Name: Une plateforme de découverte robuste pour l’identification de nouveaux médiateurs de métastases de mélanome (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-03-08T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 41 s
Description: Découvrez un flux de travail standardisé pour évaluer les régulateurs de métastases du mélanome en utilisant des modèles in vivo robusts. Cette méthode améliore la reproductibilité et facilite la découverte de cibles thérapeutiques.

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Nous remercions la Division des technologies de recherche avancées (DART) de NYU Langone Health, et en particulier le laboratoire de recherche en pathologie expérimentale, le centre de technologie du génome, le laboratoire de cytométrie et de tri cellulaire, le noyau d’imagerie préclinique, qui sont partiellement soutenus par la subvention de soutien du Perlmutter Cancer Center NIH / NCI 5P30CA016087. Nous remercions le NYU Interdisciplinary Melanoma Cooperative Group (PI: Dr Iman Osman) d’avoir donné accès à des cultures à court terme de mélanome dérivées de patients + (10-230BM et 12-273BM), qui ont été obtenues grâce à des protocoles approuvés par la CISR (étude de consentement universel #s16-00122 et étude interdisciplinaire du groupe coopératif sur le mélanome n ° 10362). Nous remercions le Dr Robert Kerbel (Université de Toronto) d’avoir fourni des lignées cellulaires de mélanome 113/6-4L et 131/4-5B1* et le Dr Meenhard Herlyn (Wistar Institute) d’avoir fourni des cultures à court terme de mélanome WM 4265-2, WM 4257s-1, WM 4257-2**. E.H. est soutenu par NIH/NCI R01CA243446, P01CA206980, un American Cancer Society-Melanoma Research Alliance Team Science Award, et un NIH Melanoma SPORE (NCI P50 CA225450; PI : I.O.). La figure 1 a été créée avec Biorender.com.

