Name: Un modèle murin BALB/c néonatal d’entérocolite nécrosante (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-11-30T14:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 39 s
Description: Découvrez comment établir un modèle d'entérocolite nécrosante chez des souris BALB/c néonatales. Cette méthode permet d'étudier les réponses des cellules T et les mécanismes immunitaires impliqués dans cette maladie grave des nouveau-nés prématurés.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Les auteurs remercient la Banque de ressources biologiques cliniques du Centre médical pour femmes et enfants de Guangzhou pour avoir fourni l’échantillon clinique et le Centre des animaux de laboratoire des biosciences de Guangzhou Forevergen pour avoir fourni des souris. Cette recherche a été soutenue par la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine 81770510 (R.Z.).

Cette recherche a été approuvée par le Comité d’éthique médicale du Guangzhou Women and Children’s Medical Center (NO. 174A01) et le Comité d’éthique animale du Guangzhou Forevergen Biosciences Laboratory Animal Center (IACUC-G160100). Tous les animaux ont été élevés dans la même pièce dans un environnement spécifique exempt d’agents pathogènes (FPS), et des expériences ont été menées dans un environnement conventionnel. Les souris utilisées pour la reproduction étaient âgées de 7 à 8 semaines; les souris pour induire le NEC (n = 72) ont été séparées du barrage le jour 4, et les mères (n = 14) ont été gardées dans la cage d’origine et ont nourri les souris du groupe témoin (Suite) (n = 24).
1. Préparation des réactifs et des dispositifs
<ol><li>Préparer le substitut de lait pour les souris BALB/c dans le rapport correspondant (lait en poudre pour bébé prématuré: lait de chèvre en poudre = 2:1). REMARQUE : Les compositions nutritionnelles finales du lait maternisé12 sont présentées dans le tableau 1.</li>
	<li>Solution de LPS (2,5 mg/mL)<ol>
<li>Dissoudre un total de 10 mg de poudre de LPS dans 4 mL d’eau stérilisée à double distillation, bien mélanger et conserver au réfrigérateur à -20 °C après aliquote. REMARQUE: La solution LPS est stockée dans l’obscurité à 2-8 ° C pour une utilisation immédiate ou à -20 ° C pour un stockage à long terme.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Induire une entérocolite nécrosante chez les souris BALB/c néonatales
<ol><li>Nourrissez les souris néonatales.<ol>
<li>Gardez les souris néonatales dans la même cage que la mère, nourries par la mère les jours 0 à 4.</li>
		<li>La nuit du jour 4 (lorsque les souris néonatales pèsent 2,5 à 3 g), séparez les souris néonatales du groupe NEC de la mère pour induire la NEC, gardez-les dans un incubateur d’animaux et nourrissez-les avec du lait maternisé. Cependant, le groupe Cont. est autorisé à rester avec le barrage et à être nourri par celui-ci. REMARQUE: Les souris néonatales séparées de la mère doivent être élevées dans un incubateur en raison de leur faible régulation de la température corporelle.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Préparez le tube de gavage en le faisant tremper dans des récipients d’alcool à 75% pendant 1 à 2 minutes et lavez-les deux fois dans de l’eau propre et double distillée. REMARQUE: Pour éviter la contamination croisée entre les souris, le processus ci-dessus doit être effectué après avoir nourri chaque souris.</li>
	<li>Induire le modèle NEC.<ol>
<li>Prenez les souris néonatales du barrage le jour 4 et jeûnez-les pendant une nuit.</li>
		<li>Gavage les souris avec du LPS (20-30 μL à la fois) et les nourrir avec du lait maternisé le jour 5 (40-50 μL à la fois).</li>
