Name: Établir les organoïdes de la dent humaine comme un outil puissant pour la recherche mécaniste et la thérapie régénérative (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-04-13T13:45:00.000+00:00
Duration: 11 min 2 s
Description: Découvrez la culture d'organoides dentaires humains pour étudier la biologie des cellules souches épithéliales et la formation de l'émail. Ce modèle robuste permet d'explorer la régénération dentaire et les cibles thérapeutiques.

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Nous sommes reconnaissants à tous les membres du personnel de la chirurgie buccale et maxillo-faciale (MKA) de l’UZ Leuven, ainsi qu’aux patients, pour leur aide inestimable dans la collecte des troisièmes molaires fraîchement extraites. Nous tenons également à remercier la Dre Reinhilde Jacobs et la Dre Elisabeth Tijskens pour leur aide dans la collecte d’échantillons. Ce travail a été soutenu par des subventions de la KU Leuven (BOF) et de FWO-Flanders (G061819N). L.H. est titulaire d’un doctorat FWO (1S84718N).

<ol><li>Yu, T., Klein, O. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+cellular+mechanisms+of+tooth+development%2C+homeostasis+and+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Development+%28Cambridge%29%22%5BJournal%5D)">Molecular and cellular mechanisms of tooth development, homeostasis and repair.</a> Development (Cambridge). 147 (2), (2020).</li>
<li>Arrow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+enamel+defects%2C+caries+experience+and+oral+health-related+quality+of+life%3A+a+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Australian+Dental+Journal%22%5BJournal%5D)">Dental enamel defects, caries experience and oral health-related quality of life: a cohort study.</a> Australian Dental Journal. 62 (2), 165-172 (2017).</li>
<li>Mitsiadis, T. A., Orsini, G., Jimenez-Rojo, L. Dental Stem Cells for Tooth Regeneration. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMitsiadis%2C+TA+%22Dental+Stem+Cells%3A+Regenerative+Potential.+Stem+Cell+Biology+and+Regenerative+Potential.+Stem+Cell+Biology+and+Regenerative+Medicine%22">Dental Stem Cells: Regenerative Potential. Stem Cell Biology and Regenerative Potential. Stem Cell Biology and Regenerative Medicine</a>. Zavan, B., Bressan, E. , Humana Press. Cham. (2016).</li>
<li>Mitsiadis, T. A., Orsini, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Editorial%3A+a+new+era+in+dentistry%3A+stem+cell-based+approaches+for+tooth+and+periodontal+tissue+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Editorial: a new era in dentistry: stem cell-based approaches for tooth and periodontal tissue regeneration.</a> Frontiers in Physiology. 7, 357(2016).</li>
<li>Miran, S., Mitsiadis, T. A., Pagella, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innovative+dental+stem+cell-based+research+approaches%3A+the+future+of+dentistry%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+International%22%5BJournal%5D)">Innovative dental stem cell-based research approaches: the future of dentistry.</a> Stem Cells International. 2016, 7231038(2016).</li>
<li>Shinmura, Y., Tsuchiya, S., Hata, K. I., Honda, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quiescent+epithelial+cell+rests+of+malassez+can+differentiate+into+ameloblast-like+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Quiescent epithelial cell rests of malassez can differentiate into ameloblast-like cells.</a> Journal of Cellular Physiology. 217 (3), 728-738 (2008).</li>
<li>Davis, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+the+epithelial+cell+rests+of+Malassez+on+the+bicentennial+of+their+description%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Veterinary+Dentistry%22%5BJournal%5D)">A review of the epithelial cell rests of Malassez on the bicentennial of their description.</a> Journal of Veterinary Dentistry. 35 (4), 290-298 (2018).</li>
<li>Athanassiou-Papaefthymiou, M., Papagerakis, P., Papagerakis, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+human+adult+epithelial+stem+cells+from+the+periodontal+ligament%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of human adult epithelial stem cells from the periodontal ligament.</a> Journal of Dental Research. 94 (11), 1591-1600 (2015).</li>
<li>Kim, G. -H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+and+establishment+of+dental+epithelial-like+stem+cells+derived+from+human+ESCs+and+iPSCs%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Differentiation and establishment of dental epithelial-like stem cells derived from human ESCs and iPSCs.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (12), 1-16 (2020).</li>
<li>Nam, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+Hertwig%27s+epithelial+root+sheath%2F+epithelial+rests+of+malassez+cell+line+from+human+periodontium%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules+and+Cells%22%5BJournal%5D)">Establishment of Hertwig's epithelial root sheath/ epithelial rests of malassez cell line from human periodontium.</a> Molecules and Cells. 37 (7), 562-567 (2014).</li>
