Name: Modèle d’anévrisme de l’aorte abdominale de souris induit par l’application périvasculaire d’élastase (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-02-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 49 s
Description: Découvrez un protocole chirurgical standardisé pour induire un anévrisme de l'aorte abdominale chez la souris par application périvasculaire d'élastase. Cette méthode offre une forte reproductibilité et des coûts réduits pour la recherche cardiovasculaire.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Nous remercions l’Unité de médecine des animaux de laboratoire de l’Université du Michigan pour son aide en matière d’alimentation et d’élevage d’animaux. Cette étude est soutenue par NIH RO1 HL138139, NIH RO1 HL153710 à J. Zhang, NIH RO1 HL109946, RO1 HL134569 à Y.E. Chen, et l’American Heart Association accorde 20POST35110064 à G. Zhao.

Les protocoles pour animaux ont été approuvés par le Comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux de l’Université du Michigan (PRO00010092). Des souris mâles et femelles de type sauvage C57BL/6J, âgées d’environ 7 semaines, ont été utilisées pour les expériences.
1. Préparation des animaux
<ol><li>Nourrissez les souris avec le régime chow standard (voir tableau des matériaux) avant et après la chirurgie. REMARQUE: Différentes souches et âges de souris peuvent être utilisés. Cependant, il est recommandé d’avoir entre 5,5 et 12 semaines pour atteindre un taux d’incidence maximal.</li>
	<li>Pour chaque souris, administrer 5 mg/kg de carprofène par voie sous-cutanée 30 minutes avant l’induction de l’anesthésie.</li>
	<li>Après 30 min, administrer 100 mg/kg de kétamine et 5 mg/kg de xylazine par injection intrapéritonéale pour induire une anesthésie.</li>
</ol>2. Préparation à la chirurgie
<ol><li>Préparez le matériel chirurgical.<ol>
<li>Couper les gants en nitrile en bandes de 4 cm x 4 mm. Couper les cotons en morceaux de 3 cm x 2 mm. Autoclavez-les avec d’autres instruments chirurgicaux, y compris des ciseaux chirurgicaux, des pinces à tissus et des hémostats Halsted-Mosquito (voir tableau des matériaux).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Placez la souris en position couchée sur un pansement absorbant stérile. Immobilisez les pattes avant et arrière avec du ruban adhésif chirurgical.</li>
	<li>Utilisez des applicateurs à pointe de coton (voir la table des matériaux) pour brosser la lotion démaquillante sur la région abdominale moyenne et inférieure, puis tamponnez la zone avec de la gaze chirurgicale pour enlever les poils.</li>
	<li>Désinfectez la zone chirurgicale au moins trois fois dans un mouvement circulaire avec des applications alternées d’alcool à 70% et d’un gommage à base d’iode ou de chlorhexidine. Laisser sécher.</li>
</ol>3. Procédure chirurgicale
<ol><li>Effectuez les étapes suivantes pour accéder à la cavité abdominale.<ol>
<li>Testez la souris pour l’absence de réponse au pincement des orteils avant l’incision cutanée.</li>
		<li>Faites une incision longitudinale de 2,5 cm sur la peau le long de la ligne médiane du milieu et du bas-ventre à l’aide de ciseaux chirurgicaux.</li>
		<li>Tirez doucement vers le haut le muscle sous-jacent et faites une incision longitudinale de 2,5 cm le long de linea alba pour accéder à la cavité abdominale.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Exposez l’aorte abdominale.<ol>
<li>Utilisez des applicateurs à pointe de coton mouillé pour déplacer les intestins et l’estomac vers le côté droit de la souris. REMARQUE: Idéalement, cela exposera le segment infrarénal de l’aorte. Si l’aorte est difficile à localiser, le rein droit et l’artère rénale droite peuvent identifier l’aorte (car le rein droit a un emplacement anatomique légèrement inférieur à celui du rein gauche).</li>
		<li>Utilisez une pince pour retirer doucement le tissu conjonctif recouvrant l’aorte abdominale et la veine cave inférieure (CIV). REMARQUE: L’aorte abdominale et la CIV sont contenues dans la même gaine de vaisseau. Il n’est pas nécessaire d’enlever tout le tissu conjonctif car un retrait complet augmenterait le risque d’endommager ces deux vaisseaux.</li>
		<li>Utilisez des pinces pour disséquer doucement l’arrière de l’aorte abdominale et la CIV des muscles sous-jacents. REMARQUE: Les pointes des pinces doivent aller à l’arrière de la gaine transversalement et créer un trou dans le fascia qui relie la gaine aux muscles sous-jacents. Une fois le trou fait, étendez sa taille en relâchant lentement les pinces.</li>
		<li>Placez un morceau de la bande de gant de 4 cm x 4 mm (comme mentionné précédemment, étape 2.1.1) à l’arrière de l’aorte abdominale et de la CIV, puis redressez la bande. Placez la bande à environ 0,5 cm de l’artère rénale droite. REMARQUE: Assurez-vous que le trou est assez grand pour que le fascia environnant ne tord pas la bande.</li>
		<li>Au-dessus de la bande, placez un morceau de coton de 3 cm x 2 mm à travers l’arrière de l’aorte abdominale et de la CIV, puis redressez le coton.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Incuber l’élastase.<ol>
<li>Utilisez une pipette pour déposer 30 μL d’élastase pancréatique porcine (activité enzymatique totale de 1,8 unité, voir Tableau des matériaux) sur le segment de l’aorte au-dessus du coton, puis enroulez le coton et la bande autour de l’aorte et de la CIV. Rincez un morceau de gaze de 10 cm x 10 cm avec une solution saline stérile à 0,9% et placez-le sur l’abdomen. REMARQUE: La gaze n’a besoin que d’un rinçage partiel, car une surdose risquerait de diluer l’élastase en dessous.</li>
		<li>Après 30 min, retirez la bande et le coton avec une pince.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Fermez la cavité abdominale en suivant les étapes ci-dessous.<ol>
<li>Irriguer l’aorte et la cavité abdominale avec 500 μL de solution saline stérile à 0,9%. Utilisez une gaze de 10 cm x 10 cm pour absorber la solution saline restante.</li>
		<li>Réabordez les couches musculaires avec une suture monofilament non résorbable 6-0.</li>
		<li>Fermez la peau avec 3-4 sutures monofilaments non résorbables interrompues 6-0.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Soins postopératoires
<ol><li>Administrer 5 mg/kg de carprofène par voie sous-cutanée le jour 1 postopératoire.</li>
	<li>Retirez les sutures cutanées le jour 10 postopératoire.</li>
</ol>5. Mesure du diamètre de l’anévrisme de l’aorte abdominale
<ol><li>Euthanasier les souris par surdosage de CO2 le jour 14 postopératoire. Cela représente le point temporel de dilatation maximale.</li>
	<li>Accédez à la cavité abdominale comme décrit à l’étape 3.1.</li>
	<li>Effectuer une perfusion vasculaire en injectant 10 mL de solution saline à 0,9% dans la circulation à travers le ventricule gauche.</li>
	<li>Exposez le segment infrarénal de l’aorte abdominale comme décrit aux étapes 3.1-3.2. Retirez soigneusement le tissu conjonctif environnant et séparez l’aorte abdominale de la CIV.</li>
	<li>Mesurez le diamètre de l’aorte abdominale avec un étrier.</li>
</ol>