<ol><li>Sung, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+Cancer+Statistics+2020%3A+GLOBOCAN+Estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries%5BTitle%5D)+AND+%22CA%3A+A+Cancer+Journal+for+Clinicians%22%5BJournal%5D)">Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN Estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 71 (3), 209-249 (2021).</li>
<li>Adler, N. R., Haydon, A., McLean, C. A., Kelly, J. W., Mar, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metastatic+pathways+in+patients+with+cutaneous+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Pigment+Cell+Melanoma+Research%22%5BJournal%5D)">Metastatic pathways in patients with cutaneous melanoma.</a> Pigment Cell Melanoma Research. 30 (1), 13-27 (2017).</li>
<li>Platz, A., Egyhazi, S., Ringborg, U., Hansson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+cutaneous+melanoma%3B+a+review+of+NRAS+and+BRAF+mutation+frequencies+in+relation+to+histogenetic+subclass+and+body+site%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Oncology%22%5BJournal%5D)">Human cutaneous melanoma; a review of NRAS and BRAF mutation frequencies in relation to histogenetic subclass and body site.</a> Molecular Oncology. 1 (4), 395-405 (2008).</li>
<li>Alonso, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-throughput+study+in+melanoma+identifies+epithelial-mesenchymal+transition+as+a+major+determinant+of+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">A high-throughput study in melanoma identifies epithelial-mesenchymal transition as a major determinant of metastasis.</a> Cancer Research. 67 (7), 3450-3460 (2007).</li>
<li>Rowe, C. J., Khosrotehrani, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+and+biological+determinants+of+melanoma+progression%3A+Should+all+be+considered+for+clinical+management%5BTitle%5D)+AND+%22Australasian+Journal+of+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Clinical and biological determinants of melanoma progression: Should all be considered for clinical management.</a> Australasian Journal of Dermatology. 57 (3), 175-181 (2016).</li>
<li>Plebanek, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pre-metastatic+cancer+exosomes+induce+immune+surveillance+by+patrolling+monocytes+at+the+metastatic+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Pre-metastatic cancer exosomes induce immune surveillance by patrolling monocytes at the metastatic niche.</a> Nature Communications. 8 (1), 1319(2017).</li>
<li>Orgaz, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+pigment+epithelium-derived+factor+enables+migration%2C+invasion+and+metastatic+spread+of+human+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Loss of pigment epithelium-derived factor enables migration, invasion and metastatic spread of human melanoma.</a> Oncogene. 28 (47), 4147-4161 (2009).</li>
<li>Ladhani, O., Sanchez-Martinez, C., Orgaz, J. L., Jimenez, B., Volpert, O. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pigment+epithelium-derived+factor+blocks+tumor+extravasation+by+suppressing+amoeboid+morphology+and+mesenchymal+proteolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Pigment epithelium-derived factor blocks tumor extravasation by suppressing amoeboid morphology and mesenchymal proteolysis.</a> Neoplasia. 13 (7), 633-642 (2011).</li>
<li>Ju, R. J., Stehbens, S. J., Haass, N. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+melanoma+cell-stroma+interaction+in+cell+motility%2C+invasion%2C+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Medicine+-+Dermatology%22%5BJournal%5D)">The role of melanoma cell-stroma interaction in cell motility, invasion, and metastasis.</a> Frontiers in Medicine - Dermatology. 5, 307(2018).</li>
<li>Wiley, H. E., Gonzalez, E. B., Maki, W., Wu, M. T., Hwang, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+CC+chemokine+receptor-7+and+regional+lymph+node+metastasis+of+B16+murine+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+National+Cancer+Institute%22%5BJournal%5D)">Expression of CC chemokine receptor-7 and regional lymph node metastasis of B16 murine melanoma.</a> Journal of the National Cancer Institute. 93 (21), 1638-1643 (2001).</li>
<li>Meier, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metastatic+pathways+and+time+courses+in+the+orderly+progression+of+cutaneous+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Metastatic pathways and time courses in the orderly progression of cutaneous melanoma.</a> British Journal of Dermatology. 147 (1), 62-70 (2002).</li>
<li>Turner, N., Ware, O., Bosenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+of+metastasis%3A+melanoma+and+other+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Genetics of metastasis: melanoma and other cancers.</a> Clinical & Experimental Metastasis. 35 (5-6), 379-391 (2018).</li>
<li>Ubellacker, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymph+protects+metastasizing+melanoma+cells+from+ferroptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Lymph protects metastasizing melanoma cells from ferroptosis.</a> Nature. 585 (7823), 113-118 (2020).</li>
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<li>Unger, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+human+carcinomas%3A+physiologically+relevant+3D+models+to+improve+anti-cancer+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">Modeling human carcinomas: physiologically relevant 3D models to improve anti-cancer drug development.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 79-80, 50-67 (2014).</li>
<li>Fong, E. L., Harrington, D. A., Farach-Carson, M. C., Yu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heralding+a+new+paradigm+in+3D+tumor+modeling%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Heralding a new paradigm in 3D tumor modeling.</a> Biomaterials. 108, 197-213 (2016).</li>
<li>Nakamura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+mouse+melanoma+cell+lines+by+their+mortal+malignancy+using+an+experimental+metastatic+model%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Science%22%5BJournal%5D)">Characterization of mouse melanoma cell lines by their mortal malignancy using an experimental metastatic model.</a> Life Science. 70 (7), 791-798 (2002).</li>
<li>Meeth, K., Wang, J. X., Micevic, G., Damsky, W., Bosenberg, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+YUMM+lines%3A+a+series+of+congenic+mouse+melanoma+cell+lines+with+defined+genetic+alterations%5BTitle%5D)+AND+%22Pigment+Cell+Melanoma+Research%22%5BJournal%5D)">The YUMM lines: a series of congenic mouse melanoma cell lines with defined genetic alterations.</a> Pigment Cell Melanoma Research. 29 (5), 590-597 (2016).</li>
<li>Koya, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BRAF+inhibitor+vemurafenib+improves+the+antitumor+activity+of+adoptive+cell+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">BRAF inhibitor vemurafenib improves the antitumor activity of adoptive cell immunotherapy.</a> Cancer Research. 72 (16), 3928-3937 (2012).</li>
<li>Jenkins, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+murine+BRaf%28V600E%29+melanoma+cell+lines+with+sensitivity+to+PLX4032%5BTitle%5D)+AND+%22Pigment+Cell+Melanoma+Research%22%5BJournal%5D)">Multiple murine BRaf(V600E) melanoma cell lines with sensitivity to PLX4032.</a> Pigment Cell Melanoma Research. 27 (3), 495-501 (2014).</li>
<li>Tuncer, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SMAD+signaling+promotes+melanoma+metastasis+independently+of+phenotype+switching%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">SMAD signaling promotes melanoma metastasis independently of phenotype switching.</a> The Journal of Clinical Investigation. 129 (7), 2702-2716 (2019).</li>
<li>Schwartz, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incipient+Melanoma+Brain+Metastases+Instigate+Astrogliosis+and+Neuroinflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Incipient Melanoma Brain Metastases Instigate Astrogliosis and Neuroinflammation.</a> Cancer Research. 76 (15), 4359-4371 (2016).</li>
<li>Perez-Guijarro, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multimodel+preclinical+platform+predicts+clinical+response+of+melanoma+to+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Multimodel preclinical platform predicts clinical response of melanoma to immunotherapy.</a> Nature Medicine. 26 (5), 781-791 (2020).</li>
<li>Krepler, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Comprehensive+Patient-Derived+Xenograft+Collection+Representing+the+Heterogeneity+of+Melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">A Comprehensive Patient-Derived Xenograft Collection Representing the Heterogeneity of Melanoma.</a> Cell Reports. 21 (7), 1953-1967 (2017).</li>
<li>Agrawal, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systems+biology+approach+identifies+FUT8+as+a+driver+of+melanoma+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A systems biology approach identifies FUT8 as a driver of melanoma metastasis.</a> Cell. 31 (6), 804-819 (2017).</li>
<li>Hanniford, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetic+silencing+of+CDR1as+drives+IGF2BP3-mediated+melanoma+invasion+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Epigenetic silencing of CDR1as drives IGF2BP3-mediated melanoma invasion and metastasis.</a> Cancer Cell. 37 (1), 55-70 (2020).</li>
<li>Kim, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PRMT5+control+of+cGAS%2FSTING+and+NLRC5+pathways+defines+melanoma+response+to+antitumor+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">PRMT5 control of cGAS/STING and NLRC5 pathways defines melanoma response to antitumor immunity.</a> Science Translational Medicine. 12 (551), (2020).</li>
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<li>Morsi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+characterization+of+a+clinically+relevant+mouse+model+of+melanoma+brain+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Pigment+Cell+Melanoma+Research%22%5BJournal%5D)">Development and characterization of a clinically relevant mouse model of melanoma brain metastasis.</a> Pigment Cell Melanoma Research. 26 (5), 743-745 (2013).</li>
<li>Huynh, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+in+vivo+microRNA+targeting+of+liver+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Efficient in vivo microRNA targeting of liver metastasis.</a> Oncogene. 30 (12), 1481-1488 (2011).</li>
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<li>Sil, P., Wong, S. W., Martinez, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((More+than+skin+deep%3A+autophagy+is+vital+for+skin+barrier+function%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">More than skin deep: autophagy is vital for skin barrier function.</a> Frontiers in Immunology. 9, 1376(2018).</li>
<li>Chen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+CRISPR+screen+in+a+mouse+model+of+tumor+growth+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Genome-wide CRISPR screen in a mouse model of tumor growth and metastasis.</a> Cell. 160 (6), 1246-1260 (2015).</li>
<li>Hart, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+CRISPR+screens+reveal+fitness+genes+and+genotype-specific+cancer+liabilities%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">High-resolution CRISPR screens reveal fitness genes and genotype-specific cancer liabilities.</a> Cell. 163 (6), 1515-1526 (2015).</li>
<li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+essential+genes+in+the+human+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of essential genes in the human genome.</a> Science. 350 (6264), 1096-1101 (2015).</li>
<li>Edgar, R., Domrachev, M., Lash, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+Expression+Omnibus%3A+NCBI+gene+expression+and+hybridization+array+data+repository%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Research%22%5BJournal%5D)">Gene Expression Omnibus: NCBI gene expression and hybridization array data repository.</a> Nucleic Acids Research. 30 (1), 207-210 (2002).</li>
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<li>Grossman, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+a+shared+vision+for+cancer+genomic+data%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Toward a shared vision for cancer genomic data.</a> New England Journal of Medicine. 375 (12), 1109-1112 (2016).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêts à déclarer.

