opération, au fur et à mesure que la maladie se développait, les souris sont devenues inactives et ont...

Un modèle murin de pancréatite aiguë sévère est décrit ici. La procédure présentée ici est très rapide, simple et accessible, permettant ainsi potentiellement l’étude des mécanismes moléculaires et des différentes interventions thérapeutiques dans la pancréatite aiguë de manière pratique.

The prevalence of acute pancreatitis (AP), especially severe acute pancreatitis (SAP), is increasing in younger age groups annually. However, there is a ...

L’objectif global de cette vidéo est d’établir un modèle murin de pancréatite aiguë par injection rétrograde de taurocholate de sodium dans le canal biliopancréatique. Toutes les expériences impliquant des animaux ont été approuvées par le Comité d’éthique animale de l’Université Soochow. Toutes les interventions chirurgicales ont été effectuées sous anesthésie complète.Les analgésiques n’ont pas été utilisés afin de ne pas interférer avec l’évolution naturelle de la maladie, ce qui a été mis en évidence par des publications antérieures et approuvé par le Comité d’éthique animale de l’Université Soochow. Jeûnez la souris huit à 12 heures avant la chirurgie. Préparer des filtres de solution de taurocholate de sodium à 5% à travers un microfiltre de 0,22.Autoclavez les instruments et les matériaux chirurgicaux, y compris les pinces, les ciseaux, le porte-lame, le porte-aiguille, le clip hémostatique, les pinces vasculaires et les rideaux stériles. La micro-seringue a été stérilisée par irradiation. Avec la souris, induire une anesthésie générale avec injection intrapéritonéale de solution de sodium pentobarbital à 1% à une dose de 50 milligrammes par kilogramme.Fixez la souris en position couchée sur une plaque plate en mousse irradiée avec le ruban adhésif. Retirez la fourrure d’une souris avec une crème d’épilation du niveau du processus xiphoïde jusqu’à la ligne de connexion de la colonne iliaque supérieure antérieure bilatérale, avec les côtés gauche et droit parallèles à la ligne axillaire antérieure. Essuyez la peau deux à trois fois avec 0,5% d’iodophore et laissez-la sécher pendant une à deux minutes à chaque fois.Couvrez la souris avec des rideaux stériles. Coupez la couche de peau ouverte, puis ouvrez-la par voie sous-cutanée. Faites une incision abdominale médiane d’environ deux à trois centimètres de long.Localisez le duodénum de gauche à droite le long de l’estomac. Retirez doucement le duodénum et vers le côté gauche à l’aide d’une pince chirurgicale et d’un coton-tige imbibé de désinfectant pour exposer le pancréas, le canal biliopancréatique et la papille duodénale. Utilisez 8-0 sutures pour passer à travers la connexion entre le duodénum et le pancréas autour de la papille, tirez la suture sur le côté gauche du corps de la souris pour fixer le duodénum.Tirez doucement la peau et le bord inférieur du foie de côté. Serrez le canal hépatique commun. Percer le micro-injecteur dans le canal biliopancréatique distal rétrogradement.Fixez la pointe de l’aiguille près de la papille duodénale avec une pince. Infuser 10 microlitres de taurocholate de sodium à 5% dans le canal biliopancréatique à raison de 5 microlitres par minute. Gardez le canal biliopancréatique fermé pendant 5 minutes pour obtenir une pression stable.Retirez les pinces. Retirez le micro-injecteur, retirez l’autre pince et fixez la suture. Restaurez le duodénum à la position anatomique d’origine et vérifiez le saignement.Fermez la plaie avec 6-0 sutures. Retirez le drap stérile. Désinfectez l’incision avec 0,5% d’iodophore.Récupérez les animaux de l’anesthésie sur un coussin thermique de 37 degrés Celsius. Administrer 0,8 millilitre de solution saline à 0,9 % par voie sous-cutanée pour la supplémentation en liquide. 24 heures après l’opération, anesthésier la souris avec du pentobarbital sodique en utilisant la même dose et la même voie d’injection.Prélever le sang total de l’aorte abdominale et tourner à 1 500 x g pendant 15 minutes pour isoler le sérum pour les tests sérologiques. Prélever le pancréas et les tissus pulmonaires pour l’évaluation histologique. Immerger le pancréas dans une solution de paraformaldéhyde à 4% pendant 24 heures.Déshydrater dans une série de concentrations d’alcool et incorporer dans la paraffine. Utilisez un microtome pour préparer 5 micro coupes de tissu pancréatique épais. Effectuer une coloration H & E pour l’évaluation histologique du pancréas.Les souris étaient légèrement inactives et avaient perdu du poids 24 heures après l’opération par rapport à la pré-opération. Les taux de survie des souris témoins et SAP étaient respectivement de 100 % et 72,7 %, 72 heures après l’opération. Selon les résultats de coloration H & E des sections du pancréas, une nécrose pulpaire du tissu pancréatique a pu être observée chez les souris SAP alors qu’aucun changement significatif n’a pu être trouvé chez les souris témoins.De plus, des niveaux significativement accrus d’amylase, de lipase, de pancréas et d’activité pulmonaire MPO ont été trouvés chez les souris SAP par rapport aux souris témoins. En outre, des niveaux significativement élevés des indices hépatiques et rénaux, y compris ALT, AST, BUN et créatinine ont également été trouvés. En utilisant l’injection rétrograde de taurocholate de sodium dans le canal biliopancréatique, une pancréatite aiguë sévère pourrait être induite chez la souris.Bonne exposition du canal biliopancréatique pour assurer la ponction réussie. Pendant la ponction, assurez-vous de l’angle et de la force appropriés pour éviter la perforation du canal biliopancréatique. Le modèle SAP induit par TC décrit ici est un modèle approprié pour étudier les mécanismes impliqués dans la pancréatite aiguë sévère.Il s’agit d’un modèle économique utilisant des réactifs moins coûteux et cette vidéo aide à former le chirurgien novice plus rapidement.