<ol><li>Kent, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+practice%3A+Abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Clinical practice: Abdominal aortic aneurysms.</a> The New England Journal of Medicine. 371 (22), 2101-2108 (2014).</li>
<li>Karthikesalingam, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mortality+from+ruptured+abdominal+aortic+aneurysms%3A+Clinical+lessons+from+a+comparison+of+outcomes+in+England+and+the+USA%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Mortality from ruptured abdominal aortic aneurysms: Clinical lessons from a comparison of outcomes in England and the USA.</a> Lancet. 383 (9921), 963-969 (2014).</li>
<li>Noel, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ruptured+abdominal+aortic+aneurysms%3A+The+excessive+mortality+rate+of+conventional+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Ruptured abdominal aortic aneurysms: The excessive mortality rate of conventional repair.</a> Journal of Vascular Surgery. 34 (1), 41-46 (2001).</li>
<li>Lederle, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rupture+rate+of+large+abdominal+aortic+aneurysms+in+patients+refusing+or+unfit+for+elective+repair%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Rupture rate of large abdominal aortic aneurysms in patients refusing or unfit for elective repair.</a> JAMA. 287 (22), 2968-2972 (2002).</li>
<li>Kochanek, K. D., Xu, J., Murphy, S. L., Minino, A. M., Kung, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deaths%3A+Final+data+for+2009%5BTitle%5D)+AND+%22National+Vital+Statistics+Reports%22%5BJournal%5D)">Deaths: Final data for 2009.</a> National Vital Statistics Reports. 60 (3), 1(2011).</li>
<li>Daugherty, A., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+abdominal+aortic+aneurysm+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Atherosclerosis+Reports%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of abdominal aortic aneurysm formation.</a> Current Atherosclerosis Reports. 4 (3), 222-227 (2002).</li>
<li>Quintana, R. A., Taylor, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+mechanisms+of+aortic+aneurysm+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Cellular mechanisms of aortic aneurysm formation.</a> Circulation Research. 124 (4), 607-618 (2019).</li>
<li>Kuivaniemi, H., Ryer, E. J., Elmore, J. R., Tromp, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+pathogenesis+of+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Review+of+Cardiovascular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Understanding the pathogenesis of abdominal aortic aneurysms.</a> Expert Review of Cardiovascular Therapy. 13 (9), 975-987 (2015).</li>
<li>Trollope, A., Moxon, J. V., Moran, C. S., Golledge, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+abdominal+aortic+aneurysm+and+their+role+in+furthering+management+of+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Pathology%22%5BJournal%5D)">Animal models of abdominal aortic aneurysm and their role in furthering management of human disease.</a> Cardiovascular Pathology. 20 (2), 114-123 (2011).</li>
<li>Patelis, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+in+the+research+of+abdominal+aortic+aneurysms+development%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Research%22%5BJournal%5D)">Animal models in the research of abdominal aortic aneurysms development.</a> Physiological Research. 66 (6), 899-915 (2017).</li>
<li>Senemaud, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translational+relevance+and+recent+advances+of+animal+models+of+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+Thrombosis%2C+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Translational relevance and recent advances of animal models of abdominal aortic aneurysm.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 37 (3), 401-410 (2017).</li>
<li>Lysgaard Poulsen, J., Stubbe, J., Lindholt, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+used+to+explore+abdominal+aortic+aneurysms%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Vascular+and+Endovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Animal models used to explore abdominal aortic aneurysms: A systematic review.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 52 (4), 487-499 (2016).</li>
<li>Tsui, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+models+of+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Open+Cardiovascular+Medicine+Journal%22%5BJournal%5D)">Experimental models of abdominal aortic aneurysms.</a> Open Cardiovascular Medicine Journal. 4, 221-230 (2010).</li>
<li>Manning, M. W., Cassi, L. A., Huang, J., Szilvassy, S. J., Daugherty, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abdominal+aortic+aneurysms%3A+Fresh+insights+from+a+novel+animal+model+of+the+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Vascular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Abdominal aortic aneurysms: Fresh insights from a novel animal model of the disease.</a> Vascular Medicine. 7 (1), 45-54 (2002).</li>