<li>Nam, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+profile+of+the+stem+cell+markers+in+human+hertwig%27s+epithelial+root+sheath%2FEpithelial+rests+of+Malassez+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules+and+Cells%22%5BJournal%5D)">Expression profile of the stem cell markers in human hertwig's epithelial root sheath/Epithelial rests of Malassez cells.</a> Molecules and Cells. 31 (4), 355-360 (2011).</li>
<li>Tsunematsu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+odontogenic+epithelial+cells+derived+from+epithelial+rests+of+Malassez+possess+stem+cell+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Investigation%3B+A+Journal+of+Technical+Methods+and+Pathology%22%5BJournal%5D)">Human odontogenic epithelial cells derived from epithelial rests of Malassez possess stem cell properties.</a> Laboratory Investigation; A Journal of Technical Methods and Pathology. 96 (10), 1063-1075 (2016).</li>
<li>Artegiani, B., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+and+application+of+3D-organoid+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Molecular+Genetics%22%5BJournal%5D)">Use and application of 3D-organoid technology.</a> Human Molecular Genetics. 27 (2), 99-107 (2018).</li>
<li>Boretto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+organoids+from+endometrial+disease+capture+clinical+heterogeneity+and+are+amenable+to+drug+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Patient-derived organoids from endometrial disease capture clinical heterogeneity and are amenable to drug screening.</a> Nature Cell Biology. 21 (8), 1041-1051 (2019).</li>
<li>Cox, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids+from+pituitary+as+a+novel+research+model+toward+pituitary+stem+cell+exploration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Organoids from pituitary as a novel research model toward pituitary stem cell exploration.</a> Journal of Endocrinology. 240 (2), 287-308 (2019).</li>
<li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+Lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).</li>
<li>Boretto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+organoids+from+mouse+and+human+endometrium+showing+endometrial+epithelium+physiology+and+long-term+expandability%5BTitle%5D)+AND+%22Development+%28Cambridge%29%22%5BJournal%5D)">Development of organoids from mouse and human endometrium showing endometrial epithelium physiology and long-term expandability.</a> Development (Cambridge). 144 (10), 1775-1786 (2017).</li>
<li>Schutgens, F., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+organoids%3A+tools+for+understanding+biology+and+treating+diseases%29%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Human organoids: tools for understanding biology and treating diseases).</a> Annual Review of Pathology. 15, 211-234 (2020).</li>
<li>Hemeryck, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids+from+human+tooth+showing+epithelial+stemness+phenotype+and+differentiation+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+Molecular+Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">Organoids from human tooth showing epithelial stemness phenotype and differentiation potential.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 79 (3), 153(2022).</li>
<li>Gao, X., Wu, Y., Liao, L., Tian, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+organoids%3A+progress+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">Oral organoids: progress and challenges.</a> Journal of Dental Research. 100 (5), 454-463 (2021).</li>
<li>Binder, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+strategies+for+expansion+of+tooth+epithelial+stem+cells+and+ameloblast+generation%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Novel strategies for expansion of tooth epithelial stem cells and ameloblast generation.</a> Scientific Reports. 10 (1), 4963(2020).</li>
<li>Xiong, J., Mrozik, K., Gronthos, S., Bartold, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+cell+rests+of+malassez+contain+unique+stem+cell+populations+capable+of+undergoing+epithelial-mesenchymal+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+and+Development%22%5BJournal%5D)">Epithelial cell rests of malassez contain unique stem cell populations capable of undergoing epithelial-mesenchymal transition.</a> Stem Cells and Development. 21 (11), 2012-2025 (2012).</li>
<li>Luan, X., Ito, Y., Diekwisch, T. G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+and+development+of+Hertwig%27s+epithelial+root+sheath%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Evolution and development of Hertwig's epithelial root sheath.</a> Developmental Dynamics. 235 (5), 1167-1180 (2006).</li>
<li>Fukumoto, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+into+the+functions+of+enamel+matrices+in+calcified+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Japanese+Dental+Science+Review%22%5BJournal%5D)">New insights into the functions of enamel matrices in calcified tissues.</a> Japanese Dental Science Review. 50 (2), 47-54 (2014).</li>
