Name: Inactivation d’agents pathogènes par photolyse en lumière visible de la riboflavine-5′-phosphate (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-04-06T13:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 25 s
Description: Découvrez la photolyse du flavine mononucléotide par lumière violette visible pour inactiver les bactéries pathogènes comme Staphylococcus aureus et E.coli. Cette méthode sûre et économique s'applique en thérapie cutanée et en industrie alimentaire.

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Les auteurs sont reconnaissants au Dr Tak-Wah Wong et à M. Zong-Jhe Hsieh pour leur soutien dans les expériences.

1. Configuration du système de photolyse
<ol><li>Monter six diodes électroluminescentes (DEL) (DC 12 V) à l’intérieur d’un gobelet en plastique opaque (8 cm x 7 cm) comme le montre la figure 1 pour établir un système de photolyse31.</li>
	<li>Ajouter des réactifs (voir ci-dessous) dans les tubes à essai en verre (13 mm de diamètre et 100 mm de hauteur) et fixer les tubes en haut de la coupelle comme indiqué à la figure 1. Placer l’installation expérimentale dans une pièce à température constante de 25 ± 3 °C.</li>
	<li>Surveiller et enregistrer la température des unités d’essai tout au long des réactions photolytiques à l’aide d’un thermomètre infrarouge. REMARQUE : La figure 2 montre les spectres d’émission pour les lumières bleue, verte, rouge et violette, tels qu’enregistrés à l’aide d’un spectromètre optique UV-Vis étalonné. Les longueurs d’onde correspondant à l’absorbance maximale pour les lumières LED bleues, vertes, rouges et violettes utilisées dans l’étude sont respectivement de 465, 529, 632 et 405 nm. Les puces LED peuvent chauffer l’appareil pendant les expériences d’irradiation. L’ensemble du système de photoréaction de chaque expérience a donc été placé dans une pièce où la température a été maintenue constante à 25 ± 3 °C.</li>
</ol>2. L’effet de la longueur d’onde lumineuse sur la photolyse de FMN (Figure 3)
<ol><li>Préparer une solution FMN 0,1 mM dans un tampon phosphate de potassium (PB) de 100 mM (pH 7,8). Exposer les échantillons FMN (3 mL chacun) à une lumière bleue, verte, rouge ou violette à une intensité de 10 W/m2 pendant 5 min. Conserver 3 mL de solution FMN dans l’obscurité comme témoin.</li>
	<li>Enregistrer l’absorbance des échantillons FMN irradiés dans la plage de 250 à 750 nm à l’aide d’un spectrophotomètre UV/visible.</li>
</ol>3. Méthode de réduction du tétrazolium bleu nitro (NBT) à détecter <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63531/63531eq01.jpg" style="font-size: 14px; margin: auto;"> (figure 4).
NOTE: La méthode de réduction NBT utilisée ici a été légèrement modifiée par rapport au test de photoréaction de la riboflavine. La méthode de réduction NBT est utilisée pour évaluer le niveau de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63531/63531eq01.jpg" style="margin: auto;"> généré par la photolyse FMN. Le FMN photochimiquement excité est d’abord réduit par la L-méthionine en une semiquinone, qui donne ensuite un électron à l’oxygène donnant naissance à <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63531/63531eq01.jpg" style="margin: auto;">31. Le tel que généré <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63531/63531eq01.jpg" style="margin: auto;"> réduit NBT en formazan, qui a une absorbance caractéristique à 560 nm32.
<ol><li>Ajouter 109,3 mg de L-méthionine à 73,3 mL de PB (100 mM; pH 7,8). Vortex la solution pour dissoudre la L-méthionine.</li>
	<li>Une fois la L-méthionine complètement dissoute, ajouter 10 mg de poudre NBT et 1,53 mL de 0,117 mM FMN à la solution. Pour chaque 1 mL de la solution réactionnelle (c.-à-d. un mélange de FMN, de L-méthionine et de NBT) appliqué, les concentrations finales de FMN, de méthionine et de NBT sont de 2,4 x 10-6 M, 1,0 x 10-2 M et 1,6 x 10-4 M, respectivement.</li>
	<li>Exposer la solution réactionnelle (1 mL) à une irradiation à la lumière LED bleue ou violette à 10 W/m2 pendant 1 à 5 min.</li>
	<li>Détecter les <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63531/63531eq01.jpg" style="margin: auto;"> espèces (à partir de l’absorbance à 560 nm) produites par la réaction photochimique, qui réduit la NBT et produit du formazan.</li>
</ol>4. Viabilité de S. aureus après photolyse FMN (figure 5)