<li>Chiou, A. C., Chiu, B., Pearce, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+aortic+aneurysm+produced+by+periarterial+application+of+calcium+chloride%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Murine aortic aneurysm produced by periarterial application of calcium chloride.</a> Journal of Surgical Research. 99 (2), 371-376 (2001).</li>
<li>Allaire, E., Guettier, C., Bruneval, P., Plissonnier, D., Michel, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-free+arterial+grafts%3A+Morphologic+characteristics+of+aortic+isografts%2C+allografts%2C+and+xenografts+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Cell-free arterial grafts: Morphologic characteristics of aortic isografts, allografts, and xenografts in rats.</a> Journal of Vascular Surgery. 19 (3), 446-456 (1994).</li>
<li>Anidjar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elastase-induced+experimental+aneurysms+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Elastase-induced experimental aneurysms in rats.</a> Circulation. 82 (3), 973-981 (1990).</li>
<li>Sun, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mast+cells+modulate+the+pathogenesis+of+elastase-induced+abdominal+aortic+aneurysms+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Mast cells modulate the pathogenesis of elastase-induced abdominal aortic aneurysms in mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 117 (11), 3359-3368 (2007).</li>
<li>Bhamidipati, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+novel+murine+model+of+aortic+aneurysms+using+peri-adventitial+elastase%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Development of a novel murine model of aortic aneurysms using peri-adventitial elastase.</a> Surgery. 152 (2), 238-246 (2012).</li>
<li>Pyo, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+gene+disruption+of+matrix+metalloproteinase-9+%28gelatinase+B%29+suppresses+development+of+experimental+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Targeted gene disruption of matrix metalloproteinase-9 (gelatinase B) suppresses development of experimental abdominal aortic aneurysms.</a> Journal of Clinical Investigation. 105 (11), 1641-1649 (2000).</li>
<li>Tanaka, A., Hasegawa, T., Chen, Z., Okita, Y., Okada, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+rat+model+of+abdominal+aortic+aneurysm+using+a+combination+of+intraluminal+elastase+infusion+and+extraluminal+calcium+chloride+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">A novel rat model of abdominal aortic aneurysm using a combination of intraluminal elastase infusion and extraluminal calcium chloride exposure.</a> Journal of Vascular Surgery. 50 (6), 1423-1432 (2009).</li>
<li>Busch, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Four+surgical+modifications+to+the+classic+elastase+perfusion+aneurysm+model+enable+haemodynamic+alterations+and+extended+elastase+perfusion%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Vascular+and+Endovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Four surgical modifications to the classic elastase perfusion aneurysm model enable haemodynamic alterations and extended elastase perfusion.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 56 (1), 102-109 (2018).</li>
<li>Liang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KLF11+protects+against+venous+thrombosis+via+suppressing+tissue+factor+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Thrombosis+and+Haemostasis%22%5BJournal%5D)">KLF11 protects against venous thrombosis via suppressing tissue factor expression.</a> Thrombosis and Haemostasis. , (2021).</li>
<li>Marinov, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Can+the+infusion+of+elastase+in+the+abdominal+aorta+of+the+Yucatan+miniature+swine+consistently+produce+experimental+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigative+Surgery%22%5BJournal%5D)">Can the infusion of elastase in the abdominal aorta of the Yucatan miniature swine consistently produce experimental aneurysms.</a> Journal of Investigative Surgery. 10 (3), 129-150 (1997).</li>
<li>Shannon, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porcine+model+of+infrarenal+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Porcine model of infrarenal abdominal aortic aneurysm.</a> Journal of Visualized Experiments. (153), e60169(2019).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Le modèle AAA induit par l’élastase a été rapporté pour la première fois par Anidjar et al. en utilisant des rats en 199017. Une variété de versions modifiées ont été introduites au cours des trente dernières années, ainsi qu’une amélioration significative des techniques chirurgicales 19,20,21,22. Des centaines d’instituts utilisent des modèles AAA induits par l’élastase...