		<li>À partir du jour 5, soumettez les souris à un cycle hypoxie-réoxygénation-froid-choc deux fois par jour pendant 5 jours. Placez les souris dans un dispositif d’hypoxie à 5% O2 pendant 90 s et réoxygénez-les pendant 3 min; répétez ce processus cinq fois. Ensuite, placez les souris dans un environnement à 4 °C pendant 15 minutes, puis transférez-les dans un incubateur. Voir figure 1A,B pour le processus d’induction. REMARQUE: Un cycle d’hypoxie-réoxygénation-stimulation par le froid a été effectué une fois le matin et une fois l’après-midi. Un mélange de 5 % d’O2 et de 95 % de N2 a été préparé dans le récipient et la concentration a été mesurée à l’aide d’un détecteur d’oxygène.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Observez attentivement toutes les souris, pesez-les tous les jours, enregistrez la survie des souris pendant la période d’induction et enregistrez les caractéristiques des selles (avec ou sans selles collantes / selles sanglantes). REMARQUE: Le modèle NEC établi dure 5 jours.</li>
	<li>Le jour 10 ou plus tôt, lorsque les souris présentent des symptômes de NEC (iléus, hématochézie, diarrhée)13, euthanasier les souris par anesthésie par inhalation avec de l’isoflurane, puis prélever immédiatement le tissu intestinal. Ne prélevez pas de tissus sur les souris mortes spontanément. REMARQUE: Dans cette étude, le point final de l’euthénasie de la souris a été adapté lorsque la souris a présenté une hématochézie et une cyanose de tout le corps.</li>
</ol>3. Gavage la souris
<ol><li>Fixez la tête de la souris en tenant la sonde gastrique dans la main droite. Insérez la sonde gastrique dans le coin gauche de la bouche de la souris. REMARQUE: La tête a été fixée avec l’index sur la tête de la souris et doucement pressée vers l’arrière et vers le bas pour empêcher la souris de se pencher vers l’avant pendant l’opération et d’affecter l’insertion de la sonde gastrique.</li>
	<li>Déplacez lentement le tube vers le centre de la bouche. Après avoir inséré le tube d’environ 2-3 cm, poussez 40-50 μL de formule ou 20-30 μL de LPS dans le tube digestif. Voir figure 2A,B pour le gavage. REMARQUE: Dans des circonstances normales, la sonde gastrique est insérée dans le tube digestif en douceur. Si la souris a un fort réflexe de vomissement, la sonde gastrique a été insérée dans la trachée par erreur. La sonde gastrique doit être retirée doucement et la souris doit être laissée reposer pendant un certain temps avant de réessayer de la gavage. De plus, la procédure de gavage est utilisée pour induire le modèle de NEC avant l’euthanasie des souris.</li>
</ol>4. Prélever des échantillons de tissu intestinal frais pour la coloration à l’hématoxyline et à l’éosine (H & E)
<ol><li>Immerger le tissu frais de l’iléon de la souris dans 10% de formol pendant 24 h.</li>
	<li>Incorporer les tissus dans de la paraffine et les découper en sections de 4 μm.</li>
	<li>Déparaffinez les sections dans le xylène et réhydratez-les successivement en éthanol absolu, 95% d’éthanol, 80% d’éthanol, 70% d’éthanol et eau distillée, en trempant pendant 5 min à chaque étape. Colorez les sections avec une solution d’hématoxyline pendant 5 min et différenciez-les en acide chlorhydrique à 1% dans de l’alcool à 75% pendant 5 s. Enfin, colorez-les avec une solution d’éosine pendant 1 min. REMARQUE: Après coloration avec une solution d’hématoxyline, il doit être différencié avec de l’acide chlorhydrique à 1% dans l’éthanol pour éliminer la solution d’hématoxyline excessivement liée et le colorant hématoxyline cytoplasmique. La concentration d’acide chlorhydrique à 1% convient au tissu intestinal.</li>
	<li>Examiner l’histopathologie du tissu intestinal à un grossissement de 40x.</li>
</ol>