<ol><li>Transmettez une colonie de S. aureus (BCRC 10451) d’une plaque cultivée à 10 mL de bouillon de lysogénie prélevé dans un tube à essai à bouchon vissé de 15 mL. Culture dans un shaker à 37 °C pendant 16 h.</li>
	<li>Transférer 0,5 mL de la culture dans un tube à centrifuger de 1,5 mL. Ajouter de l’eau stérilisée dans le tube à centrifuger pour diluer la culture à une densité optique de 0,5 à 600 nm (OD600) (~6 x 107 UFC/mL).</li>
	<li>Transvaser 0,5 mL de la culture dans un tube à centrifuger de 1,5 mL, centrifuger à 14 000 x g pendant 10 min et décanter le surnageant pour obtenir une pastille cellulaire.</li>
	<li>Ajouter 1 mL de solution tamponnée FMN (30, 60 et 120 μM FMN en PB) aux pastilles cellulaires obtenues comme à l’étape 4.3, et vortex. Pour le contrôle irradié, ajouter 1 mL de PB seul.</li>
	<li>Transférer 1 mL chacune de solutions cellulaires bactériennes viables contenant 30 μM de FMN et de PB seuls dans des tubes de verre et les irradier avec une lumière violette à 10 W/m2 pendant 30 min.</li>
	<li>Transvaser 1 mL chacune de solutions cellulaires bactériennes viables contenant 30, 60 et 120 μM de FMN et de PB seuls dans des tubes de verre et les irradier avec de la lumière bleue à 20 W/m2 pendant 120 min. Mettre en place un autre tube de verre avec 1 mL de solution cellulaire bactérienne viable contenant 120 μM FMN et l’irradier avec de la lumière bleue à 20 W/m2 pendant 60 min.</li>
	<li>Installer les tubes à essai comme décrit aux étapes 4.5 et 4.6 et les recouvrir de feuilles d’aluminium épaisses. Ces tubes servent de commandes sombres.</li>
	<li>Conserver la chambre d’irradiation (ainsi que les témoins sombres) dans une chambre froide à 9 ± 1 °C pendant la période d’irradiation de 30 à 120 minutes. REMARQUE: La chaleur dégagée par les lumières LED ne peut pas être ignorée car les puces LED placées à l’intérieur de la tasse peuvent chauffer le système de photoréaction pendant les expériences d’irradiation. Les expériences ont donc été menées dans une chambre froide maintenue à 9 ± 1 °C.</li>
	<li>Après irradiation, transférer 0,2 mL de chacune des solutions réactionnelles sur une plaque de gélose Luria (LA). Étaler les bactéries sur la plaque à l’aide d’une tige de verre en forme de L et incuber pendant une nuit à 37 °C.</li>
	<li>Calculer la numération sur plaque viable et les taux d’inactivation de S. aureus après une croissance nocturne. NOTE: Le taux d’inactivation de S. aureus est calculé comme le pourcentage de réduction, qui est égal à [1 -I / D] ×100%, où I et D désignent, respectivement, le nombre d’UFC dans l’échantillon irradié et le témoin foncé. Le pourcentage de réduction est défini comme une valeur négative du taux d’inactivation.</li>
</ol>5. Détection de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63531/63531eq01.jpg" style="font-size: 14px; margin: auto;">chez S. aureus (figure 6) 
<ol><li>Préparez les échantillons de S. aureus comme décrit à l’étape 4.</li>
	<li>Diluer la densité bactérienne des échantillons avec de l’eau stérilisée à une densité optique de 0,5 à 600 nm (DO600, ~6 x 106 UFC/mL). Transférer 0,5 mL de la culture dans un tube à centrifuger de 1,5 mL. Centrifuger à 14 000 x g pendant 10 min et décanter le surnageant pour obtenir une pastille de cellule.</li>
	<li>Ajouter 0,1093 g de L-méthionine, 0,1 g de NBT et 25 mL de FMN (400, 240 ou 120 μM) à 75 mL de PB. Pour chaque 1 mL du réactif appliqué, les concentrations finales de FMN, de méthionine et de NBT sont de 100 (60 ou 30) x 10-6 M, 7,3 x 10-3 M et 1,2 x 10-3 M, respectivement.</li>
	<li>Ajouter 1 mL de chaque solution réactive (c.-à-d. avec des concentrations variables de FMN) aux pastilles de cellules obtenues comme à l’étape 5.2. Irradier les solutions par lumière violette à 10 W/m2 pendant 10 min.</li>
	<li>Centrifuger le mélange à 14 000 x g pendant 10 min et décanter le surnageant. Remettez la pastille en suspension dans 1 mL de diméthylsulfoxyde (DMSO) pour extraire le NBT réduit. Détecter les espèces produites <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63531/63531eq01.jpg" style="margin: auto;"> à partir de l’absorbance à 560 nm.</li>
</ol>6. Analyse statistique
<ol><li>Exprimer les données sous forme de moyenne ±écart type (ET) de trois essais indépendants.</li>
	<li>Appliquer un test t homoscédastique à deux échantillons pour évaluer si deux mesures sont différentes. Les valeurs de p &lt; 0,05 sont considérées comme statistiquement significatives.</li>
</ol>

