Maintenir les cultures de laboratoire de Gryllus bimaculatus, un modèle orthoptère polyvalent pour l’agriculture des insectes et la physiologie des invertébrés

Ces techniques décrivent des méthodes pratiques et éprouvées d’élevage de Gryllus bimaculatus, une mini-espèce de bétail clé élevée pour l’alimentation animale et humaine et un organisme modèle alternatif de plus en plus important. Ces méthodes de laboratoire pour la culture de Gryllus bimaculatus sont dérivées de techniques courantes dans l’industrie nord-américaine de l’élevage de grillons et représentent un fac-similé à l’échelle du laboratoire des opérations de culture de grillons. Pour commencer, tare un récipient propre sur une balance et peser une masse de coco sèche de la taille d’un poing humain.

Ensuite, placez la fibre de coco dans un récipient propre et scellable, qui peut accueillir une expansion jusqu’à six fois le volume d’origine. Avec des mains propres, séparez doucement les touffes de fibre de coco de la pièce retirée du plus grand bloc. Ensuite, à l’aide d’un cylindre gradué de 250 millilitres, mesurez le volume correct d’eau désionisée pour obtenir un rapport de cinq pour un en masse de cinq parties d’eau pour une partie de fibre de coco sèche, et ajoutez l’eau désionisée mesurée lentement, hydratant uniformément toutes les particules de fibre de coco.

Ensuite, macérez manuellement les touffes pour assurer une hydratation uniforme et remettez à la tare le récipient dans lequel la fibre de coco a été pesée précédemment. Pesez 75 grammes de fibre de coco mouillée et transférez-la dans une boîte de Petri de 100 millimètres sur 15 millimètres à l’aide d’une cuillère en plastique propre pour vous assurer que la fibre de coco est uniformément répartie au fond du plat et qu’il n’y a pas de touffes. Ensuite, étiquetez le côté de la boîte de Pétri avec du ruban adhésif de laboratoire avec une étiquette indiquant la colonie natale et la date de l’événement de collecte d’œufs.

Mesurez 45 millilitres supplémentaires d’eau désionisée dans un cylindre gradué et ajoutez de l’eau uniformément sur la surface de la fibre de coco emballée dans la boîte de Pétri pour assurer une hydratation uniforme. Une fois la boîte de Pétri emballée, scellez la fibre de coco mouillée restante dans un récipient hermétique pour le stockage à moins 20 degrés Celsius. Placez le substrat de ponte hydraté dans des cages contenant les stocks parentaux de grillons souhaités aussi loin que possible de l’aliment et documentez la date et l’heure.

Ensuite, placez un petit récipient à ordures autoclavable sur la surface de travail. Ensuite, placez une cage en plastique propre et vide de 29,3 litres sur le banc à côté de la poubelle. Placez une autre cage de 29,3 litres contenant les stocks de grillons parents et le substrat de ponte du côté opposé du récipient à ordures de la cage vide.

Après 24 heures, retirez le substrat de ponte de la cage de grillon parente et placez-le sur un récipient à déchets autoclavable. Inspectez le sommet du substrat de ponte à la recherche de particules de frass ou d’aliments que les grillons pourraient avoir frappés sur la surface de la fibre de coco. Ensuite, retirez les contaminants de coco dans le récipient à déchets avec une cuillère à scoopula ou en plastique propre et placez la cuillère en plastique dans le récipient à déchets.

Ensuite, placez le substrat de ponte nettoyé dans la cage propre de 29,3 litres. Ensuite, placez la cage dans un incubateur réglé à 27 degrés Celsius à 60% d’humidité relative sur une photopériode sombre de 12 heures et 12 heures de lumière. Remettez la cage contenant le reproducteur à l’emplacement d’origine et dégagez tous les éléments de la surface de travail.

Ensuite, placez le récipient à déchets dans un congélateur dans l’installation dédié à l’entreposage des articles potentiellement contaminés par des œufs de grillon. Ensuite, désinfectez la surface de travail avec une solution d’eau de Javel à 10% et laissez-la reposer pendant 60 secondes. Essuyez la surface de travail avec une serviette en papier propre.