<ol><li>Horbar, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mortality+and+neonatal+morbidity+among+infants+501+to+1500+grams+from+2000+to+2009%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Mortality and neonatal morbidity among infants 501 to 1500 grams from 2000 to 2009.</a> Pediatrics. 129 (6), 1019-1026 (2012).</li>
<li>Stoll, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+outcomes+of+extremely+preterm+infants+from+the+NICHD+Neonatal+Research+Network%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Neonatal outcomes of extremely preterm infants from the NICHD Neonatal Research Network.</a> Pediatrics. 126 (3), 443-456 (2010).</li>
<li>Neu, J., Walker, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Necrotizing+enterocolitis%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Necrotizing enterocolitis.</a> New England Journal of Medicine. 364 (3), 255-264 (2011).</li>
<li>Sangild, P. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invited+Review%3A+The+preterm+pig+as+a+model+in+pediatric+gastroenterology%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Invited Review: The preterm pig as a model in pediatric gastroenterology.</a> Journal of Animal Science. 91 (10), 4713-4729 (2013).</li>
<li>Cancro, M. P., Sigal, N. H., Klinman, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+expression+of+an+equivalent+clonotype+among+BALB%2Fc+and+C57BL%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Differential expression of an equivalent clonotype among BALB/c and C57BL/6 mice.</a> Journal of Experimental Medicine. 147 (1), 1-12 (1978).</li>
<li>Kuroda, E., Yamashita, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+enhanced+macrophage-mediated+prostaglandin+E2+production+and+its+suppressive+role+in+Th1+activation+in+Th2-dominant+BALB%2Fc+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of enhanced macrophage-mediated prostaglandin E2 production and its suppressive role in Th1 activation in Th2-dominant BALB/c mice.</a> Journal of Immunology. 170 (2), 757-764 (2003).</li>
<li>Fornefett, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+clinics%2C+pathologies+and+immune+responses+in+BALB%2Fc+and+C57BL%2F6+mice+infected+with+Streptobacillus+moniliformis%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+and+Infection%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of clinics, pathologies and immune responses in BALB/c and C57BL/6 mice infected with Streptobacillus moniliformis.</a> Microbes and Infection. 20 (2), 101-110 (2018).</li>
<li>Rosas, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+background+influences+immune+responses+and+disease+outcome+of+cutaneous+L.+mexicana+infection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22International+Immunology%22%5BJournal%5D)">Genetic background influences immune responses and disease outcome of cutaneous L. mexicana infection in mice.</a> International Immunology. 17 (10), 1347-1357 (2005).</li>
<li>Sproat, T., Payne, R. P., Embleton, N. D., Berrington, J., Hambleton, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cells+in+preterm+infants+and+the+influence+of+milk+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">T cells in preterm infants and the influence of milk diet.</a> Frontiers in Immunology. 11, 1035(2020).</li>
<li>Nanthakumar, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mechanism+of+excessive+intestinal+inflammation+in+necrotizing+enterocolitis%3A+an+immature+innate+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The mechanism of excessive intestinal inflammation in necrotizing enterocolitis: an immature innate immune response.</a> PLoS One. 6 (3), 17776(2011).</li>
<li>Afrazi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+into+the+pathogenesis+and+treatment+of+necrotizing+enterocolitis%3A+Toll-like+receptors+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Research%22%5BJournal%5D)">New insights into the pathogenesis and treatment of necrotizing enterocolitis: Toll-like receptors and beyond.</a> Pediatric Research. 69 (3), 183-188 (2011).</li>
<li>Auestad, N., Korsak, R. A., Bergstrom, J. D., Edmond, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Milk-substitutes+comparable+to+rat%27s+milk%3B+their+preparation%2C+composition+and+impact+on+development+and+metabolism+in+the+artificially+reared+rat%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Nutrition%22%5BJournal%5D)">Milk-substitutes comparable to rat's milk; their preparation, composition and impact on development and metabolism in the artificially reared rat.</a> British Journal of Nutrition. 61 (3), 495-518 (1989).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lactoferrin-induced+myeloid-derived+suppressor+cell+therapy+attenuates+pathologic+inflammatory+conditions+in+newborn+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Lactoferrin-induced myeloid-derived suppressor cell therapy attenuates pathologic inflammatory conditions in newborn mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 129 (10), 4261-4275 (2019).</li>
<li>MohanKumar, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+neonatal+model+of+necrotizing+enterocolitis+caused+by+anemia+and+red+blood+cell+transfusions%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">A murine neonatal model of necrotizing enterocolitis caused by anemia and red blood cell transfusions.</a> Nature Communications. 10 (1), 3494(2019).</li>
<li>He, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transitory+presence+of+myeloid-derived+suppressor+cells+in+neonates+is+critical+for+control+of+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Transitory presence of myeloid-derived suppressor cells in neonates is critical for control of inflammation.</a> Nature Medicine. 24 (2), 224-231 (2018).</li>
<li>Cho, S. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+pathoimmunology+of+necrotizing+enterocolitis+reveals+novel+therapeutic+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Characterization of the pathoimmunology of necrotizing enterocolitis reveals novel therapeutic opportunities.</a> Nature Communications. 11 (1), 5794(2020).</li>
<li>Halpern, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+development+of+necrotizing+enterocolitis+in+IL-18-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Decreased development of necrotizing enterocolitis in IL-18-deficient mice.</a> American Journal of Physiology. Gastrointestinal and Liver Physiology. 294 (1), 20-26 (2007).</li>
<li>Wu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MAP3K2-regulated+intestinal+stromal+cells+define+a+distinct+stem+cell+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">MAP3K2-regulated intestinal stromal cells define a distinct stem cell niche.</a> Nature. 592 (7855), 606-610 (2021).</li>
<li>Nino, D. F., Sodhi, C. P., Hackam, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Necrotizing+enterocolitis%3A+new+insights+into+pathogenesis+and+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Gastroenterology+%26+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Necrotizing enterocolitis: new insights into pathogenesis and mechanisms.</a> Nature Reviews. Gastroenterology & Hepatology. 13 (10), 590-600 (2016).</li>
<li>Chuang, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cow%27s+milk+protein-specific+T-helper+type+I%2FII+cytokine+responses+in+infants+with+necrotizing+enterocolitis%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Allergy+%26+Immunology%22%5BJournal%5D)">Cow's milk protein-specific T-helper type I/II cytokine responses in infants with necrotizing enterocolitis.</a> Pediatric Allergy & Immunology. 20 (1), 45-52 (2009).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêts à divulguer.