Les auteurs ne déclarent aucun conflit d’intérêts.

Un photosensibilisant augmente la réaction photochimique des composés chimiques pour générer des ROS. Les microorganismes pathogènes peuvent être inactivés par irradiation lumineuse en présence de photosensibilisants. Cette étude détermine l’aPDI de S. aureus due aux ROS générés par l’irradiation en lumière violette d’un photosensibilisateur exogène, FMN.
Comme le montre la figure 3, pour la FMN, l’absorbance à 444 nm est réduite de manière significative ...

La riboflavine-5′-phosphate (FMN) est formée par phosphorylation à la position riboflavine 5′ de la chaîne latérale ribityle et est requise par toutes les flavoprotéines pour que de nombreux processus cellulaires génèrent de l’énergie. Il joue également le rôle de vitamine pour certaines fonctions dans le corps humain1. La FMN est environ 200 fois plus soluble dans l’eau que la riboflavine2.
L’inactivation photodynamique antibactérienne (aPDI) des bactéries est un moyen efficace de contrôler la résistance aux bactéries 3,4 car elle ne dépend pas du mode de résistance bactérienne. Cliniquement, l’aPDI est utilisé pour traiter les infections des tissus mous afin de diminuer l’infection de la peau nosocomiale due aux bactéries multirésistantes 5,6,7,8,9. aPDI produit également la mort cellulaire en générant des espèces réactives de l’oxygène (ROS). Les ROS, tels que les radicaux superoxydes (), l’oxygène singulet, les radicaux hydroxyles (<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63531/63531eq01.jpg" style="margin: auto;">•OH) et les radicaux peroxyles, sont des radicaux libres ou des molécules qui contiennent de l’oxygène réactif 10,11,12 et sont normalement réactifs 13. Semblable aux dommages à l’ADN causés par les ROS, la peroxydation membranaire et la destruction des cellules endothéliales sont également des réactions biochimiques indésirables attribuées aux ROS dans les cellules12.
L’utilisation de l’aPDI pour les bactéries pathogènes implique une source de lumière visible ou UV pour inactiver les microorganismes en présence de composés chimiques, tels que le chlorure de méthylthioninium 14, le conjuguéPEI-c e6 15, la porphyrine 16, le dioxyde de titane 17, le bleu de toluidine O 18 et les nanoparticules d’oxyde de zinc 19. Le bleu de toluidine O et le bleu de méthylène sont des colorants phénothiazinium et le bleu de méthylène a des propriétés toxiques. Les nanoparticules d’oxyde de zinc et l’irradiation UV sont liées à des effets néfastes sur la santé et l’environnement. En tant que telle, l’exploitation d’un photosensibilisateur fiable, sécurisé et simple par photolyse sous irradiation visible mérite une étude plus approfondie.