L’objectif de ce rapport technique est d’offrir un flux de travail standardisé de haut en bas pour l’étude des acteurs potentiels dans les métastases du mélanome. Comme les expériences in vivo peuvent être coûteuses et prendre beaucoup de temps, les stratégies visant à maximiser l’efficacité et à augmenter la valeur des informations obtenues sont primordiales.
Il est impératif d’utiliser des approches complémentaires tout au long de la procédure pour valider les résultats au sein d’un...

La mortalité élevée associée au mélanome métastatique combinée à une incidence croissante de mélanome dans le monde1 (une augmentation estimée à 7,86 % d’ici 2025) nécessite de nouvelles approches thérapeutiques. Les progrès dans la découverte de cibles reposent sur des modèles reproductibles de métastases, un processus très complexe. Tout au long des étapes de la cascade métastatique, les cellules du mélanome doivent surmonter d’innombrables obstacles pour atteindre l’évasion du système immunitaire et la colonisation des tissus éloignés2. La résilience et l’adaptabilité des cellules du mélanome proviennent d’une multitude de facteurs, notamment leur charge mutationnelle génétique élevée3 et leur origine de crête neurale, qui confèrent une plasticité phénotypique cruciale 3,4,5. À chaque étape, les programmes transcriptionnels permettent aux cellules métastasantes du mélanome de passer d’un état à l’autre en fonction des signaux de la diaphonie avec le microenvironnement, comprenant le système immunitaire6, le milieu extracellulaire 7,8 et l’architecture cellulaire des barrières physiques 9 avec lesquelles elles entrent en contact. Par exemple, les cellules de mélanome échappent à la surveillance immunitaire en régulant à la baisse l’expression d’importants facteurs sécrétés par la tumeur d’amorçage immunitaire6.
Des études décrivent une « niche prémétastatique », dans laquelle les cellules du mélanome sécrètent des chimiokines et des cytokines pour amorcer l’organe « cible » distant pour les métastases10. Ces résultats soulèvent des questions importantes sur le tropisme organique des cellules de mélanome métastatique et la voie anatomique qu’elles empruntent pour accéder aux tissus éloignés. Après intravasation, on sait que les cellules du mélanome métastasent par les lymphatiques (propagation lymphatique) et les vaisseaux sanguins (propagation hématogène)2,11. Alors que la plupart des patients présentent une maladie localisée, un petit sous-ensemble de cas présente une maladie métastatique à distance et aucune dissémination lymphatique (atteinte négative des ganglions lymphatiques)11, ce qui suggère l’existence d’autres voies métastatiques pour le mélanome.
Lorsqu’elles colonisent un site métastatique, les cellules du mélanome subissent des adaptations épigénétiques et métaboliques12,13. Pour accéder et envahir de nouveaux compartiments, les cellules de mélanome utilisent des protéases14 et des modifications cytosquelettiques 11,15, qui leur permettent de traverser et de se développer dans leur nouvel emplacement. La difficulté de cibler les cellules du mélanome réside dans la complexité et le nombre de telles adaptations; ainsi, le domaine devrait s’efforcer de recréer expérimentalement autant d’étapes et d’adaptations que possible. Malgré de nombreuses avancées dans les essais in vitro tels que les organoïdes et les cultures 3D16,17, ces modèles ne récapitulent qu’incomplètement la cascade métastatique in vivo.
Les modèles murins ont montré de la valeur en trouvant un équilibre entre la reproductibilité, la faisabilité technique et la simulation de la maladie humaine. Les cellules de mélanome implantées par voie intravasculaire, orthotopique et hétérotopique à partir de xénogreffes dérivées de patients ou de cultures à court terme dans des souris immunodéprimées ou humanisées représentent l’épine dorsale de la découverte de cibles dans le mélanome métastatique. Cependant, ces systèmes manquent souvent d’une contrainte biologique cruciale sur les métastases: le système immunitaire. Les modèles de métastases de mélanome syngénique qui possèdent cette contrainte sont relativement rares sur le terrain. Ces systèmes, développés chez des souris immunocompétentes, dont B16-F1018, la famille YUMM des lignées cellulaires19, SM120, D4M321, RIM322 ou plus récemment, les lignées cellulaires de mélanome RMS23 et M1 (Mel114433), M3 (HCmel1274), M4 (B2905)24 , facilitent l’étude du rôle complexe de la réponse immunitaire de l’hôte dans la progression du mélanome.
Ici, un pipeline pour l’identification de la cible des métastases du mélanome est présenté. Avec l’augmentation et l’augmentation des ensembles de données « omiques » générés à partir de cohortes de patients atteints de mélanome, nous postulons que les études les plus prometteuses sur le plan clinique sont celles qui découlent de l’intégration de données volumineuses, conduisant à un interrogatoire fonctionnel et mécaniste méticuleux 25,26,27,28. En utilisant des modèles murins pour étudier des cibles potentielles dans le processus métastatique, on peut rendre compte des événements in vivo spécifiques et des interactions tissulaires, augmentant ainsi la probabilité de traduction clinique. Plusieurs méthodes pour quantifier la charge métastatique sont décrites, fournissant des données complémentaires sur les résultats d’une expérience donnée. Un protocole d’isolement unicellulaire des tumeurs dans divers organes est décrit pour aider à la caractérisation impartiale de l’expression des gènes dans les cellules métastatiques, qui peuvent précéder le séquençage de l’ARN unicellulaire ou en vrac.