La NEC est l’urgence du système gastro-intestinal la plus courante chez les nouveau-nés, avec une incidence et une mortalité élevées, en particulier chez les prématurés1,2,3. Cependant, sa pathogenèse n’est pas encore claire. On croit actuellement que les lésions muqueuses, l’invasion d’agents pathogènes et l’alimentation entérale sont des facteurs de risque élevés pour NEC3. À ce jour, les animaux utilis...

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/t/63252">A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis</a>. The Representative Results section was updated.
Figure 1 was updated from:
<img alt="Timeline diagram of NEC induction; process includes LPS, formula, hypoxia, reoxygenation stimulation." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63252/63252fig01.jpg" data-altupdatedat="1761830439000" data-alt="Figure 1"> 
Figure 1: Induction of the BALB/c NEC model process. (A) The mice in the NEC group were separated from the dam at birth until they were 4 days old (on Day 4) and fasted that night. The NEC model was induced from Day 5 onwards after birth and lasted for 5 days. Intestinal tissue specimens were collected on Day 10 or earlier. The mice in the Cont. group were housed with and nursed by the dam. (B) The sequence of operations for each day after inducing the NEC model. Abbreviations: Cont. = control; NEC = necrotizing enterocolitis; LPS = lipopolysaccharide. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63252/63252fig01large.jpg" target="_blank">Please click here to view a larger version of this figure.</a>
to:
<img alt="NEC induction timeline diagram, days after birth, LPS-formula hypoxia reoxygenation protocol" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63252/63252fig1v2.jpg" data-altupdatedat="1761830439000" data-alt="Figure 1"> 
Figure 1: Induction of the BALB/c NEC model process. (A) The mice in the NEC group were separated from the dam at birth until they were 4 days old (on Day 4) and fasted that night. The NEC model was induced from Day 5 onwards after birth and lasted for 5 days. Intestinal tissue specimens were collected on Day 10 or earlier. The mice in the Cont. group were housed with and nursed by the dam. (B) The sequence of operations for each day after inducing the NEC model. Abbreviations: Cont. = control; NEC = necrotizing enterocolitis; LPS = lipopolysaccharide. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63252/63252fig1v2large.jpg" target="_blank">Please click here to view a larger version of this figure.</a>

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/63252">A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis</a>. The Representative Results section was&#160;updated.