Le micronutriment, la riboflavine ou FMN, n’est pas toxique et est effectivement utilisé pour la fabrication ou l’alimentation des aliments20. La FMN et la riboflavine sont très sensibles à l’irradiation lumineuse2. Sous UV 1,2,21,22,23 et irradiation en lumière bleue 10,24, ces deux composés atteignent un état excité. La riboflavine ou FMN activée qui est produite par photolyse est promue à son état triplet et les ROS sont générés simultanément 2,25. Kumar et coll. ont signalé que la riboflavine activée par la lumière UV provoque sélectivement des lésions accrues de la fraction guanine de l’ADN dans les microorganismes pathogènes26. Sous irradiation par la lumière UV, il est démontré que la riboflavine activée par photodynamique favorise la génération de 8-OH-dG, qui est un biomarqueur du stress oxydatif, dans l’ADN double brin27. Il est rapporté que S. aureus et E. coli sont désactivés par ROS pendant la riboflavine ou la photolyse FMN10,24,28. Une étude antérieure des auteurs a montré que les réactions photolytiques impliquant la riboflavine et la FMN réduisent le cristal violet, un colorant triarylméthane et un agent antibactérien qui génère <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63531/63531eq01.jpg" style="margin: auto;">et élimine la majeure partie de la capacité antimicrobienne du cristal28. Lorsque la flavine adénine dinucléotide ou FMN est irradiée par la lumière bleue, les ROS résultants produisent une apoptose dans les cellules HeLa pour leur empoisonnement in vitro29. En utilisant un traitement photochimique en présence de riboflavine, Cui et al. lymphocytes inactivés en inhibant leur prolifération et la production de cytokines30.
La photolyse de la riboflavine est utilisée pour l’inactivation de l’agent pathogène du sang par UV 10,24, mais les composants sanguins peuvent être altérés sous irradiation à la lumière UV30. Il est également rapporté que les plaquettes exposées aux UV améliorent progressivement la performance des marqueurs d’activation P-sélectine et LIMP-CD63 sur leurs membranes. La cytotoxicité des UV et de l’irradiation à haute intensité doit être étudiée et un photosensibilisateur simple et sûr lors d’une photoréaction FMN impliquant la lumière visible serait d’une grande utilité.
La lumière de longueurs d’onde plus courtes a plus d’énergie et est beaucoup plus susceptible de causer de graves dommages aux cellules. Cependant, en présence d’un photosensibilisant approprié, l’irradiation avec une lumière violette de faible intensité peut inhiber les micro-organismes pathogènes. La photosensibilisation et la génération de FMN lorsqu’ils sont irradiés avec de la lumière violette sont donc importantes à étudier, afin de déterminer la voie par laquelle les ROS de la photolyse FMN augmentent l’inactivation <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63531/63531eq01.jpg" style="margin: auto;"> des bactéries.
Le contrôle antimicrobien est un problème courant et la mise au point de nouveaux antibiotiques prend souvent des décennies. Après irradiation à la lumière violette, la photoinactivation intermédiée par la FMN peut annihiler les bactéries pathogènes environnementales. Cette étude présente un protocole antimicrobien efficace in vitro utilisant la lumière violette pour conduire la photolyse FMN et ainsi générer <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63531/63531eq01.jpg" style="margin: auto;"> pour une PDI. La viabilité microbienne de S. aureus est utilisée pour déterminer la faisabilité d’une IPa induite par la FMN.