<table><tbody><tr><td>#15 Lame Scapel&nbsp ;</td><td>WPI</td><td>500242</td><td>Pour les interventions chirurgicales</td></tr><tr><td>#3 Scapel Handle</td><td>WPI</td><td>500236</td><td>Pour les interventions chirurgicales</td></tr><tr><td>1 mL Seringue à tuberculine, embout coulissant&nbsp ;</td><td>BD</td><td>309626</td><td>Injections</td></tr><tr><td>Seringue de 10 ml, embout coulissant</td><td>BD</td><td>301029</td><td>Perfusion</td></tr><tr><td>10 % Formol Tamponné Sodique</td><td>EK Industries</td><td>4499-20L</td><td>Pour perfusion/fixateur tissulaire</td></tr><tr><td>15 mL Conique</td><td>Corning&nbsp ;</td><td>430052</td><td>Culture cellulaire</td></tr><tr><td>15 mL Tubes à centrifuger coniques en polypropylène</td><td>Falcon</td><td>352196</td><td>Culture cellulaire</td></tr><tr><td>200 Proof Ethanol</td><td>Deacon Labs</td><td>04-355-223</td><td>Histologie</td></tr><tr><td>22G &ndash ; 22mm aiguille</td><td>BD</td><td>305156</td><td>Perfusion</td></tr><tr><td>4-0 Vicryl Suture</td><td>Ethicon</td><td>J464G</td><td>Suture</td></tr><tr><td>4 % Carson’s phosphate tamponné paraformaldéhyde&nbsp ;</td><td>EMS</td><td>15733-10</td><td>Pour perfusion/fixateur tissulaire</td></tr><tr><td>40&micro ; m</td><td>Corning</td><td>431750</td><td>Traitement des tissus</td></tr><tr><td>5-0 Suture résorbable&nbsp ;</td><td>Ethicon</td><td>6542000</td><td>Bouchon</td></tr><tr><td>50 mL Conique&nbsp ;</td><td>Corning&nbsp ;</td><td>430828</td><td>Culture cellulaire</td></tr><tr><td>50mL Tubes à centrifuger coniques en polypropylène</td><td>Falcon</td><td>352070</td><td>Culture cellulaire</td></tr><tr><td>7-0 Suture en soie&nbsp ;</td><td>FST</td><td>18020-70</td><td>Ligature</td></tr><tr><td>70&micro ; m</td><td>Corning</td><td>431751</td><td>Tissue processing</td></tr><tr><td>Supports de montage anti-décoloration&nbsp ; &nbsp ;</td><td>Vector Labs</td><td>H-1000-10</td><td>Approximateur d’immunofluorescence</td></tr><tr><td>appliquant des pinces, 10cm&nbsp ;</td><td>WPI</td><td>14189</td><td>Pour les procédures microchirurgicales</td></tr><tr><td>Avance</td><td>Bruker</td><td>3 HD</td><td>NMR Console&nbsp ;</td></tr><tr><td>Biospec 7030°</td><td>Bruker</td><td>7030</td><td>Micro IRM</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Bioreg</td><td>A941</td><td>NuMA Coloration</td></tr><tr><td>Castroviejo pince à suture, pointes droites 5,5mm plate-forme d’attachage, 11cm&nbsp ;</td><td>WPI</td><td>WP5025501</td><td>Pour les procédures microchirurgicales</td></tr><tr><td>Coplin Staining Jar</td><td>Bel-Art&nbsp ;</td><td>F44208-1000</td><td>Histologie</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9542-1MG</td><td>Immunofluorescence</td></tr><tr><td>dCas9-KRAB</td><td>Addgene</td><td>110820</td><td>Manipulation génétique</td></tr><tr><td>DNase I</td><td>NEB</td><td>M0303L</td><td>Traitement</td></tr><tr><td>des tissus DPBS</td><td>Corning</td><td>21-030-CM</td><td>Traitement des tissus</td></tr><tr><td>Extra Sharp Non coated Single Edge Blade</td><td>GEM</td><td>62-0167</td><td>Traitement des tissus</td></tr><tr><td>Substrat de matrice extracellulaire&nbsp ;</td><td>Corning</td><td>354234</td><td>considérer que le facteur de croissance est réduit (comme alternative)</td></tr><tr><td>FBS</td><td>Cytiva</td><td>SH30910.03</td><td>Culture cellulaire</td></tr><tr><td>Fiji Image J</td><td>Fiji Image J</td><td>Logiciel</td><td>Immunofluorescence</td></tr><tr><td>Chèvre anti-lapin HRP multimère conjugué&nbsp ;</td><td>Thermo Fisher</td><td>A16104</td><td>NuMA Coloration du</td></tr><tr><td>sérum de chèvre</td><td>Gibco</td><td>PCN5000</td><td>Immunofluorescence</td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Corning</td><td>21-020-CV</td><td>Traitement des tissus</td></tr><tr><td>Hématoxyline&nbsp ;</td><td>Richard-Allan Scientific&nbsp ;</td><td>7231</td><td>Histologie</td></tr><tr><td>Illumina III&nbsp ;</td><td>PerkinElmer</td><td>CLS136334</td><td>BLI Instrument</td></tr><tr><td>Seringue à insuline 28G - Aiguille 8mm</td><td>BD</td><td>329424</td><td>Injections</td></tr><tr><td>Seringue à insuline 31G - Aiguille 6mm&nbsp ;</td><td>BD</td><td>326730</td><td></td></tr><tr><td>Injections Pince à iris, 10.2cm, Full Curve, dentelée</td><td>WPI</td><td>504478</td><td>Pour la perfusion et les interventions chirurgicales</td></tr><tr><td>Isoflurane USP</td><td>Covetrus</td><td>11695067772</td><td>Anesthesia</td></tr><tr><td>Jewelers #7 Forceps Titanium 11 cm 0.07 x 0.01 mm Pointe</td><td>WPI</td><td>WP6570</td><td>Pour les procédures microchirurgicales</td></tr><tr><td>Kétamine HCl 100mg/mL</td><td>Mylan Ind.