Erratum: A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis

L’entérocolite nécrosante (CEN), la maladie gastro-intestinale (GI) la plus grave, survient chez la plupart des prématurés (>90 %), en particulier ceux qui ont un très faible poids à la naissance (VLBW)1. Chez les nourrissons atteints de VLBW, l’incidence de la maladie varie de 10% à 12%, et la mortalité des enfants diagnostiqués avec NEC est comprise entre 20% et 30%2,3. La cause de la NEC peut être liée à des lésions muqueuses, à l’invasion par des bactéries pathogènes et à l’alimentation intestinale, ce qui peut entraîner des réponses inflammatoires et l’induction de lésions intestinales chez les hôtes sensibles3. La pathogenèse de NEC n’est pas claire. Des recherches pertinentes montrent que la réponse immunitaire du nourrisson affecté est anormale et que la susceptibilité génétique, la tension microvasculaire et les changements bactériens intestinaux peuvent jouer un rôle important dans la maladie3.
Le modèle animal NEC est un outil indispensable pour la recherche sur la pathogenèse du NEC. Les espèces animales utilisées pour les modèles NEC sont les porcs, les rats et les souris. Cependant, en raison de la longue période de gestation, des cycles de croissance et des coûts élevés, ces dernières années, les porcs n’ont pas été le premier choix pour les modèles NEC et ont été remplacés par des rats ou des souris4. Comme il existe des différences dans le contexte immunitaire de différentes souches de souris5, différentes études doivent utiliser différentes souches de souris pour établir des modèles animaux NEC. Les souris BALB/ c ont une caractéristique importante; lorsqu’elles sont infectées ou font face à des dommages externes, la polarisation des cellules TH2 pendant l’infection chez la souris est significativement plus forte que celle des autres souches de souris6,7,8. Les lymphocytes T auxiliaires jouent un rôle crucial dans l’apparition et la progression de la NEC, en particulier le développement des cellules TH23,9,10,11. Par conséquent, cette étude a utilisé des souris BALB / c pour établir le modèle NEC, ce qui pourrait être utile pour la recherche sur la maladie NEC sur les cellules T.

<table><tbody><tr><td>Éthanol absolu</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD.</td><td></td><td></td>100092683</tr><tr><td>Lait de chèvre en poudre</td><td>&nbsp ; Petag&nbsp ;</td><td></td><td></td>71795558417</tr><tr><td>solution de colorant HE</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD.</td><td>G1003</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>RWD, Shenzhen Reward Life Technology Co., LTD.</td><td>R510&nbsp ; &nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>LPS</td><td>Sigma-Adrich</td><td>L2880</td><td></td></tr><tr><td>Oxygène médical</td><td>divers</td><td>divers</td><td></td></tr><tr><td>Microscope</td><td>NIKON</td><td>Système d’imagerie NIKON (DS-Ri2)</td><td></td></tr><tr><td>Résine neutre</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD.</td><td></td><td></td>10004160</tr><tr><td>Paraffine</td>, <td>divers</td><td>divers</td><td></td></tr><tr><td>Lait pour bébé prématuré en poudre</td>, <td>Abbott</td><td>57430</td><td></td></tr>, <tr><td>Xylène</td><td>, Sinopharm, Chemical Reagent Co., LTD.</td><td></td><td></td>10023418</tr><tr><td>1 % d’acide chlorhydrique</td><td>divers</td><td>divers</td><td></td></tr><tr><td>10 % de formol</td><td>LEAGENE</td><td>DF0110</td><td></td></tr></tbody></table>