<table><tbody><tr><td>Lumières LED bleues, vertes et rouges</td><td>Vita LED Technologies Co., Tainan, Taiwan</td><td></td><td>DC 12 V 5050</td></tr><tr><td>Dimethyl Sulfoxide</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td><td>190186</td><td></td></tr><tr><td>Thermomètre infrarouge</td><td>Raytek Co. Santa Cruz, CA</td><td>MT4</td><td></td></tr><tr><td>LB bouillon</td><td>Difco Co., NJ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>L-Methionine</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td><td>1.05707</td><td></td></tr><tr><td>NBT</td><td>Bio Basic, Inc. Markham, Ontario, Canada</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alimentation électrique</td><td>China tech Co., New Taipei City, Taïwan</td><td>YP30-3-2</td><td></td></tr><tr><td>Riboflavine 5&prime ;-phosphate</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td><td>R7774</td><td></td></tr><tr><td>RNase</td><td>New England BioLabs, Inc. Ipswich, MA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Compteur d’énergie solaire</td><td>Tenmars Electronics Co., Taipei, Taïwan</td><td>TM-207</td><td></td></tr><tr><td>Staphylococcus aureus subsp. aureus</td><td>Centre de collecte et de recherche sur les bioressources (BCRC), Hsinchu, Taïwan</td><td>10451</td><td></td></tr><tr><td>Spectromètre optique UV-Vis</td><td>Ocean Optics, Dunedin, FL</td><td>USB4000</td><td></td></tr><tr><td>Spectrophotomètre UV-Vis</td><td>Hitachi High-Tech Science Corporation, Tokyo, Japon</td><td>U-2900</td><td></td></tr><tr><td>Violet LED</td><td>Long-hui Electronic Co., LTD, Dongguan, Chine</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

inactivation d’agents pathogènes par photolyse en lumière visible de la riboflavine-5′-phosphate

Inactivation of Pathogens via Visible-Light Photolysis of Riboflavin-5&#8242;-Phosphate

Riboflavine-5'-phosphate (ou flavine mononucléotide; FMN) est sensible à la lumière visible. Divers composés, y compris les espèces réactives de l’oxygène (ROS), peuvent être générés par photolyse FMN lors de l’irradiation avec la lumière visible. Les ROS générés par la photolyse FMN sont nocifs pour les micro-organismes, y compris les bactéries pathogènes telles que Staphylococcus aureus (S. aureus). Cet article présente un protocole de désactivation de S. aureus, à titre d’exemple, par des réactions photochimiques impliquant du FMN sous irradiation en lumière visible. L’anion radical superoxyde () généré lors de la photolyse FMN est évalué par réduction du tétrazolium bleu nitro (<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63531/63531eq01v3.png" style="margin: auto;">NBT). La viabilité microbienne de S. aureus attribuée aux espèces réactives <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63531/63531eq01v3.png" style="margin: auto;"> a été utilisée pour déterminer l’efficacité du processus. Le taux d’inactivation bactérienne est proportionnel à la concentration de FMN. La lumière violette est plus efficace pour inactiver S. aureus que l’irradiation par lumière bleue, tandis que la lumière rouge ou verte ne conduit pas la photolyse FMN. Le présent article démontre que la photolyse FMN est une méthode simple et sûre pour les processus sanitaires.