Après avoir ouvert le congélateur, jetez l’essuie-tout dans le récipient à déchets. Sélectionnez deux cartons d’œufs commerciaux inutilisés de 30,8 centimètres sur 30,8 centimètres. Et avec un couteau utilitaire ou des cisailles fortes, coupez-les en six bandes distinctes de 10,1 centimètres de large de taille égale.

Ensuite, brossez les bords coupés avec les mains pour enlever les particules de carton pendantes. Ensuite, placez les six morceaux de carton individuels de 10,1 centimètres sur 30,8 centimètres verticalement dans le fond de la cage, l’axe le plus long du carton couvrant l’axe horizontal plus étroit d’une cage de 29,3 litres. Placez un septième morceau de carton à plat sur le dessus des six morceaux verticaux.

Après avoir sélectionné trois morceaux d’essuie-tout brut et brun d’environ 25 centimètres sur 25 centimètres, pliez chacun en deux. Ensuite, placez-en deux de manière à recouvrir le haut du côté proximal de la structure du carton et placez-en un sur la pile de carton du côté distal. Au jour 11 après la ponte, déplacez le substrat de la ponte dans le coin droit proximal de la cage.

Lorsqu’une trappe est observée, vaporisez les serviettes en papier placées sur le dessus des cartons, jusqu’à ce qu’ils soient mouillés, mais sans perdre activement de l’eau. Ensuite, essuyez soigneusement les deux côtés d’un couvercle de Petri de 100 millimètres avec 70% d’éthanol et laissez-le sécher. Ensuite, versez 50 grammes de l’aliment dans un mélangeur à portion unique de 60 watts et laissez-les à 10 000 tr / min pendant une minute.

Après avoir mesuré un gramme de l’aliment, secouez-le sur le couvercle de la boîte de Pétri dans la cage. À l’aide de l’extrémité propre d’une cuillère ou d’une scoopula, étalez la nourriture aussi uniformément que possible sur le fond du plat. Ensuite, remplacez l’aliment tous les deux jours.

Jetez l’ancien aliment dans le conteneur à déchets autoclavable. Surveillez la croissance de moisissures sur les aliments. Et si l’aliment commence à apparaître blanc ou verdâtre, jetez la boîte de Petri et nourrissez-le immédiatement.

14 jours après la ponte, utilisez un pinceau de 2,54 centimètres pour enlever les grillons accrochés au substrat de fibre de coco natale en brossant tous les grillons de la surface de la fibre de coco et des côtés de la boîte de Pétri dans la cage. Ensuite, placez le substrat de ponte retiré dans le récipient à déchets autoclavable et conservez-le au congélateur jusqu’à l’autoclavage. Ensuite, remplacez le substrat natal par un plat de fibre de coco fraîche pour l’hydratation.

À l’aide d’une bouteille de lavage à l’eau désionisée, ajoutez de l’eau jusqu’à ce que la surface de la fibre de coco brille, mais ne s’accumule pas. Les grillons ont été stockés à partir d’une population d’une masse moyenne de 21 milligrammes. À la fin de l’expérience, la masse moyenne de tous les grillons juvéniles et adultes combinés était de 0,724 gramme.

À l’âge de 65 jours, à la fin de l’expérience, 30 hommes adultes étaient présents et la masse moyenne était de 0,721 gramme, tandis que pour les 58 femmes adultes, la masse moyenne était de 0,841 gramme. La survie entre l’ensemencement et la récolte était de 89 % et était mesurée chaque semaine par le nombre total de tous les grillons individuels dans toutes les cages. Au jour 65, environ 68% de tous les grillons avaient atteint l’étoile adulte.

Évitez la formation de gouttelettes d’eau sur le fond de l’enceinte lors de l’arrosage ou de la brumisation. Placer une serviette en papier sur un refuge permet un gradient d’humidité et absorbe les gouttelettes d’eau provenant de la brumisation. Cette procédure sert de modèle aux chercheurs de nombreux domaines des sciences de la vie pour élever Gryllus bimaculatus en tant qu’organisme modèle.

À ce jour, peu de protocoles formels pour l’élevage de Gryllus bimaculatus ou de tout autre organisme modèle paurométabolous ont été publiés. La codification et la normalisation des méthodes d’élevage des insectes utilisées dans l’élevage d’insectes permettront de mieux comparer les résultats entre les groupes de recherche.