Mesures terminales du réflexe H chez la souris

Le réflexe H permet une validation électrophysiologique de l’intégrité des circuits neurologiques. Nous présentons un protocole terminal pour quantifier le réflexe H directement au niveau des nerfs de la patte antérieure chez la souris. Contrairement aux enregistrements transcutanés conventionnels plutôt non nerveux spécifiques, les résultats sont moins variables entre les souris et les jours de mesure.

Semblable aux enregistrements réflexes H chez les patients, la quantification précise permet une caractérisation électrophysiologique dans des modèles de maladies, par exemple une lésion de la moelle épinière et un accident vasculaire cérébral. Le protocole exige de solides compétences expérimentales dans le travail avec l’équipement chirurgical chez la souris.

Si vous ne savez pas comment séparer les nerfs du tissu conjonctif et des vaisseaux sanguins, pratiquez d’abord. La démonstration de la procédure sera faite par Frédérique Wieters, une doctorante de mon laboratoire. Pour commencer, placez la souris C57 noire/6J anesthésiée pour adultes âgée de 8 à 16 semaines sur le coussin chauffant couvert et attendez que la souris soit calme, que la respiration soit stable et que les réflexes soient absents.

Tournez la souris sur le dos. Ensuite, fixez les pattes antérieures avec du ruban adhésif. Positionnez le ruban de manière à ce que les électrodes de mesure soient facilement insérées dans les pattes antérieures.

Pour mesurer la température d’une souris, insérez une sonde rectale et fixez-la avec du ruban adhésif. Appliquez une pommade pour les yeux pour empêcher les yeux de se dessécher. Retirez soigneusement la fourrure avec une paire de ciseaux fins et arrondis tout en soulevant la peau avec une pince à épiler.

Ensuite, faites une incision d’un centimètre dans la peau le long de l’axe ventropostérieur de la patte antérieure avec une paire de ciseaux fins et arrondis. Retirez soigneusement le tissu conjonctif et exposez le muscle et le nerf inférieurs. Ensuite, retirez le muscle pectoral profundus exposé à l’aide d’une pince pour évaluer le nerf médian.

Enlevez de petites quantités de sang et de liquide tissulaire avec du papier de soie souple. Ensuite, coupez soigneusement le sein ou le muscle axillaire de haut en bas pour exposer le faisceau nerveux. Libérez le faisceau nerveux du tissu conjonctif et musculaire sur une longueur d’environ 1,5 centimètre.

Séparez soigneusement le nerf ulnaire et médian de la patte avant à l’aide d’une pipette en verre courbée. Le nerf supérieur est le nerf ulnaire et le nerf inférieur est le nerf médian. Disposez les électrodes du crochet du stimulateur en parallèle à une distance de 0,5 à un millimètre et utilisez un micromanipulateur pour positionner le double crochet près du nerf.

Utilisez le crochet en verre pour soulever le nerf ulnaire sur les électrodes du crochet de stimulation. Ensuite, retirez l’électrode avec le nerf et séparez-la des autres nerfs. Placez les électrodes le long de l’axe long de la patte pour réduire la diaphonie entre les muscles.

Sécher superficiellement les crochets d’électrode fixés au nerf et appliquer de la vaseline à l’aide d’une seringue pour fournir une isolation électrique du tissu adjacent. Pour mesurer le réflexe H, positionnez les électrodes d’électromyographie par voie intramusculaire dans la patte antérieure. Ensuite, positionnez l’électrode de référence par voie sous-cutanée dans le membre postérieur, maintenu par une pince crocodile miniature.

Lorsque le stimulateur est allumé, observez une stimulation réussie sous forme de minuscules secousses de la patte antérieure. Le courant de stimulation minimum pour provoquer l’onde M et de minuscules secousses visibles dans la patte avant se situe entre 10 et 50 microampères. Effectuez la stimulation nerveuse 15 fois avec des impulsions de 0,2 millisecondes chacune.

Avec des pauses de deux minutes entre les séries de stimuli, la fréquence est augmentée de 0,1, 0,5, 1,0, 2,0 à 5 hertz. Une illustration de l’enregistrement mis en place dans les voies pour mesurer le réflexe de Hoffman et la réponse musculaire est montrée ici. Le rapport entre l’amplitude des ondes H et M a été évalué.

Le stimulus et l’artefact de stimulation respectif ont été réglés à zéro milliseconde, suivis de l’onde M directe et du pic plus petit représentant l’onde H. L’onde M se produit environ deux millisecondes après la stimulation, et l’onde H après six à huit millisecondes en raison du temps de transit plus long à travers la moelle épinière. Outre la séparation des nerfs, l’application de vaseline sur l’électrode et entre les deux crochets est critique.

Il s’agit d’une expérience terminale. Dans notre laboratoire, cette technique a fourni une nouvelle référence de référence aux enregistrements transcutanés H-reflex.