Effet de la longueur d’onde lumineuse sur FMN Les spectres d’absorbance de 0,1 mM FMN irradiés à l’aide de LED bleues, vertes, rouges et violettes sont illustrés à la figure 3. Il y a deux pics pour FMN (372 nm et 444 nm) pour le contrôle de l’obscurité. La lumière verte et la lumière rouge n’ont aucun effet car les changements dans les spectres sont insignifiants. D’autre part, l’absorbance respective de FMN à 444 nm est réduite d’environ 19% et 34%, respectivement, aprè...

Ici, nous présentons un protocole pour inactiver les bactéries pathogènes avec des espèces réactives de l’oxygène produites lors de la photolyse de flavine mononucléotide (FMN) sous irradiation en lumière bleue et violette de faible intensité. La photolyse FMN s’est avérée être une méthode simple et sûre pour les processus sanitaires.

Inactivation d’agents pathogènes par photolyse en lumière visible de la riboflavine-5′-phosphate

Riboflavin-5&#39;-phosphate (or flavin mononucleotide; FMN) is sensitive to visible light. Various compounds, including reactive oxygen species (ROS), can ...

Ce protocole utilise l’irradiation en lumière violette visible pour induire la photolyse des flavines mononucléotidiques. Cela produit une grande quantité de radicaux libres, qui inhibent les bactéries pathogènes telles que Staphylococcus aureus et E. coli. Nous avons testé le mononucléotide flavine comme photosensibilisant approprié.Dans ce protocole, nous utilisons une lumière violette visible qui est sûre et ne nécessite pas d’équipement coûteux. Cette méthode peut être utilisée pour le traitement de la peau lésée ou des tissus sous-cutanés infectés en insérant une fibre optique pour l’éclairage. Il peut également être appliqué à la pratique de l’assainissement dans l’industrie alimentaire.Tang-Yu Chen, un étudiant diplômé de mon laboratoire, fera la démonstration de la procédure Pour commencer, montez six diodes électroluminescentes de 12 volts chacune à l’intérieur d’un gobelet en plastique opaque. Prenez un tube à essai en verre d’un diamètre de 13 millimètres et d’une hauteur de 100 millimètres et ajoutez les réactifs au tube. Fixez les tubes en haut de la tasse et placez cette installation à une température constante de 25 trois degrés Celsius.Surveiller et enregistrer la température des unités d’essai tout au long des réactions photolytiques à l’aide d’un thermomètre infrarouge. Ensuite, préparez une solution FMN de 0,1 millimolaire dans un tampon de phosphate de potassium de 100 millimolaires à pH 7,8. Exposez trois millilitres d’échantillons FMN à la lumière bleue, verte, rouge ou violette pendant cinq minutes.En parallèle, gardez trois millilitres de solution FMN dans l’obscurité comme contrôle. Placez l’échantillon dans un spectrophotomètre UV-visible et enregistrez l’absorbance des échantillons irradiés dans la plage de 250 à 750 nanomètres. Pour préparer la détection des radicaux superoxydes, ajoutez d’abord 109,3 milligrammes de L-méthionine à 73,3 millilitres de tampon phosphate 100 millimolaires à pH 7,8.Dans la solution, ajoutez 10 milligrammes de poudre NBT et 1,5 millilitre de FMN 0,117 millimolaire. Exposez un millilitre de la solution réactionnelle à la lumière LED bleue ou violette pendant une à cinq minutes. Enregistrer l’absorbance de 516 nanomètres pour détecter le formazan, qui est produit par la réaction photochimique de NBT.Inoculer une colonie de Staphylococcus aureus dans 10 millilitres de bouillon de lysogénie dans un tube à essai à bouchon vissé de 15 millilitres. Cultivez la culture à 37 degrés Celsius pendant 16 heures dans un shaker. Transférer 0,5 millilitre de la culture dans un tube à centrifuger de 1,5 millilitre.Diluer la culture à une densité optique de 0,5 à 600 nanomètres en ajoutant de l’eau