un modèle murin balb/c néonatal d’entérocolite nécrosante

A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis

L’entérocolite nécrosante (CEN) est la maladie gastro-intestinale (GI) la plus grave qui survient souvent chez les prématurés, en particulier les nourrissons de très faible poids à la naissance, avec une mortalité élevée et une pathogenèse incertaine. La cause de la CEN peut être liée à des anomalies inflammatoires du système de régulation immunitaire. Un modèle animal NEC est un outil indispensable pour la recherche sur le système immunitaire contre les maladies NEC. Les modèles animaux NEC utilisent généralement des souris néonatales C57BL/6J; Les souris néonatales BALB/c sont rarement utilisées. Des études connexes ont montré que lorsque des souris sont infectées, la différenciation cellulaire Th2 est prédominante chez les souris BALB / c par rapport aux souris C57BL / 6J. Des études ont suggéré que l’apparition et le développement de NEC sont associés à une augmentation des cellules T auxiliaires de type 2 (Th2) et sont généralement accompagnés d’une infection. Par conséquent, cette étude a utilisé des souris BALB/c néonatales pour induire un modèle NEC présentant des caractéristiques cliniques et des changements pathologiques intestinaux similaires à ceux observés chez les enfants atteints de NEC. Une étude plus approfondie est justifiée pour déterminer si ce modèle animal pourrait être utilisé pour étudier les réponses des cellules Th2 dans la NEC.

Le modèle BALB/c de souris NEC a été induit par l’alimentation au lait maternisé, l’alimentation LPS, l’hypoxie et la stimulation par le froid. Au cours de la période d’induction, les souris ont été observées pour la pathologie intestinale, les caractéristiques des selles, les changements de poids corporel et la survie quotidienne. Images représentatives de l’intestin grêle pendant l’induction de la NEC; les chiffres de l’image représentent le score de pathologie intestinale de 0 (épithélium normal) à 4 (le plus grave) (...

L’entérocolite nécrosante (CEN) est la maladie gastro-intestinale (GI) la plus grave qui survient souvent chez les prématurés, en particulier les nourrissons de très faible poids à la naissance, avec une mortalité élevée et une pathogenèse incertaine. La cause de la CEN peut être liée à des anomalies inflammatoires du système de régulation immunitaire. Un modèle animal NEC est un outil indispensable pour la recherche sur le système immunitaire contre les maladies NEC. Les modèles animaux NEC utilisent généralement des souris néonatales C57BL/6J; Les souris néonatales BALB/c sont rarement utilisées. Des études connexes ont montré que lorsque des souris sont infectées, la différenciation cellulaire Th2 est prédominante chez les souris BALB / c par rapport aux souris C57BL / 6J. Des études ont suggéré que l’apparition et le développement de NEC sont associés à une augmentation des cellules T auxiliaires de type 2 (Th2) et sont généralement accompagnés d’une infection. Par conséquent, cette étude a utilisé des souris BALB/c néonatales pour induire un modèle NEC présentant des caractéristiques cliniques et des changements pathologiques intestinaux similaires à ceux observés chez les enfants atteints de NEC. Une étude plus approfondie est justifiée pour déterminer si ce modèle animal pourrait être utilisé pour étudier les réponses des cellules Th2 dans la NEC.

Un modèle murin BALB/c néonatal d’entérocolite nécrosante

Necrotizing enterocolitis (NEC) is the most severe gastrointestinal (GI) disease that often occurs in premature infants, especially very low birth weight ...

