Caractérisation échocardiographique de la structure, de la fonction et du flux coronaire ventriculaire gauche chez les souris nouveau-nées

Ce protocole peut être utilisé pour étudier le rôle des altérations génétiques ou des interventions pharmacologiques dans la fonction cardiaque et le flux coronaire aux premiers âges postnatals. Le principal avantage de cette technique est la reconnaissance précoce des cardiopathologies et des études de suivi longitudinal dans l’hémodynamique ventriculaire gauche et les paramètres de flux coronaire dans différents modèles de souris. Les études échocardiographiques chez la souris néonatale sont techniquement difficiles.

Ce protocole est conçu pour étudier l’apparition précoce de maladies cardiovasculaires chez les souris néonatales qui pourrait permettre aux chercheurs de concevoir les mesures thérapeutiques appropriées. Commencez par placer le gel ECG sur les électrodes de la plate-forme chauffée. Placez des bandes de papier d’aluminium sur le dessus des électrodes pour étendre la portée des électrodes et fixez-les avec du ruban adhésif.

Ensuite, placez le gel ECG sur les bandes d’aluminium. Assurez-vous que le gel sous les bandes de papier d’aluminium ne sèche pas pendant la procédure. Si cela se produit, ajoutez plus de gel pour maintenir la conductivité.

Placez le chiot anesthésié en décubitus dorsal sur la plateforme d’imagerie et fixez le doigt du gant découpé autour du nez du chiot. Placez les pattes sur les coussinets de papier d’aluminium et fixez-les avec du ruban adhésif. Assurez-vous que le circuit électrique est complet et que l’ECG enregistre.

Utilisez deux rouleaux de gaze pour maintenir le gel à ultrasons en place. Placez une épaisse couche de gel à ultrasons préchauffé sur le haut du corps du chiot. Utilisez une lampe chauffante pour maintenir la température corporelle normale du chiot.

Effectuer l’échocardiographie transthoracique à l’aide d’un instrument d’échocardiographie équipé d’un transducteur linéaire à 40 mégahertz pour le mode B et à 32 mégahertz pour le Doppler suivant les protocoles d’échocardiographie de souris adultes. Placez le transducteur dans le support avec la marque d’index vers l’épaule droite du chiot. Abaissez le transducteur jusqu’à ce qu’il soit en contact avec le gel et visualisez le canal de sortie ventriculaire gauche en mode B.

Évitez d’exercer une pression excessive sur la cavité thoracique du chiot lors de la mise en place de l’échotransducteur lors de l’acquisition d’images échocardiographiques. Capturez la vue parasternale à grand axe du ventricule gauche, de la voie d’écoulement ventriculaire gauche et de l’oreillette gauche. Utilisez le mode M au niveau des feuillets aortiques pour mesurer le diamètre maximal de l’oreillette gauche à la N-systole.

Enregistrez les données en appuyant sur le bouton Cine Store. Faites pivoter le transducteur d’environ 90 degrés dans le sens des aiguilles d’une montre de l’axe long parasternal pour obtenir la vue parasternale à axe court. Capturez la vue parasternale à axe court du ventricule gauche pour mesurer les dimensions de la chambre, l’épaisseur de la paroi, le débit aortique et le débit pulmonaire.

Placez la sonde au niveau des muscles papillaires et utilisez le mode M pour mesurer les diamètres internes du ventricule gauche et l’épaisseur de la paroi pendant la systole et la diastole. Enregistrez les données en appuyant sur le bouton Cine Store. Déplacez le transducteur vers la base du cœur et utilisez le Doppler couleur pour visualiser l’artère pulmonaire.

Appuyez sur Doppler à ondes pulsées pour quantifier la vitesse de pointe du débit pulmonaire, les profils de flux pulmonaire, le temps d’éjection pulmonaire et le temps d’accélération pulmonaire. Enregistrez les données en appuyant sur le bouton Cine Store. Déplacez le transducteur plus loin vers la base et utilisez le Doppler couleur pour visualiser le flux aortique.

Utilisez le Doppler à ondes de pouls pour visualiser le flux sanguin et mesurer le temps d’éjection aortique. Enregistrez les données en appuyant sur le bouton Cine Store. Pour capturer la vue apicale à quatre chambres, placez la plate-forme en position Trendelenburg, inclinez-la vers la gauche et ajustez la sonde pour visualiser les quatre chambres.

Utilisez le Doppler couleur pour visualiser le flux sanguin et le Doppler à ondes de pouls à l’extrémité des feuillets de la valve mitrale au centre de l’orifice de la valve mitrale pour enregistrer le flux mitral. Enregistrez les données en appuyant sur le bouton Cine Store. Utilisez le Doppler tissulaire du côté septal de l’anneau valvulaire mitrale dans une vue à quatre chambres pour mesurer la vitesse maximale de relaxation myocardique dans le remplissage diastolique précoce et diastolique tardif, ainsi que la vitesse maximale de contraction myocardique systolique.

Enregistrez les données en appuyant sur le bouton Cine Store. Capturez la vue parasternale modifiée à grand axe pour examiner l’artère coronaire descendante antérieure gauche. Utilisez une vue parasternale à grand axe modifiée, en déplaçant le transducteur latéralement.

Déplacez la sonde et utilisez le Doppler couleur pour visualiser l’origine de l’artère coronaire principale gauche générée par l’aorte. Identifier l’artère descendante antérieure gauche qui se génère à partir de l’artère coronaire principale gauche et passe entre la paroi antérieure ventriculaire gauche et le tractus ventriculaire droit. Dans cette position, mesurez le flux de l’artère coronaire descendante antérieure gauche en appuyant sur le Doppler à ondes de pouls.

Enregistrez les données en appuyant sur le bouton Cine Store. Augmenter la concentration d’isoflurane à 2,5% et attendre cinq minutes pour atteindre un débit maximal. Enregistrez les données en appuyant sur le bouton Cine Store.

Dans la vue parasternale à axe long, M-Mode a été utilisé pour mesurer le diamètre de l’oreillette gauche. La vue parasternale à axe court a été utilisée pour mesurer les dimensions de la chambre ventriculaire gauche et l’épaisseur de la paroi, le débit pulmonaire et le débit aortique. La vue apicale à quatre chambres a été utilisée pour examiner les vitesses de flux sanguin à travers la valve mitrale ainsi que les vitesses de relaxation et de contraction du myocarde à l’anneau de la valve mitrale.

La vue parasternale modifiée à grand axe a été utilisée pour examiner les paramètres d’écoulement de l’artère coronaire antérieure descendante gauche. Les valeurs accrues de la vitesse maximale de l’écoulement coronaire, de la vitesse moyenne de l’écoulement coronaire et de l’intégrale vitesse/temps cinq minutes après l’augmentation de l’isoflurane ont confirmé la réponse attendue à l’hyperémie chez les souris néonatales. En raison de la petite taille des chiots, il est important de maintenir leur température corporelle normale et d’attacher des bandes de papier d’aluminium à leurs membres pour atteindre les électropads et créer un circuit ECG.