establishment-mouse-severe-acute-pancreatitis-model-using-retrograde

Research

Recherche

JoVE Journal

Medicine

Médecine

Cette vidéo décrit la procédure de génération d’un modèle murin atteint de pancréatite biliaire aiguë par perfusion pancréatique de taurocholate de sodium. Ce modèle permet d’étudier les changements physiopathologiques induits par le taurocholate de sodium dans le pancréas.

Modèle de pancréatite biliaire aiguë : méthode de génération d’un modèle murin de pancréatite biliaire aiguë par perfusion du canal pancréatique

Les modèles animaux pour la pancréatite aiguë sévère permettent l’étude des changements physiopathologiques au stade initial, facilitant l’observation de l’évolution des événements inflammatoires. Nous fournissons ici un protocole pour l’induction de la pancréatite biliaire aiguë sévère par perfusion rétrograde de taurocholate de sodium dans le canal pancréatique de souris C57BL/6 anesthésiées.

Pancréatite aiguë sévère induite par le taurocholate de sodium chez les souris C57BL/6

La pancréatite chronique (PC) est une maladie caractérisée par une inflammation et une fibrose du pancréas, souvent associée à des douleurs abdominales intraitables. Cet article se concentre sur le raffinement de la technique pour générer un modèle murin de CP par perfusion de voies biliaires avec de l’acide 2,4,6 -trinitrobenzène sulfonique (TNBS).

Un modèle murin pour la pancréatite chronique par perfusion de TNBS dans les voies biliaires

L’administration intrapéritonéale de médicaments est une approche non invasive sûre et efficace pour induire des lésions pancréatiques. Cette étude a comparé cinq protocoles d’injection intrapéritonéale distincts sur des souris pour induire divers degrés de lésions pancréatiques et a établi un modèle de lésions pancréatiques sévères pour étudier les changements pathologiques et les stratégies de traitement de la pancréatite aiguë sévère (PAS).

Préparation d’un modèle murin de pancréatite aiguë sévère par une combinaison de céruleine et d’injection intrapéritonéale de lipopolysaccharide

Le présent protocole décrit une nouvelle approche de modélisation de la pancréatite obstructive chronique, qui implique la visualisation du canal pancréatique et l’électrocoagulation du canal pancréatique pour provoquer l’obstruction du canal pancréatique.

Un modèle de pancréatite chronique obstructive établi par électrocoagulation

Un modèle de contusion de la lésion médullaire sévère est décrite. Les étapes détaillées pré-opératoire, opératoires et post-opératoires sont décrits pour obtenir un modèle cohérent.

Un modèle de contusion de graves lésions de la moelle épinière chez les rats

Création décollements de rétine expérimentales avec une hauteur reproductible et durable de détachement, et sans hémorragie sous-rétinienne, est important pour l'étude de la physiopathologie des photorécepteurs perte de cellules dans la maladie de la rétine et l'évaluation des interventions thérapeutiques potentielles. Ici, nous rapportons une telle méthode en détail.

Décollement de la rétine modèle chez les rongeurs par injection sous-rétinienne de hyaluronate de sodium

La capacité à modéliser les infections des voies urinaires (IVU) est cruciale pour pouvoir comprendre la pathogenèse bactérienne et favoriser le développement de nouvelles thérapies. L’objectif de ce travail est de démontrer des modèles murins d’infections urinaires expérimentales et d’infections urinaires associées à un cathéter qui récapitulent et prédisent les résultats observés chez l’homme.

Création et caractérisation de l&#39;UTI et Cauti dans un modèle de souris

Nous présentons une approche spectroscopique optique diffuse (DOS) qui fournit des biomarqueurs optiques quantitatifs de la réponse de la peau aux rayonnements. Nous décrivons la conception de l’instrumentation DOS, les algorithmes d’extraction des paramètres optiques et les procédures de manipulation des animaux nécessaires pour produire des données représentatives à partir d’un modèle murin préclinique d’érythème radio-induit.

Diffuse Spectroscopie optique pour l&#39;évaluation quantitative de la toxicité de la peau induit par les rayonnements ionisants aiguë Utilisation d&#39;un modèle de souris

Dans cet article, nous présentons un protocole visant à induire la lésion pulmonaire aiguë chez les porcs par injection centrale-veineuse d’acide oléique. Il s’agit d’un modèle animal établi pour l’étude du syndrome de détresse respiratoire aiguë (SDRA).

Acide oléique-Injection chez les porcs comme modèle pour un Syndrome de détresse respiratoire aiguë

Découvrez comment établir un modèle de pancréatite aiguë sévère chez la souris par injection rétrograde de taurocholate de sodium dans le canal biliopancréatique. Cette méthode permet d'étudier les mécanismes moléculaires et les interventions thérapeutiques.

Établissement d’un modèle de pancréatite aiguë sévère chez la souris par injection rétrograde de taurocholate de sodium dans le canal biliopancréatique (Vidéo) | JoVE Journal

Établissement d’un modèle de pancréatite aiguë sévère chez la souris par injection rétrograde de taurocholate de sodium dans le canal biliopancréatique

Explorer plus de vidéos