L’anévrisme de l’aorte abdominale (AAA) est défini comme une dilatation segmentaire de l’aorte abdominale avec une augmentation d’au moins 50% du diamètre des vaisseaux1. L’AAA est potentiellement mortel, car la rupture peut entraîner un taux de mortalité extrêmement élevé, même avec une intervention 2,3,4. Il a été rapporté que l’AAA est responsable d’environ 13 000 décès par an aux États-Unis, ce qui en fait la10e cause de décès 1,5.
La pathogenèse de l’AAA n’est pas encore entièrement comprise 6,7,8. Pour étudier le mécanisme moléculaire de l’AAA et tester des cibles thérapeutiques potentielles, plusieurs modèles expérimentaux AAA ont été établis 9,10. Les modèles de rongeurs de l’AAA comprennent les modèles d’élastase, de chlorure de calcium, d’angiotensine II et de xénogreffe, parmi lesquels le modèle AAA induit par l’élastase est le deuxième modèle le plus utilisé 10,11,12,13,14,15,16,17. Ce modèle implique une perfusion directe ou l’application d’élastase pancréatique porcine (EPI) sur le segment infrarénal de l’aorte. La pénétration de l’élastase dans la couche médiale de l’aorte provoquera la dégradation des lamelles élastiques et l’infiltration des cellules inflammatoires, entraînant la perte de l’intégrité de la paroi aortique et la dilatation ultérieure de l’aorte abdominale 7,18. Le modèle AAA induit par l’élastase a été rapporté pour la première fois par Anidjar et al. en 1990 chez des rats, dans lequel un segment isolé de l’aorte a été perfusé avec de l’élastase17. Plus tard en 2012, un modèle modifié utilisant une application péri-interventionventitielle d’EPI a été rapporté par Bhamidipati et al.19. De nos jours, la plupart des chirurgies pour le modèle AAA induit par l’élastase sont inspirées du groupe de Bhamidipati et sont effectuées avec l’application externe plutôt que la perfusion intraluminale de l’EPI. Bien que l’application externe ait moins besoin de compétences chirurgicales fines, le taux d’incidence de l’AAA est relativement inférieur et la taille un peu plus petite que celle de la perfusion intraluminale11,19.
Bien que largement utilisé dans les études AAA, le modèle AAA induit par l’élastase présente certaines limites. Une mise en garde de ce modèle est les variations inévitables de la façon dont la chirurgie est effectuée, ce qui peut conduire à la question de la reproductibilité. Par exemple, la différence peut exister dans l’intervention chirurgicale en ce qui concerne la façon dont le segment infrarénal de l’aorte est isolé et quelle partie du segment est sélectionnée pour l’application de l’EPI parmi différents laboratoires. L’activité enzymatique de l’EPI et la durée de l’incubation de l’EPI peuvent également varier. Cependant, ce sont tous des déterminants essentiels qui affectent le taux de formation éventuel de l’AAA et le diamètre de l’anévrisme. La variation de ces déterminants critiques rend très difficile la comparaison des données des études AAA de différents groupes utilisant ce modèle. Par conséquent, une intervention chirurgicale standardisée est nécessaire comme outil pour obtenir des résultats comparables de diverses institutions.
Cet article décrit un protocole chirurgical standardisé pour le modèle AAA induit par l’élastase par application directe d’EPI à l’adventice de l’aorte abdominale infrarénale chez la souris. Les détails sur le matériel chirurgical et les procédures essentielles à la génération réussie et robuste d’AAA chez la souris utilisant ce modèle seront également discutés.

