Modèle d’anévrisme de l’aorte abdominale de souris induit par l’application périvasculaire d’élastase
11 février 2022
Le présent protocole décrit une méthode chirurgicale normalisée pour le modèle AAA induit par l’élastase par l’application directe d’élastase à l’adventice de l’aorte abdominale infrarénale chez la souris.
Il s’agit d’un protocole standardisé pour l’anévrisme de l’aorte abdominale induit par l’élastase, ce qui améliorerait considérablement la reproductibilité et la cohérence des études utilisant ce modèle. Cette technique a un taux d’induction constant de l’anévrisme de l’aorte abdominale. Il possède également l’avantage de faibles dépenses et d’un temps de fonctionnement court, ce qui se traduira par une puissance statistique et une reproductibilité plus fortes.
Vous devez vous assurer que les tissus conjonctifs recouvrant l’aorte ont été enlevés afin que l’élastase ait une meilleure chance de pénétration, mais veillez à ne pas endommager les vaisseaux. Pour commencer, administrer cinq milligrammes par kilogramme de carprofène par voie sous-cutanée, 30 minutes avant l’induction de l’anesthésie. Testez la souris anesthésiée pour l’absence de réponse au pincement des orteils avant l’incision cutanée.
Faites une incision longitudinale de 2,5 centimètres sur la peau, le long de la ligne médiane du milieu et du bas-ventre. Tirez doucement vers le haut le muscle sous-jacent et faites une incision longitudinale de 2,5 centimètres le long de linea alba. Utilisez des applicateurs à pointe de coton mouillé pour déplacer les intestins et l’estomac vers le côté droit de la souris et accéder à la cavité abdominale.
Utilisez une pince pour enlever doucement le tissu conjonctif recouvrant l’aorte abdominale et la veine cave inférieure. Utilisez des pinces pour disséquer doucement l’arrière de l’aorte abdominale et la veine cave inférieure des muscles sous-jacents. Placez un morceau de quatre centimètres sur quatre millimètres de bande de gant à travers l’arrière de l’aorte abdominale et de la veine cave inférieure, et redressez la bande.
Placez la bande à environ 0,5 centimètre de l’artère rénale droite. Au-dessus de la bande, placez un morceau de coton de trois centimètres sur deux millimètres à travers l’arrière de l’aorte abdominale et de la veine cave inférieure. Ensuite, redressez le coton.
Pour incuber l’élastase, utilisez une pipette pour laisser tomber 30 microlitres d’élastase pancréatique porcine sur le segment de l’aorte au-dessus du coton. Enroulez le coton et la bande autour de l’aorte et de la veine cave inférieure. Rincez un morceau de gaze de 10 centimètres sur 10 centimètres avec une solution saline stérile à 0,9% et placez-le sur l’abdomen.
Après 30 minutes, retirez la bande et le coton avec une pince. Irriguez l’aorte et la cavité abdominale avec 500 microlitres de solution saline stérile à 0,9%. Utilisez de la gaze pour absorber la solution saline restante.
Ré-approximer les couches musculaires avec une suture monofilament non résorbable 6-0. Ensuite, fermez la peau avec trois à quatre interrompus à 6-0 sutures monofilaments non résorbables. Le taux d’incidence du développement d’un anévrisme de l’aorte abdominale le jour 14 postopératoire était de 91,7% pour les animaux femelles, tandis que le taux d’incidence pour les animaux mâles était de 72,7%Parmi les 19 animaux chez lesquels un anévrisme de l’aorte abdominale a été développé, une augmentation de 1,7 fois et 1,6 fois du diamètre maximal de l’aorte abdominale a été observée, chez les femelles et les mâles respectivement, par rapport aux témoins non chirurgicaux.
Des images représentatives de l’aorte provenant de groupes non chirurgicaux et chirurgicaux le jour postopératoire 14 sont affichées. Cette technique a servi d’outil potentiel pour aider à disséquer la physiopathologie du triple A et aider à la découverte de nouvelles cibles thérapeutiques potentielles.
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Aperçu
Cette étude présente un protocole chirurgical standardisé pour induire une anévrisme de l'aorte abdominale (AAA) chez la souris à l'aide d'élastase. La méthode assure une forte reproductibilité et des coûts opérationnels faibles, ce qui en fait un outil puissant pour l'étude de l'AAA.
Composantes clés de l'étude
Domaine de recherche
- Biologie cardiovasculaire
- Physiopathologie des maladies aortiques
- Modélisation expérimentale chez la souris
Contexte
- Un anévrisme de l'aorte abdominale est une affection médicale grave associée à une morbidité importante.
- Les modèles actuels varient en termes de reproductibilité et de coût.
