À Ovo Injection intravasculaire dans des embryons de poulet

Bonjour, je suis Kai Jin de l’Université de Yangzhou. Au nom de notre groupe de recherche, je vais présenter un outil puissant de l’embryon de poulet dans la recherche sur le développement. L’embryon de poulet est un modèle de développement classique qui a été utilisé pour étudier le développement et la différenciation, en fait, les mesures étrangères du laboratoire en embryons de poulet sont un outil précieux pour la biologie du développement, comme la transfection de gènes, la reproduction transgénique et la préparation transmurale gonadique.

Dans notre laboratoire, nous avons établi les méthodes d’injection de type mu, mais pour de nombreux chercheurs, les détails de l’injection ne sont pas clairs et difficiles à aligner. Donc, dans cette vidéo, nous allons montrer les détails de l’injection vasculaire au stade précoce du développement de l’embryon de poulet dans ovo. N’hésitez pas à nous contacter si cela vous intéresse.

Ici, nous montrons les détails du protocole. Collecte et préparation des ovules fécondés. Tout d’abord, contrairement aux mammifères, le poulet a des millions de follicules dans un seul ovaire, mais seuls quelques-uns de ces follicules sont assez matures pour ovuler.

Chaque follicule contient un ovocyte ou une cellule germinale. Dès que le follicule mûrit et libère son jaune, il est incorporé dans l’entonnoir de la trompe de Fallope. Lorsque le follicule pénètre dans l’abdomen jugulaire de l’oviducte, le sperme se lie à l’œuf dans le corps de la poule et le calcium dans le corps de la poule forme une coquille qui enveloppe l’œuf fécondé formant un œuf à coquille molle dans le corps.

Les coquilles de calcium s’épaississent progressivement jusqu’à ce que l’œuf soit produit. Recueillez l’œuf fécondé, appelé académiquement œufs embryonnaires et placez-les soigneusement sur un support dans un incubateur à 37,8 degrés Celsius et 60% d’humidité. Les embryons sont incubés dans des conditions appropriées.

Après deux jours d’incubation, de petits points rouges pulsés appelés cœurs primordiaux apparaissent. Ce processus est appelé battement de cerise. Vers 2,5 jours, les vaisseaux sanguins sont visibles et les segments du cœur et du corps se sont formés.

Préparation d’aiguilles et de plasmides. Nous utilisons des capillaires en verre comme aiguilles. Avant l’injection, préparez des capillaires en verre d’un diamètre extérieur d’un millimètre et d’un diamètre intérieur de 0,6 millimètre.

Les matériaux exogènes sont généralement des plasmides, des lentivirus emballés et des cellules germinales primordiales, ou PGC. Dans cette vidéo, nous utilisons le bleu trypan pour montrer la trace des matériaux injectés. Fenêtrage. Avant d’exposer les embryons, nous devons stériliser les embryons pour éviter la contamination germinale.

Cela se fait en essuyant doucement la surface des embryons avec une boule de coton à 75% d’alcool sur le site de l’ouverture de l’œuf. Après la désinfection, tapotez doucement l’extrémité émoussée de la coquille d’œuf avec une pince et clipsez soigneusement un trou de 0,5 centimètre sur 0,5 centimètre à la surface de la coquille de l’œuf avec la pince pour exposer l’embryon. Injection intravasculaire in-ovo.

Regardez la vue sous le microscope, ajustez la mise au point du microscope pour d’abord localiser l’embryon, puis trouvez les vaisseaux sanguins de l’embryon de poulet prêts à être injectés. Dirigez l’aiguille avec la substance exogène vers le vaisseau sanguin, en notant que l’aiguille est parallèle au vaisseau sanguin injecté. Insérez doucement l’aiguille dans le vaisseau sanguin, puis allumez la pompe à air.

À ce stade, la substance étrangère pénètre dans l’artère et, avec le battement du cœur, circule vers l’embryon par l’artère, puis vers la veine. Il existe deux types d’injections vasculaires. La première est une injection de tête où la substance étrangère est injectée à partir d’une veine dans la tête de l’embryon et retourne dans le cœur.

L’autre est une injection aortique dorsale où la substance étrangère circule vers l’embryon en battant le cœur. Avec le battement du cœur embryonnaire et la circulation du sang, nous pouvons clairement voir que la matière étrangère est reçue par les capillaires à l’extrémité de l’artère, dans la veine, puis retourne à l’embryon de la veine, indiquant que la matière étrangère injectée est effectivement livrée à chaque partie de l’embryon. Après l’injection, retirez l’œuf du stéréomicroscope, coupez un morceau de ruban médical de trois centimètres de long avec de petits ciseaux et attachez le ruban à l’ouverture.

Grattez doucement le ruban adhésif avec les ciseaux pour extraire les bulles d’air, puis coupez un autre morceau de ruban adhésif pour sceller l’ouverture en croix. Après avoir scellé l’ouverture, les embryons injectés sont soigneusement replacés dans l’incubateur. Ici, nous montrons les images représentatives d’embryons de poulet après l’injection.

La première image montre le résultat de l’injection de plasmide de lentivirus. La fluorescence verte sous un microscope à fluorescence stéréoscopique indique l’expression réussie du plasmide injecté dans les embryons. Cela suggère la faisabilité de l’injection intravasculaire de plasmides dans des embryons de poulet.

La deuxième image montre les résultats de l’injection de PGC. Les PGC ont été étiquetés avec rfp. Sur cette photo, nous avons pu voir les PGC injectés qui sont les points rouges ici, situés dans la gonade des destinataires.

Cela indique que les PGC donneurs ont pu entrer et coloniser efficacement la gonade des receveurs. En conclusion, ce protocole présente le processus d’injection in-ovo-intravasculaire de matériaux exogènes, de plasmides ou de PGC dans des embryons de poulet. La méthode montrée ici est facile à suivre et à apprendre et vaut l’application dans de nombreux domaines.

C’est tout ce que j’aimerais partager avec vous. J’espère que cette approche facilitera votre travail en tant qu’outil de recherche puissant dans la mise en place d’embryons de poulet et la biologie du développement. Merci d’avoir regardé cette vidéo et bonne chance dans vos recherches.