<table><tbody><tr><td>Suture monofilament non résorbable 6-0</td><td>Pro Advantage</td><td>P420697</td><td></td></tr><tr><td>Carprofen</td><td>Zoetis Inc.</td><td>NDC : 54771-8507</td><td></td></tr><tr><td>Chow Diet</td><td>LabDiet</td><td>3005659-220</td><td>PicoLab 5L0D</td></tr><tr><td>Applicateur de coton</td><td>Dynarex</td><td>4303</td><td></td></tr><tr><td>Cotton Pad</td><td>Raël</td><td>UPC : 810027130969</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism 8</td><td>GraphPad Software Inc.</td><td></td><td>Version 8.4.3</td></tr><tr><td>Pince Grarfe</td><td>Outils de science fine</td><td>11051-10</td><td></td></tr><tr><td>Hémostats de moustique Halsted</td><td>Outils de science fine</td><td>13009-12</td><td></td></tr><tr><td>Kétamine</td><td>Par Pharmaceutique</td><td>NDC : 42023-0115-10</td><td></td></tr><tr><td>Gants en nitrile</td><td>Fisherbrand</td><td>19-130-1597</td><td></td></tr><tr><td>Pénicilline-Streptomycine</td><td>Thermo Fisher</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Élastase pancréatique porcine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E1250-100MG</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux</td><td>Outils scientifiques fins</td><td>14068-12</td><td></td></tr><tr><td>Solution saline stérile à 0,9 %</td><td>Baxter</td><td>2B1324X</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Akorn</td><td>NDC : 59399-110-20</td><td></td></tr></tbody></table>

modèle d’anévrisme de l’aorte abdominale de souris induit par l’application périvasculaire d’élastase