stérilisée. Ensuite, transférez 0,5 millilitre de la culture dans un tube à centrifuger de 1,5 millilitre. Centrifuger à 14 000 g pendant 10 minutes et décanter le surnageant.Ajouter un millilitre de solution tamponnée FMN à la pastille cellulaire et au vortex. Pour le contrôle irradié, ajouter un millilitre de tampon phosphate. Transférer un millilitre de solution cellulaire bactérienne contenant 30 micromolaires de FMN et un tampon phosphate dans des tubes en verre.Placez-les pour un rayonnement sous lumière violette à 10 watts par mètre carré pendant 30 minutes. Ensuite, transférez un millilitre de solution cellulaire bactérienne contenant 30-60 et 120 micromolaires FMN et tampon phosphate dans des tubes en verre. Irradier avec de la lumière bleue pendant 120 minutes à 20 watts par mètre carré.De plus, irradiez un tube contenant un millilitre de FMN 120 micromolaires pendant 60 minutes. Après irradiation, ajouter 0,2 millilitre de la solution réactionnelle sur une plaque de gélose luria. Étaler la solution à l’aide d’une tige de verre en forme de L et incuber pendant la nuit à 37 degrés Celsius.Le lendemain, calculez la numération sur plaque viable et le taux d’inactivation de Staphylococcus aureus. Préparer les échantillons de staphylocoque doré comme décrit précédemment pour obtenir une pastille cellulaire. À 75 millilitres de tampon phosphate, ajoutez 0,1093 gramme de L-méthionine, 0,1 gramme de NBT et 25 millilitres de solution FMN.Ajouter un millilitre de chaque solution réactive avec des concentrations variables de FMN aux pastilles cellulaires et au vortex. Irradier les solutions sous lumière violette à 10 watts par mètre carré pendant 10 minutes. Centrifuger le mélange à 14 000 G pendant 10 minutes et décanter le surnageant.Remettez la pastille en suspension dans un millilitre de diméthylsulfoxyde pour extraire le NBT réduit. Enregistrez l’absorbance à 560 nanomètres. L’irradiation du FMN avec lumière verte et rouge n’a montré aucun effet sur les pics à 372 et 444 nanomètres par rapport au contrôle de l’obscurité, tandis que la réduction de l’absorbance du FMN à 444 nanomètres a été observée sous lumière bleue et violette, indiquant une photolyse accrue.La détection des radicaux superoxydes formés lors de la photolyse FMN sous lumière bleue ou violette a été effectuée à l’aide de la réduction NBT. L’effet photochimique du FMN dépendait du temps d’irradiation. La photolyse FMN par irradiation à la lumière bleue ou violette a entraîné une inactivation significative de Staphylococcus aureus.Une inactivation dose-dépendante a été observée pour l’irradiation en lumière bleue, avec une inactivation de 97 % pour le FMN 120 micromolaires. Sous lumière violette, un taux d’inactivation de 96% a été atteint pour Staphylococcus aureus, avec 30-micromolaire FMN montrant une efficacité plus élevée pour l’inactivation bactérienne. La réduction de la NBT a montré que l’effet photolytique de la FMN sous lumière violette chez Staphylococcus aureus était proportionnel à la concentration de FMN.Dans des conditions non traitées, une abondance plus faible de radicaux superoxydes a été indiquée par une faible absorbance à 560 nanomètres, tandis que des valeurs d’absorbance plus élevées dans le traitement FMN ont montré une production abondante de radicaux superoxydes, entraînant une augmentation de l’effet photochimique. Il est essentiel d’avoir une bonne source de lumière LED. La largeur spectrale du régime de lumière violette doit être étroite pour éviter tout chevauchement avec l’absorption des UV, car le rayonnement UV peut être dangereux.Après la procédure, d’autres composés chimiques tels que la tétracycline, la doxycycline, la catéchine, et peuvent être testés pour la photolyse similaire à FMN.