Cette étude utilise des souris BALB/c pour établir le modèle NEC, qui sera utile pour la recherche sur les maladies sur les lymphocytes T. Le cinquième jour, les deux groupes ne montrent aucune différence significative sur la taille du corps. Cependant, au jour 10, les souris NEC étaient plus minces que les souris témoins de manière significative.Le poids des souris du groupe NEC a augmenté lentement et le taux de survie a progressivement diminué au cours des cinq jours d’établissement du modèle. Le modèle NEC pourrait être avantageux pour étudier la polarisation des lymphocytes T. Yan Tian, un étudiant de troisième cycle de mon laboratoire, fera la démonstration de la procédure.Gavage les souris avec 20 à 30 microlitres de LPS, et les nourrir avec 40 à 50 microlitres de formule le cinquième jour. À partir du cinquième jour, placez-les dans un dispositif d’hypoxie à 5% d’oxygène pendant 90 secondes et réoxygénez-les pendant trois minutes. Ensuite, placez les souris dans un environnement de quatre degrés Celsius pendant 15 minutes et transférez-les dans un incubateur.Observez attentivement toutes les souris, pesez-les tous les jours, enregistrez la survie des souris pendant la période d’induction et notez si leurs selles sont sanglantes et collantes. En tenant la sonde gastrique dans la main droite, fixez la tête de la souris avec l’index sur la tête de la souris doucement enfoncée vers l’arrière et vers le bas. Insérez le tube gastrique du coin gauche de la bouche et déplacez-le lentement de deux à trois centimètres vers le centre de la bouche.Poussez 40 à 50 microlitres de formule ou 20 à 30 microlitres de LPS dans le tube digestif. Si la souris a un fort réflexe de vomissement et que la sonde gastrique pénètre dans la trachée, retirez-la doucement et laissez la souris se reposer avant de réessayer de gavage. Immergez le tissu frais de l’illum de souris dans 10% de formol, incorporez les tissus dans de la paraffine et coupez-les en tranches de quatre micromètres.Pour déparaffiniser les sections, mettez-les dans du xylène. Faire tremper pendant cinq minutes avec succès dans de l’éthanol absolu, de l’éthanol à 95 %, de l’éthanol à 80 %, de l’éthanol à 70 % et de l’eau distillée. Ensuite, colorez les sections avec une solution d’hématoxyline pendant cinq minutes et différenciez-les en acide chlorhydrique à 1% et en alcool à 70% pendant cinq secondes.Enfin, colorez-les avec une solution d’éosine pendant une minute et examinez l’histopathologie du tissu intestinal à un grossissement de 40 fois. Les photomicrographies du score de pathologie intestinale de zéro à quatre ont montré une muqueuse intacte et normale, une séparation sous-muqueuse et lamina propria légère, une séparation sous-muqueuse et lamina propria modérée, une séparation sous-muqueuse et lamina propria sévère et une disparition des villosités intestinales avec nécrose intestinale. Le score de pathologie intestinale était significativement plus élevé dans le groupe NEC que chez le groupe témoin avec une valeur P inférieure à 0,001.Les selles ont été notées de zéro avec des granulés bien formés à trois avec des selles liquides. Au jour 10, les scores de selles des groupes NEC étaient significativement plus élevés dans le groupe NEC avec une valeur P inférieure à 0,001. Le cinquième jour, les deux groupes n’ont montré aucune différence significative dans la taille du corps.Cependant, au jour 10, les souris du groupe NEC étaient significativement plus minces et plus petites de la tête à la queue que les souris du groupe témoin. Le poids des souris du groupe NEC a augmenté lentement et le taux de survie a progressivement diminué au cours des cinq jours d’établissement du modèle. La zone iléocécale réséquée du tissu intestinal chez les patients NEC a montré une nécrose du tissu de la muqueuse intestinale.Dans cette étude, les souris du groupe NEC ont également développé une hémorragie iléocécale et une nécrose. Lorsque vous gavagingz la souris, assurez-vous que la souris n’a pas de mal à éviter d’effectuer l’insertion de la sonde gastrique. Gavage les souris avec 20 à 30 microlitres de LPS et les nourrir avec 40 à 50 microlitres de formule le cinquième jour.À partir du cinquième jour, placez-les dans un dispositif d’hypoxie à 5% d’oxygène pendant 90 secondes et réoxygénez-les pendant trois minutes. Ce modèle pourrait être utile pour la recherche sur la maladie NEC sur les cellules T et pourrait aider à étudier les réponses des cellules Th2 dans neC.

a-neonatal-balbc-mouse-model-of-necrotizing-enterocolitis

Research

Recherche

JoVE Journal

Medicine

Médecine

Source : Seman, B. G., et al. Un modèle d’imagerie néonatale de septicémie bactérienne à Gram négatif. J. Vis. Exp. (2020)La vidéo présente un modèle murin néonatal pour étudier l’infection systémique à l’aide de bactéries bioluminescentes encapsulées. Les nouveau-nés sont injectés avec des suspensions bactériennes à forte ou faible dose et sont renvoyés à leur mère pour des soins postnataux. Les bactéries encapsulées échappent à la détection immunitaire précoce, se propagent systémiquement et...