</td><td>1049007</td><td>Anesthésie</td></tr><tr><td>lentiCRISPRv2</td><td>Addgene</td><td>98290</td><td>Manipulation génétique</td></tr><tr><td>Lycopersicon Esculentum (Tomate) Lectine, DyLight 649</td><td>Invitrogen</td><td>L32472</td><td>Marqueur des cellules endothéliales</td></tr><tr><td>vasculaires MEM acides aminés non essentiels X 100</td><td>Corning</td><td>25-025-CI</td><td>Culture cellulaire</td></tr><tr><td>Ciseaux Metzenbaum</td><td>WPI</td><td>503269</td><td>Pour chirurgical procédures</td></tr><tr><td>Unité de micro-injection</td><td>KOPF</td><td>5000</td><td>Injections intracardiaques</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher</td><td>S25877&nbsp ;</td><td>Coloration NuMA</td></tr><tr><td>Aiguille 30G x 25mm</td><td>BD</td><td>305128</td><td>Aiguille d’injection intracardiaque</td></tr><tr><td>33G x 15mm</td><td>Hamilton</td><td>7747-01 Porte-aiguille</td><td>d’injection intracarotidienne</td></tr><tr><td>, Castroviejo, 14cm, avec serrure, 1,2mm Mâchoires dentelées</td><td>WPI</td><td>14137-G</td><td>Pour les procédures microchirurgicales</td></tr><tr><td>NOD. souris Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ souris</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>005557</td><td>Modèle murin</td></tr><tr><td>NU/J</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>002019</td><td>Modèle murin</td></tr><tr><td>Appareil mitotique nucléaire Protéine polyclonale de lapin anti-humaine&nbsp ;</td><td>Abcam</td><td>97585</td><td>NuMA Coloration</td></tr><tr><td>Pénicilline-Streptomycine 10000U/mL</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td>Culture cellulaire</td></tr><tr><td>Percoll</td><td>GE</td><td>0891-01</td><td>solution de séparation de densité&nbsp ;</td></tr><tr><td>Gants chirurgicaux PI Classic Cardinal</td><td>Health</td><td>2D72PT75X</td><td>Chirurgie</td></tr><tr><td>pLKO Tet-On</td><td>Addgene</td><td>21915</td><td>Manipulation génétique</td></tr><tr><td>Povidone-Iodine 10 % Solution</td><td>Medline</td><td>MDS093943</td><td>Surgery</td></tr><tr><td>Proparacaine Drops 0.5 %</td><td>Akorn Pharma</td><td>AX0501</td><td>Anesthésique local ophtalmique</td></tr><tr><td>Puralube Petrolatum Pommade ophtalmique</td><td>Dechra</td><td>83592</td><td>Lame de rasoir d’anesthésie</td></tr><tr><td>Lames à double tranchant</td><td>EMS</td><td>72000</td><td>Rasage et tranchage cérébral du vibrotome&nbsp ;</td></tr><tr><td>Reflex 9mm EZ Clip&nbsp ;</td><td>Braintree</td><td>EZC-&nbsp ; KIT</td><td>Fermeture de plaie</td></tr><tr><td>RPMI 1640&nbsp ;</td><td>Corning</td><td>10-040-CM</td><td>Ciseaux de culture cellulaire</td></tr><tr><td>, ressort 10.5cm Str, lames 8mm</td><td>WPI</td><td>501235</td><td>Pour les procédures microchirurgicales</td></tr><tr><td>Microtome à lame vibrante semi-automatique</td><td>Leica</td><td>VT1200</td><td>Brain Slice Immunofluorescence</td></tr> Système <tr><td>de vaporisateur d’anesthésie monocanal</td><td>Kent Scientific</td><td>VetFlo-1210S&nbsp ;</td><td>anesthésie</td></tr><tr><td>Smartbox Système de chambre de table et souffleur d’extraction</td><td>EZ Systems</td><td>TT4000</td><td>CO2 Euthanasie</td></tr><tr><td>Champ jetable stérile fenêtré</td><td>Medline</td><td>NON21002</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgie Blouses chirurgicales Aurora stériles non renforcées avec manchons encastrés</td><td>Medline</td><td>DYNJP2715</td><td></td></tr><tr><td>Surgery T25 Flask</td><td>Corning&nbsp ;</td><td>430639</td><td>Culture cellulaire</td></tr><tr><td>Tris</td><td>Corning</td><td>46-031-CM</td><td>NuMA Coloration</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X100-500ML</td><td>Immunofluorescence</td></tr><tr><td>Pince à attacher Troutman, 10cm, Motif G incurvé, pointe de 0,52 mm avec plate-forme de liaison</td><td>WPI</td><td>WP505210</td><td>Pour les procédures microchirurgicales</td></tr><tr><td>Pinces de vaisseau 10G Pression 5x 0,8mm Mâchoires, 5/paquet</td><td>WPI</td><td>15911</td> Pour <td> procédures microchirurgicales</td></tr><tr><td>Visiopharm</td><td>Visiopharm</td><td>Visiopharm</td><td>NuMA Logiciel de quantification de la coloration</td></tr><tr><td>Xylasine 100mg/mL</td><td>Akorn Pharma</td><td>59399-111-50</td><td>Anesthésie</td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Fisher</td><td>X3P-1GAL</td><td>Histologie</td></tr></tbody></table>