<li>Consolaro, A., Consolaro, M. F. M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ERM+functions%2C+EGF+and+orthodontic+movement+or+Why+doesn%27t+orthodontic+movement+cause+alveolodental+ankylosis%5BTitle%5D)+AND+%22Dental+Press+Journal+of+Orthodontics%22%5BJournal%5D)">ERM functions, EGF and orthodontic movement or Why doesn't orthodontic movement cause alveolodental ankylosis.</a> Dental Press Journal of Orthodontics. 15 (2), 24-32 (2010).</li>
<li>Guajardo, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemical+localization+of+epidermal+growth+factor+in+cat+paradental+tissues+during+tooth+movement%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Orthodontics+and+Dentofacial+Orthopedics%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemical localization of epidermal growth factor in cat paradental tissues during tooth movement.</a> American Journal of Orthodontics and Dentofacial Orthopedics. 118 (2), 210-219 (2000).</li>
<li>Watanabe, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+ROCK+inhibitor+permits+survival+of+dissociated+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">A ROCK inhibitor permits survival of dissociated human embryonic stem cells.</a> Nature Biotechnology. 25 (6), 681-686 (2007).</li>
<li>Gonçalves, J., Sasso-Cerri, E., Cerri, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+death+and+quantitative+reduction+of+rests+of+Malassez+according+to+age%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Periodontal+Research%22%5BJournal%5D)">Cell death and quantitative reduction of rests of Malassez according to age.</a> Journal of Periodontal Research. 43 (4), 478-481 (2008).</li>
<li>Kim, J., Koo, B. -K., Knoblich, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+organoids%3A+Model+systems+for+human+biology+and+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Molecular+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Human organoids: Model systems for human biology and medicine.</a> Nature Reviews. Molecular Cell Biology. 21 (10), 571-584 (2020).</li>
<li>Razmi, M. T., Narang, T., Handa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ADULT+%28acro-dermato-ungual-lacrimal-tooth%29+syndrome%3A+a+case+report+from+India%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+Dermatology+Online+Journal%22%5BJournal%5D)">ADULT (acro-dermato-ungual-lacrimal-tooth) syndrome: a case report from India.</a> Indian Dermatology Online Journal. 9 (3), 194(2018).</li>
<li>Future Health Biobank. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://futurehealthbiobank.com/ch-en/">https://futurehealthbiobank.com/ch-en/</a> (2022).</li>
<li>Schreurs, R. R. C. E., Baumdick, M. E., Drewniak, A., Bunders, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+co-culture+of+human+intestinal+organoids+and+lamina+propria-derived+CD4%2B+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protocols%22%5BJournal%5D)">In vitro co-culture of human intestinal organoids and lamina propria-derived CD4+ T cells.</a> STAR Protocols. 2 (2), 100519(2021).</li>
<li>Fiorini, E., Veghini, L., Corbo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+cell+communication+in+cancer+with+organoids%3A+Making+the+complex+simple%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Modeling cell communication in cancer with organoids: Making the complex simple.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 8, 166(2020).</li>
<li>Gjorevski, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Designer+matrices+for+intestinal+stem+cell+and+organoid+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Designer matrices for intestinal stem cell and organoid culture.</a> Nature. 539 (7630), 560-564 (2016).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polyisocyanide+hydrogels+as+a+tunable+platform+for+mammary+gland+organoid+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Science%22%5BJournal%5D)">Polyisocyanide hydrogels as a tunable platform for mammary gland organoid formation.</a> Advanced Science. 7 (18), 2001797(2020).</li>
<li>Mollaki, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethical+challenges+in+organoid+use%5BTitle%5D)+AND+%22BioTech%22%5BJournal%5D)">Ethical challenges in organoid use.</a> BioTech. 10 (3), 12(2021).</li>
</ol>

L’auteur correspondant s’assure que tous les auteurs ont divulgué tous les conflits d’intérêts.

Ce protocole décrit la génération efficace et reproductible d’organoïdes à partir de la dent humaine. À notre connaissance, il s’agit de la première méthodologie permettant d’établir des organoïdes à concept actuel (épithéliaux) à partir de tissu dentaire humain. Les organoïdes sont extensibles à long terme et présentent un phénotype de tige épithéliale dentaire, dupliquant les DESC précédemment signalés dans le compartiment ERM du DF7. De plus, les organoïdes reproduisent les caractéristiques fon...