Modéliser l’infection chez les souris néonatales à l’aide de bactéries bioluminescentes encapsulées

Cette vidéo démontre le développement de la maladie d’entérocolite nécrosante dans un modèle d’entéroïde néonatal d’origine humaine induit par un traitement par lipopolysaccharides. Ce modèle permet d’étudier la physiopathologie intestinale.

Induction de l’entérocolite nécrosante dans un modèle d’entérocolite épithéliale humaine

Ici, un procédé est décrit pour la mise en place d'une infection systémique chez le rat nouveau-né avec des cultures d'Escherichia coli K1. Cette procédure non invasive permettant la colonisation du tractus gastro-intestinal, de la translocation de l'agent pathogène dans la circulation systémique, et l'invasion du système nerveux central chez le plexus choroïde.

Modèle non-invasive de neuropathogènes Escherichia coli Maladies infectieuses chez le rat nouveau-né

Cet article décrit une méthode permettant de générer une lésion par compression de la moelle épinière (LME) reproductible chez la souris néonatale. Le modèle fournit une plate-forme avantageuse pour étudier les mécanismes de plasticité adaptative qui sous-tendent la récupération fonctionnelle spontanée.

Un nouveau-né de la moelle épinière de souris Compression Modèle de lésion

Ce protocole prévoit les mesures nécessaires pour établir et évaluer les infections néonatales chez les souris âgées de 7 jours.

Un modèle de souris contrôlée pour infection polymicrobienne néonatale

Nous avons développé un modèle de chorioamnionite pour simuler l’exposition foetale à l’inflammation maternelle (FEMI) sans complications des organismes vivants pour examiner les effets de FEMI sur le développement du tractus intestinal de la progéniture. Ceci permet l’étude des causes mécanistes pour le développement des dommages intestinaux suivant chorioamnionitis.

Un modèle murin d’exposition foetale à l’inflammation maternelle pour étudier les effets de la chorioamnionite aiguë sur le développement intestinal nouveau-né

L’infection des souris néonatales avec E. coli bioluminescent O1:K1:H7 a comme conséquence une infection septique avec l’inflammation pulmonaire significative et la pathologie pulmonaire. Ici, nous décrivons des procédures pour modéliser et étudier davantage la septicémie néonatale utilisant la formation image intravitale longitudinale en parallèle avec l’énumération des charges bactériennes systémiques, du profilage inflammatoire, et de l’histopathologie de poumon.

Un modèle néonatal d’imagerie de la septicémie bactérienne gramnégative

Ce protocole décrit un modèle in vitro d’entérocolite nécrosante (NEC), qui peut être utilisé pour des études mécanistiques de la pathogenèse de la maladie. Il est doté d’une puce microfluidique ensemencée d’entéroïdes intestinaux dérivés de l’intestin néonatal humain, de cellules endothéliales et du microbiome intestinal d’un nouveau-né atteint d’une NEC sévère.

Modèle microfluidique d’entérocolite nécrosante incorporant des entéroïdes intestinaux néonatals humains et un microbiome dysbiotique

La naissance prématurée (accouchement &lt; 37 semaines) est un problème de santé mondial urgent, avec des options de prévention et de traitement sous-optimales. Nous présentons un modèle murin d’accouchement prématuré induit par une infection bactérienne vaginale ascendante et décrivons comment analyser la morbidité et la mortalité néonatales qui en résultent.

Modélisation de l’infection vaginale ascendante, de l’accouchement prématuré et de la morbidité néonatale chez la souris

Ce protocole décrit un modèle murin néonatal d’entérocolite nécrosante (ECN) et l’isolement ultérieur des cellules immunitaires de la lamina propria de l’intestin grêle murin néonatal.

Un modèle murin néonatal d’entérocolite nécrosante et d’isolement de la lamina propria pour le profilage des cellules immunitaires

Découvrez comment établir un modèle d'entérocolite nécrosante chez des souris BALB/c néonatales. Cette méthode permet d'étudier les réponses des cellules T et les mécanismes immunitaires impliqués dans cette maladie grave des nouveau-nés prématurés.

Un modèle murin BALB/c néonatal d’entérocolite nécrosante

Explorer plus de vidéos