une plateforme de découverte robuste pour l’identification de nouveaux médiateurs de métastases de mélanome

A Robust Discovery Platform for the Identification of Novel Mediators of Melanoma Metastasis

La métastase est un processus complexe, qui oblige les cellules à surmonter des barrières qui ne sont que partiellement modélisées par des essais in vitro . Un flux de travail systématique a été établi à l’aide de modèles in vivo robustes et reproductibles et de méthodes normalisées pour identifier de nouveaux acteurs dans les métastases du mélanome. Cette approche permet d’inférer des données à des stades expérimentaux spécifiques pour caractériser avec précision le rôle d’un gène dans les métastases. Les modèles sont établis en introduisant des cellules de mélanome génétiquement modifiées par injection intracardiaque, intradermique ou sous-cutanée chez la souris, suivie d’une surveillance par imagerie in vivo en série. Une fois les critères d’évaluation préétablis atteints, les tumeurs primaires et/ou les organes porteurs de métastases sont prélevés et traités pour diverses analyses. Les cellules tumorales peuvent être triées et soumises à l’une des nombreuses plates-formes « omiques », y compris le séquençage de l’ARN unicellulaire. Les organes subissent des analyses d’imagerie et d’immunohistopathologie pour quantifier le fardeau global des métastases et cartographier leur emplacement anatomique spécifique. Ce pipeline optimisé, y compris des protocoles normalisés pour la greffe, la surveillance, la récolte, le traitement et l’analyse des tissus, peut être adopté pour les cultures à court terme dérivées de patients et les lignées cellulaires humaines et murines établies de divers types de cancer solide.

Les figures suivantes illustrent comment le flux de travail décrit a été appliqué pour l’identification de nouveaux facteurs de métastases de mélanome. La figure 2 résume les résultats d’une étude publiée dans laquelle les effets du silence de la fucosyltransférase FUT8 dans les métastases in vivo du mélanome ont été étudiés26. En bref, l’analyse des données glycomiques des patients humains (obtenues par des réseaux de lectines) et le profilage transcriptomiq...

Cet article décrit un flux de travail de techniques utilisées pour tester de nouveaux médiateurs candidats de métastases de mélanome et leur(s) mécanisme(s) d’action.

Une plateforme de découverte robuste pour l’identification de nouveaux médiateurs de métastases de mélanome

Metastasis is a complex process, requiring cells to overcome barriers that are only incompletely modeled by in vitro assays. A systematic workflow was ...