Mouse Abdominal Aortic Aneurysm Model Induced by Perivascular Application of Elastase

L’anévrisme de l’aorte abdominale (AAA), bien que principalement asymptomatique, est potentiellement mortel car la rupture de l’AAA a généralement un résultat dévastateur. Actuellement, il existe plusieurs modèles expérimentaux distincts d’AAA, chacun mettant l’accent sur un aspect différent de la pathogenèse de l’AAA. Le modèle AAA induit par l’élastase est le deuxième modèle AAA de rongeur le plus utilisé. Ce modèle implique une perfusion directe ou l’application d’élastase pancréatique porcine (EPI) sur le segment infrarénal de l’aorte. En raison de défis techniques, la plupart des modèles AAA induits par l’élastase sont aujourd’hui réalisés avec l’application externe plutôt qu’avec une perfusion intraluminale d’EPI. L’infiltration d’élastase entraînera la dégradation des lamelles élastiques dans les couches médiales, entraînant la perte de l’intégrité de la paroi aortique et la dilatation ultérieure de l’aorte abdominale. Cependant, l’un des inconvénients du modèle AAA induit par l’élastase est la variation inévitable de la façon dont la chirurgie est effectuée. Plus précisément, la technique chirurgicale d’isolement du segment infrarénal de l’aorte, le matériau utilisé pour l’enveloppement de l’aorte et l’incubation de l’EPI, l’activité enzymatique de l’EPI et la durée d’application de l’EPI peuvent tous être des déterminants importants qui affectent le taux de formation éventuel de l’AAA et le diamètre de l’anévrisme. Notamment, la différence entre ces facteurs et différentes études sur l’AAA peut entraîner des problèmes de reproductibilité. Cet article décrit un processus chirurgical détaillé du modèle AAA induit par l’élastase par application directe d’EPI à l’adventice de l’aorte abdominale infrarénale chez la souris. Après cette procédure, un taux de formation d’AAA stable d’environ 80% chez les souris mâles et femelles est réalisable. La cohérence et la reproductibilité des études AAA utilisant un modèle AAA induit par l’élastase peuvent être considérablement améliorées en établissant une intervention chirurgicale standard.

Au total, vingt-trois souris de type sauvage (WT) âgées de 7 semaines, dont 12 femelles et 11 mâles, ont été opérées selon le protocole présenté. Le taux de survie était de 100 % (mortalité chirurgicale exclue). Le diamètre maximal de l’aorte abdominale a été mesuré par un étrier.
AAA a été défini comme dilatant l’aorte abdominale avec une augmentation de 50% du diamètre des vaisseaux. Par conséquent, une augmentation de 50% du diamètre maximal de l’aorte abdominale a été choisie comme point d...

Le présent protocole décrit une méthode chirurgicale normalisée pour le modèle AAA induit par l’élastase par l’application directe d’élastase à l’adventice de l’aorte abdominale infrarénale chez la souris.

Modèle d’anévrisme de l’aorte abdominale de souris induit par l’application périvasculaire d’élastase

Abdominal aortic aneurysm (AAA), although primarily asymptomatic, is potentially life-threatening as the rupture of AAA usually has a devastating outcome. ...