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Cette vidéo démontre le processus de réduction des agents pathogènes à base de riboflavine et de lumière UV contre la contamination bactérienne à titre élevé dans les produits plaquettaires humains. Ce processus pourrait aider à réduire le risque d’événements transfusionnels indésirables graves associés à la contamination bactérienne.

Un traitement aux riboflavine et aux rayons UV des produits plaquettaires pour éliminer les bactéries

Les conditions de stockage des produits plaquettaires créent un environnement idéal pour que les contaminants bactériens se multiplient à des niveaux dangereux.  Le but de cette étude était d’utiliser un test de formation de colonies pour évaluer un processus de réduction des agents pathogènes à base de riboflavine contre une contamination bactérienne à titre élevé dans les produits plaquettaires humains.

Le traitement des produits plaquettaires avec riboflavine et la lumière UV: Efficacité contre Haute Titer contamination bactérienne

Les infections causées par des souches bactériennes multirésistantes (MDR) sont apparues comme une menace sérieuse pour la santé publique, nécessitant le développement de thérapies alternatives. Nous présentons un protocole pour évaluer l’efficacité de la thérapie antimicrobienne à la lumière bleue (aBL) pour les infections à Acinetobacter baumannii MDR dans les brûlures de souris en utilisant l’imagerie par bioluminescence.

In vivo Investigation of Antimicrobial Therapy Blue Light pour multirésistante Acinetobacter baumannii Gravez Infections En utilisant l&#39; imagerie par bioluminescence

L’incidence croissante de Candida albicans résistant aux médicaments est un grave problème de santé dans le monde entier. La thérapie photodynamique antimicrobienne (TDA) peut offrir une stratégie pour lutter contre les infections fongiques résistantes aux médicaments. Le présent protocole décrit l’efficacité de l’aPDT médiée par rose bengal sur une souche multirésistante de C. albicans in vitro.

Thérapie photodynamique médiée par rose Bengal pour inhiber Candida albicans

Le présent protocole décrit les modifications au microscope électronique à transmission (MET) avec un système d’éclairage lumineux, la fabrication de cellules liquides et les observations TEM in situ des interactions induites par la lumière entre les cellules bactériennes et un photosensibilisant. Les méthodes de préparation des échantillons, les dommages causés par le faisceau d’électrons et l’imagerie sont également abordés.

Microscopie électronique à transmission in situ induite par la lumière pour l’observation de l’interaction liquide-matière molle

Ce protocole décrit une méthode simple et économique pour évaluer l’efficacité des photosensibilisants potentiels dans l’inactivation photodynamique antibactérienne (aPDI), en utilisant un format de plaque à 96 puits combiné à une source lumineuse de panneau LED. Cette approche permet de tester simultanément plusieurs conditions expérimentales, y compris différentes concentrations, composés et souches bactériennes.

Criblage in vitro à base de LED pour l’évaluation de molécules photoactivables dans l’inactivation photodynamique bactérienne

Un dispositif LED à lumière bleue de 405 nm démontre une efficacité antimicrobienne contre un large éventail d’agents pathogènes des plaies lorsqu’il est évalué sur un modèle cutané synthétique à base de collagène. Cette approche in vitro simplifiée offre une alternative reproductible et éthiquement viable pour l’évaluation en phase précoce des thérapies antimicrobiennes à base de lumière.

Étude d’un dispositif LED à lumière bleue pour supprimer les agents pathogènes des plaies à l’aide d’un modèle cutané synthétique à base de collagène

Découvrez la photolyse du flavine mononucléotide par lumière violette visible pour inactiver les bactéries pathogènes comme Staphylococcus aureus et E.coli. Cette méthode sûre et économique s'applique en thérapie cutanée et en industrie alimentaire.

Inactivation d’agents pathogènes par photolyse en lumière visible de la riboflavine-5′-phosphate

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