Ce protocole décrit une série de techniques au sein d’un flux de travail continu qui peuvent être utilisées pour évaluer les effets in vivo des régulateurs candidats des métastases du mélanome, mais aussi des métastases d’autres tumeurs malignes solides. Le principal avantage de notre flux de travail systématique est une reproductibilité accrue des données grâce à des modèles et des techniques in vivo robustes et standardisés. Ce pipeline offre une voie pour la découverte de cibles et le développement de thérapies en testant des candidats déduits de données Omics ou de tests in vitro dans un contexte in vivo.La courbe d’apprentissage associée aux techniques présentées dans ce protocole est raccourcie en utilisant le matériel fourni et en suivant la description détaillée lors de la pratique des étapes. Orlando Aristizabal, chercheur scientifique au Préclinical Imaging Core et Ran Moubarak, instructeur dans mon laboratoire, aideront à démontrer la procédure. Pour les injections intradermiques, anesthésiez et rasez une souris de huit à 10 semaines à l’intérieur d’une armoire de biosécurité tout en maintenant des conditions aseptiques.Ensuite, saisissez et rétractez la peau vers l’arrière contre la trajectoire de l’aiguille et, à l’aide d’une aiguille de seringue à insuline de six millimètres de long et de calibre 31, perforez doucement la peau à un angle aigu avec le biseau tourné vers le haut. Injecter 30 microlitres de la suspension de la cellule tumorale lentement, jusqu’à ce qu’une roue en forme de dôme soit observée. Surveillez la progression de la croissance tumorale, la perte de poids et l’état de santé général.Au cours de ces séances de surveillance, prenez des mesures avec des étriers et utilisez les dimensions de longueur et de largeur de la tumeur pour calculer le volume. Pour les injections intracardiaques, transférer une souris anesthésiée sur la plate-forme chauffée de l’appareil à ultrasons. Ensuite, à l’aide de ruban hypoallergénique, fixez la souris au cône du nez.Rasez le thorax avec une lame de rasoir droite ou une lame de scalpel, inclinée à un angle de 30 degrés et nettoyez la peau autour de la zone de procédure avec 10% d’iode de povidone. Ensuite, positionnez la sonde à ultrasons au milieu du thorax sur le côté gauche de la souris pour capturer une fenêtre horizontale orientée pour obtenir une vue en coupe transversale du ventricule gauche. Avec le long axe de la sonde tourné vers le haut, fixez la sonde à un angle de 50 degrés et la plate-forme chauffée à un angle de 20 degrés, puis verrouillez la sonde et le cadre de support en position.Lorsque vous travaillez à l’intérieur de l’armoire de sécurité, dessinez la suspension de la cellule dans une seringue tuberculine d’un millilitre avec une aiguille d’un pouce de calibre 30. Retirez toutes les bulles d’air présentes dans la seringue. Verrouillez la seringue dans l’injecteur stéréotaxique.Et puis, sous guidage échographique, avancez l’aiguille à travers la paroi thoracique dans le ventricule gauche du cœur et injectez lentement 100 à 250 microlitres de la suspension de cellules tumorales. Pour la chirurgie de survie par étapes, placez la souris anesthésiée sur le coussin chauffant et nettoyez la peau autour de la zone de procédure avec une solution d’iode à 10% de povidone. Après avoir enfilé un équipement de protection individuelle stérile et des gants, déposez un drap stérile sur le corps de l’animal.Ensuite, à l’aide de ciseaux à iris ou d’un scalpel, inciser la peau, en maintenant une marge de résection de cinq à sept millimètres du bord de la tumeur. En cas de tumeurs intradermiques, réséquez la tumeur avec la peau circonférentielle. Pour les tumeurs sous-cutanées, disséquez et enlevez la tumeur sous la peau.Après la résection de la tumeur, fermez la plaie avec un dispositif d’agrafage de neuf millimètres. Pour l’imagerie in vivo, administrer le substrat de d-luciférine à la souris par injection intrapéritonéale avec une seringue à insuline d’un millilitre et une aiguille de calibre 28, puis anesthésier la souris et la placer dans un cône de nez à l’intérieur du scanner d’imagerie de bioluminescence. Démarrez l’instrument en appuyant sur initialiser et réglez le temps d’exposition sur auto.Pour capturer une image vierge pour la soustraction d’arrière-plan, cliquez sur Acquérir et enregistrez l’image une fois la séquence d’acquisition terminée. Pour l’analyse des données et le même logiciel d’imagerie in vivo, accédez au dossier où les images sont enregistrées et ouvrez les images de toutes les souris d’une expérience. Réglez les unités sur l’éclat et assurez-vous que la case à cocher indiquant l’individu n’est pas cochée, car cela empêchera la normalisation du signal entre les groupes.Ensuite, à l’aide de la région d’intérêt ou de l’outil de dessin du retour sur investissement, dessinez des rois circulaires pour la région du cerveau et des rois rectangulaires pour le corps, excluez les oreilles et le nez dans le roi du cerveau car ils ont tendance à émettre une luminance non spécifique. Pour minimiser les biais, dessinez des retours sur investissement sur les photographies des souris sans le signal luminescent superposé, puis sélectionnez les retours sur investissement de mesure pour quantifier le signal et exporter les données vers une feuille de calcul. Analyser les différences entre les groupes en traçant le flux luminescent total dans les régions du corps d’intérêt.Après une coloration NuMA à l’aide d’un logiciel, dessinez un retour sur investissement pour inclure toutes les cellules colorées NuMA dans le tissu organique, à l’exception des autres parenchymes d’organes et des espaces vides. Ajustez les paramètres pour catégoriser les cellules NuMA positives et NuMA négatives tout en utilisant des contrôles positifs et négatifs appropriés pour chaque organe. Utilisez un algorithme logiciel établi pour quantifier le nombre total de cellules NuMA positives pour chaque échantillon.La bioluminescence, le champ lumineux, la fluorescence ex vivo et les images de coloration à l’hématoxyline et à l’éosine illustrent l’approche à plusieurs volets pour l’analyse des effets des gènes candidats sur les métastases du mélanome. Le silençage de la fucosyltransférase a altéré la dissémination métastatique des cellules de mélanome. Les sections pulmonaires colorées NuMA des cellules de mélanome infectées par le virus Linda témoin et par un suppresseur de métastase exprimant le virus Linda sont présentées ici.Les cellules métastatiques du mélanome sont marquées en vert et la zone de l’organe est délimitée par une ligne verte hachurée. Maintenir une tension adéquate dans la peau lors des injections intradermiques, éviter l’embolie aérienne lors de la préparation des seringues et obtenir des marges de résection adéquates qui ne devraient pas interférer avec la locomotion de l’animal ou le prédisposer aux complications de la plaie, aident à améliorer le taux de réussite et la reproductibilité. L’utilisation ultérieure de l’imagerie multiplex pour examiner la filtration immunitaire, le séquençage de l’ARN unicellulaire pour l’analyse de l’expression génique et la transcriptomique spatiale pourraient tous fournir des avenues complémentaires pour examiner l’hétérogénéité intratumorale.La combinaison de techniques décrites dans ce protocole nous a aidés à identifier de nouveaux régulateurs dans les métastases cérébrales du mélanome, tels que le rôle du mélanome sécrété par la bêta-amyloïde dans la suppression de la neuroinflammation et la promotion des métastases cérébrales.