Il s’agit d’un protocole standardisé pour l’anévrisme de l’aorte abdominale induit par l’élastase, ce qui améliorerait considérablement la reproductibilité et la cohérence des études utilisant ce modèle. Cette technique a un taux d’induction constant de l’anévrisme de l’aorte abdominale. Il possède également l’avantage de faibles dépenses et d’un temps de fonctionnement court, ce qui se traduira par une puissance statistique et une reproductibilité plus fortes.Vous devez vous assurer que les tissus conjonctifs recouvrant l’aorte ont été enlevés afin que l’élastase ait une meilleure chance de pénétration, mais veillez à ne pas endommager les vaisseaux. Pour commencer, administrer cinq milligrammes par kilogramme de carprofène par voie sous-cutanée, 30 minutes avant l’induction de l’anesthésie. Testez la souris anesthésiée pour l’absence de réponse au pincement des orteils avant l’incision cutanée.Faites une incision longitudinale de 2,5 centimètres sur la peau, le long de la ligne médiane du milieu et du bas-ventre. Tirez doucement vers le haut le muscle sous-jacent et faites une incision longitudinale de 2,5 centimètres le long de linea alba. Utilisez des applicateurs à pointe de coton mouillé pour déplacer les intestins et l’estomac vers le côté droit de la souris et accéder à la cavité abdominale.Utilisez une pince pour enlever doucement le tissu conjonctif recouvrant l’aorte abdominale et la veine cave inférieure. Utilisez des pinces pour disséquer doucement l’arrière de l’aorte abdominale et la veine cave inférieure des muscles sous-jacents. Placez un morceau de quatre centimètres sur quatre millimètres de bande de gant à travers l’arrière de l’aorte abdominale et de la veine cave inférieure, et redressez la bande.Placez la bande à environ 0,5 centimètre de l’artère rénale droite. Au-dessus de la bande, placez un morceau de coton de trois centimètres sur deux millimètres à travers l’arrière de l’aorte abdominale et de la veine cave inférieure. Ensuite, redressez le coton.Pour incuber l’élastase, utilisez une pipette pour laisser tomber 30 microlitres d’élastase pancréatique porcine sur le segment de l’aorte au-dessus du coton. Enroulez le coton et la bande autour de l’aorte et de la veine cave inférieure. Rincez un morceau de gaze de 10 centimètres sur 10 centimètres avec une solution saline stérile à 0,9% et placez-le sur l’abdomen.Après 30 minutes, retirez la bande et le coton avec une pince. Irriguez l’aorte et la cavité abdominale avec 500 microlitres de solution saline stérile à 0,9%. Utilisez de la gaze pour absorber la solution saline restante.Ré-approximer les couches musculaires avec une suture monofilament non résorbable 6-0. Ensuite, fermez la peau avec trois à quatre interrompus à 6-0 sutures monofilaments non résorbables. Le taux d’incidence du développement d’un anévrisme de l’aorte abdominale le jour 14 postopératoire était de 91,7% pour les animaux femelles, tandis que le taux d’incidence pour les animaux mâles était de 72,7%Parmi les 19 animaux chez lesquels un anévrisme de l’aorte abdominale a été développé, une augmentation de 1,7 fois et 1,6 fois du diamètre maximal de l’aorte abdominale a été observée, chez les femelles et les mâles respectivement, par rapport aux témoins non chirurgicaux.Des images représentatives de l’aorte provenant de groupes non chirurgicaux et chirurgicaux le jour postopératoire 14 sont affichées. Cette technique a servi d’outil potentiel pour aider à disséquer la physiopathologie du triple A et aider à la découverte de nouvelles cibles thérapeutiques potentielles.

mouse-abdominal-aortic-aneurysm-model-induced-perivascular

Research

Recherche

JoVE Journal

Biology

Biologie

Cette vidéo montre comment provoquer un anévrisme aortique abdominal (AAA) chez des souris par perfusion intraluminale transitoires de l'élastase pancréatique porcine dans le segment sous-rénal de l'aorte abdominale. Le modèle a la possibilité d'ajouter bon aperçu du pathobiologie de AAA en raison de l'émergence des cultures transgéniques et des souris knockout de nombreux gènes.