- Une approche normalisée pourrait améliorer les résultats de la recherche.
Méthodes utilisées
- Application directe d'élastase pancréatique porcine à la adventice de l'aorte.
- Modèle murin (souches C57BL/6 ou similaires).
- Techniques de dissection chirurgicale et évaluations de suivi.
Résultats principaux
- Une incidence de 91,7 % d'AAA chez les souris femelles et de 72,7 % chez les mâles au 14e jour postopératoire.
- Des augmentations significatives du diamètre maximal de l'aorte abdominale observées.
- Valide l'applicabilité du modèle pour approfondir la compréhension de l'AAA et découvrir de nouvelles cibles thérapeutiques.
Conclusions
- Ce protocole décrit une méthode fiable pour l'induction de l'AAA.
- Il pourrait améliorer la recherche en biologie cardiovasculaire et en développement thérapeutique.
Questions fréquemment posées
Pertinence industrielle pour les cadres
Les modèles murins standardisés pour l'anévrisme de l'aorte abdominale (AAA) sont essentiels pour réduire les risques lors de la découverte précoce de cibles cardiovasculaires et permettre des études mécanistiques reproductibles. Le protocole d'application périvasculaire d'élastase assure une grande cohérence et une puissance statistique élevée, soutenant des tests d'hypothèses solides et une comparabilité entre études. Ce modèle renforce la confiance dans le portefeuille en offrant un système préclinique fiable pour l'étude de la pathogenèse de l'AAA et l'évaluation de cibles thérapeutiques.
Applications stratégiques en recherche et développement en biopharmaceutique
Début de la découverte et validation de la cible
- Permet l'analyse de la physiopathologie de l'AAA et l'identification de mécanismes responsables de la maladie.
- Permet la validation fonctionnelle de cibles candidates dans un contexte in vivo reproductible.
- Facilite la prévisibilité pour les programmes cardiovasculaires en phase précoce.
Développement de tests et de criblages
- Offre un système in vivo validé pour évaluer les interventions pharmacologiques ciblant les AAA.
- Fournit des lectures quantitatives normalisées, telles que les variations du diamètre aortique, pour le développement de tests.
- Permet la reproductibilité et la montée en échelle du criblage de composés dans les études précliniques.
Recherche translationnelle et préclinique
- S'aligne sur des critères pertinents pour la maladie afin d'explorer des biomarqueurs translationnels.
- Permet une continuité allant de la découverte mécanistique à l'évaluation de l'efficacité préclinique.
- Réduit le risque biologique en modélisant des caractéristiques clés de l'AAA humain chez la souris.
Intégration des pipelines et des flux de travail
Ce modèle s'intègre à la continuité découverte-préclinique, reliant les études mécanistiques et l'identification de composés candidats pour les traitements de l'AAA.
- Biologie de la découverte : Soutient les tests fondés sur des hypothèses concernant les mécanismes de l’AAA et le rôle des cibles.
- Écrantage : Fournit des résultats reproductibles et quantitatifs pour l’évaluation de l’efficacité des composés.
- Analytique : Permet la comparaison statistique des taux de dilatation aortique et d’incidence entre différents groupes expérimentaux.
- Recherche translationnelle : Facilite la concordance avec les caractéristiques cliniques de l’AAA pour le développement de biomarqueurs et de critères d’évaluation.
- Réutilisation en entreprise : Offre un modèle standardisé et rentable, adaptable à différentes équipes de recherche cardiovasculaire.
Impact opérationnel et organisationnel
- Valeur scientifique : Accroît la confiance prédictive et réduit l'ambiguïté mécanistique dans la recherche sur l'AAA.
- Valeur opérationnelle : Améliore la reproductibilité, la standardisation et le débit des études in vivo.
- Valeur stratégique : Permet de mieux évaluer les décisions d'orientation (go/no-go) et d'allouer les capitaux dans les premières phases des programmes cardiovasculaires.
- Impact sur le portefeuille : Permet une priorisation ajustée au risque des cibles et des candidats thérapeutiques dans l'AAA.
Considérations relatives à la mise en œuvre
- Nécessite une expertise chirurgicale et une formation procédurale normalisée pour des résultats reproductibles.
- Exige un accès à des salles chirurgicales pour animaux et à des outils d'imagerie quantitative ou de mesure.
- Implique une rigoureuse adhésion au protocole par toutes les équipes afin de minimiser la variabilité entre les études.
- Une adaptation peut être nécessaire selon les souches de souris ou les critères de jugement expérimentaux.
- Les limites potentielles incluent la variabilité technique et les caractéristiques physiopathologiques propres au modèle.