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Cet article décrit les procédures d'un essai de métastases expérimentales qui est utilisé pour déterminer le potentiel métastatique de lignées cellulaires humaines de cancer.

Assay Métastases expérimentales

Cette vidéo décrit le protocole permettant d’établir un modèle murin de métastases spontanées de xénogreffes dérivées de patients atteints de cancer colorectal ou PDX. Ces modèles de xénogreffes imitent partiellement les caractéristiques des carcinomes humains et comprennent les aspects critiques des tumeurs malignes humaines, y compris l’invasion et les métastases.

Modèles murins de métastases spontanées : une plateforme pour étudier le potentiel métastatique des cellules cancéreuses colorectales injectées orthotopiquement

Dans cette vidéo, des cellules de mélanome sont injectées par voie intraveineuse par la veine de la queue dans le modèle murin. Les cellules du mélanome voyagent ensuite dans le système circulatoire, s’adaptant au microenvironnement distant et provoquant des métastases dans des organes comme les poumons.

Modèle expérimental de mélanome métastatique : une plateforme pour étudier le potentiel métastatique des cellules de mélanome dans les poumons

Ce protocole décrit une technique de préparation d’échantillons par co-culture d’explants ovariens avec des cellules cancéreuses de la trompe de Fallope. Ces échantillons sont visualisés à l’aide de la spectroscopie de masse imageuse, ou IMS, pour détecter l’échange de petites molécules entre les cellules et les tissus conduisant au développement de tumeurs.

Modélisation de la communication du cancer de l’ovaire pour l’analyse par spectrométrie de masse par imagerie : une méthode pour identifier les communicateurs chimiques à petites molécules dans le développement d’une tumeur ovarienne métastatique

Les métastases jouent un rôle profond dans la virulence du cancer, représentant environ 90 % des décès.  Nous rapportons un protocole pour un modèle de mélanome métastatique chez la souris qui est utile pour déterminer l’efficacité des agents thérapeutiques contre ce phénomène clinique.

L&#39;injection de cellules syngéniques murin de mélanome pour déterminer leur potentiel métastatique dans les Poumons

Ici, nous présentons un protocole pour générer un modèle 3D organotypique mélanome sphéroïde de peau qui reprend l’architecture et complexité multicellulaire d’un orgue/tumeurs in vivo , mais en même temps peut accueillir systématique expérimentale intervention.

Un modèle de peau 3D organotypique mélanome sphéroïde

Nous présentons un protocole pour évaluer les niveaux d’expression des microARN (miARN) en circulation dans les échantillons de plasma de patients atteints de cancer. En particulier, nous avons utilisé un kit disponible dans le commerce pour faire circuler l’extraction de miRNA et transcriptase inverse. Enfin, nous avons analysé un panel de 24 miARN sélectionnés à l’aide de plaques personnalisées sonde préalablement repéré en temps réel.

Détection d’un Panel de micro-ARN Custom circulant chez les Patients atteints de Cancer Colorectal métastatique

À l’ère de l’immunothérapie et du profilage génomique unicellulaire, la biologie du cancer nécessite de nouveaux outils in vitro et informatiques pour étudier l’interface tumorale-immunitaire dans un contexte spatio-temporel approprié. Nous décrivons des protocoles pour exploiter les co-cultures microfluidiques immunitaires contre les tumeurs dans des contextes 2D et 3D, compatibles avec la surveillance dynamique et multiparamétrique des fonctions cellulaires.

Modèles de co-culture microfluidique pour disséquer la réponse immunitaire dans des microenvironnements tumoraux in vitro

Il s’agit d’une méthode efficace pour dépister les suppresseurs ou les facteurs de métastases cancéreuses. Les cellules, transduites avec une bibliothèque d’expressions, sont injectées dans le système vasculaire de la membrane chorioallantoïque du poulet pour former des colonies métastatiques. Les colonies ayant un caractère invasif diminué ou accru sont excisées, élargies, réinjectées pour confirmer leur phénotype et, enfin, analysées à l’aide d’un séquençage à haut débit.

Découverte de régulateurs métastatiques à l’aide d’un modèle de membrane chorioallantoïque intravitale rapide et quantitative du poussin

Le mélanome est une maladie très agressive qui se propage rapidement à d’autres organes. Ce protocole décrit l’application de l’imagerie échographique à ultra-haute fréquence, associée à un rendu 3D, pour surveiller le volume des ganglions lymphatiques inguinaux dans le modèle murin Braf/Pten du mélanome métastatique.

Analyse du volume des ganglions lymphatiques par imagerie ultrasonore à ultra-haute fréquence dans le modèle murin de mélanome génétiquement modifié Braf/Pten

Ici, nous présentons un protocole pour générer des organoïdes dérivés de patients atteints de mélanome en cultivant des suspensions cellulaires dissociées à partir de tissus de mélanome frais. Ces organoïdes récapitulent fidèlement les tumeurs spécifiques aux patients in vitro, offrant une approche innovante pour explorer les mécanismes immunosuppresseurs tumoraux, le dépistage des médicaments, les mécanismes de résistance aux médicaments et les approches de surveillance du cancer.

Dévoilement des opportunités thérapeutiques avec des modèles organoïdes dérivés de patients atteints de mélanome

Découvrez un flux de travail standardisé pour évaluer les régulateurs de métastases du mélanome en utilisant des modèles in vivo robusts. Cette méthode améliore la reproductibilité et facilite la découverte de cibles thérapeutiques.

Une plateforme de découverte robuste pour l’identification de nouveaux médiateurs de métastases de mélanome

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