Création d&#39;expérimental murin anévrismes aortiques abdominaux avec l&#39;élastase

Nous décrivons un protocole chirurgical pour induire uniformément les aneurysms aortiques thoraciques descendants robustes chez les souris. La procédure implique la thoracotomie gauche, l'exposition à l'aorte thoracique, et le placement d'une éponge imbibée d'élastase pancréatique porcine sur la paroi aortique.

Modèle chirurgical murine de l'élastase topique induit descendant l'aneurysm aortique thoracique

Ce protocole décrit un modèle murin d’anévrisme de l’aorte abdominale induit par le phosphate de calcium (AAA) pour étudier les caractéristiques pathologiques et les mécanismes moléculaires des AAA.

Modèle d’anévrisme de l’aorte abdominale de souris induit par le phosphate de calcium

Ce manuscrit présente un protocole permettant d’établir un modèle d’anévrisme de l’aorte abdominale chez la souris à l’aide de chlorure de calcium et d’élastase, combinant les avantages des méthodes de modélisation précédentes. Ce modèle peut être utilisé pour étudier les mécanismes physiopathologiques sous-jacents aux anévrismes de l’aorte abdominale.

Un modèle d’anévrisme de l’aorte abdominale chez la souris par infiltration péri-adventice de chlorure de calcium et d’élastase

Ce protocole décrit une approche chirurgicale méthodique pour modéliser les anévrismes avancés de l’aorte abdominale chez la souris en combinant l’application directe d’élastase sur l’aorte infrarénale et l’administration de ß-aminopropionitrile dans l’eau de boisson.

Modélisation avancée de l’anévrisme de l’aorte abdominale chez la souris par l’association de l’élastase topique et du ß-aminopropionitrile oral

Le présent protocole décrit une méthode chirurgicale standardisée pour l’induction d’anévrismes carotidiens dans un modèle murin par une seule opération chirurgicale.

Un modèle murin de la formation d’un anévrisme carotidien

Ce protocole fournit une méthode reproductible et fiable pour induire des anévrismes de l’aorte abdominale (AAA) chez des souris C57BL/6 en utilisant la sensibilisation à l’elastine et l’application d’élastase périvasculaire, en tant que modèle AAA incorporant une composante immunosensibilisation.

Création fiable d’un modèle d’anévrisme aortique abdominal murien utilisant la sensibilisation à l’élastine et l’élastase périvasculaire

Modèles animaux orthotopique de cancer ovarien de reproduire la maladie humaine de mieux et donc améliorer notre compréhension de la progression du cancer et de la réponse tumorale au traitement. Un modèle de souris reçoit une injection intrabursal de la luciférase cellules tumorales exprimant l'ovaire. Le traitement est administré par gavage. La croissance tumorale est contrôlée...

L&#39;imagerie in vivo et des traitements thérapeutiques dans un modèle de souris orthotopique de cancer des ovaires

Génération induites pluripotentes (cellules souches iPSC) lignes produit des lignes de différentes potentiel de développement, même quand ils passent des tests standard pour la pluripotence. Nous décrivons ici un protocole de produire des souris provenant entièrement de iPSCs, qui définit les lignes iPSC comme possédant la pluripotence...

Génération de souris dérivées de cellules souches pluripotentes induites

La nature des interactions entre les cellules souches hématopoïétiques et progénitrices (HSPCs) et les niches de la moelle osseuse est mal comprise. Mesure des modifications de matériel et un protocole d'acquisition en plusieurs étapes permettent l'utilisation de deux photons et la microscopie confocale à l'image ex vivo des HSPCs marqués hébergés dans les zones de la moelle osseuse, les interactions de suivi et mouvement.

In Vivo suivi 4-Dimensional de hématopoïétiques cellules souches et progénitrices adultes dans la voûte du crâne de souris de moelle osseuse

Découvrez un protocole chirurgical standardisé pour induire un anévrisme de l'aorte abdominale chez la souris par application périvasculaire d'élastase. Cette méthode offre une forte reproductibilité et des coûts réduits pour la recherche cardiovasculaire.

Modèle d’anévrisme de l’aorte abdominale de souris induit par l’application périvasculaire d’élastase

Explorer plus de vidéos