Les dents ont des rôles essentiels dans la mastication des aliments, la parole et le bien-être psychologique (image de soi). La dent humaine est constituée de tissus hautement minéralisés de densité et de dureté variables1. L’émail dentaire, le composant principal de la couronne dentaire, est le tissu le plus minéralisé du corps humain. Au cours de la formation de l’émail (amélogenèse), lorsque les dents se développent, les cellules souches épithéliales dentaires (DESC) se différencient en cellules formant l’émail (améloblastes). Une fois formé, l’émail est rarement réparé ou renouvelé en raison de la perte apoptotique des améloblastes au début de l’éruption dentaire1. La restauration du tissu de l’émail endommagé, causé par un traumatisme ou une maladie bactérienne, est actuellement effectuée à l’aide de matériaux synthétiques; cependant, ceux-ci sont troublés par des lacunes importantes telles que le microlaçage, l’ostéointégration et l’ancrage inférieurs, la durée de vie limitée et le manque de réparation entièrement fonctionnelle2. Par conséquent, une culture robuste et fiable de DESC humains ayant la capacité de générer des améloblastes et le potentiel de produire des tissus minéralisés serait un grand pas en avant dans le domaine de la régénération dentaire.
Les connaissances sur le phénotype des DESC humain et la fonction biologique sont rares 3,4,5. Fait intéressant, il a été proposé que des DESC de dents humaines existent dans les restes de cellules épithéliales de Malassez (ERM), des amas de cellules présents dans le follicule dentaire (DF), qui entoure les dents non percées, et restent présents dans le ligament parodontal autour de la racine une fois que la dent éclate1. Il a été constaté que les cellules ERM co-cultivées avec la pulpe dentaire se différencient en cellules de type améloblaste et génèrent des tissus semblables à l’émail6. Cependant, les études approfondies sur le rôle spécifique des cellules ERM dans la (re-)génération de l’émail ont été limitées en raison de l’absence de modèles d’étude fiables7. Les systèmes actuels de culture in vitro ERM sont entravés par une durée de vie limitée et une perte rapide de phénotype dans les conditions 2D standardutilisées 8,9,10,11,12. Par conséquent, un système in vitro traitable pour développer, étudier et différencier fidèlement les DESC humains est fortement nécessaire.
Au cours de la dernière décennie, une technique puissante pour cultiver des cellules souches épithéliales in vitro a été appliquée avec succès à plusieurs types de tissus épithéliaux (humains) pour étudier leur biologie ainsi que la maladie 13,14,15,16. Cette technologie permet aux cellules souches épithéliales tissulaires de se développer elles-mêmes en constructions cellulaires 3D (c’est-à-dire des organoïdes) lorsqu’elles sont ensemencées dans un échafaudage imitant la matrice extracellulaire (ECM) (typiquement, Matrigel) et cultivées dans un milieu défini répliquant la signalisation de niche de cellules souches et / ou l’embryogenèse du tissu. Les facteurs de croissance typiques nécessaires au développement organoïde comprennent le facteur de croissance épidermique (EGF) et les activateurs du site d’intégration MMTV (WNT) de type sans ailes 14,15,16. Les organoïdes résultants se caractérisent par une fidélité durable dans l’imitation des cellules souches épithéliales originales du tissu, ainsi que par une grande extensibilité tout en conservant leur phénotype et leurs propriétés fonctionnelles, surmontant ainsi la disponibilité souvent limitée des tissus humains primaires acquis à la clinique. Pour établir des organoïdes, l’isolement des cellules souches épithéliales du tissu hétérogène (c.-à-d. comprenant d’autres types de cellules telles que les cellules mésenchymateuses) avant la culture n’est pas nécessaire car les cellules mésenchymateuses ne s’attachent pas à l’ECM ou ne s’y développent pas, ce qui aboutit éventuellement à des organoïdes purement épithéliaux 13,16,17,18,19 . Cette technologie prometteuse et polyvalente a conduit au développement de nombreux modèles organoïdes à partir de divers tissus épithéliaux humains. Cependant, les organoïdes dérivés des dents humaines, précieux pour l’étude approfondie du développement, de la régénération et de la maladie des dents, n’ont pas encore été établis20,21. Nous avons récemment réussi à développer un tel nouveau modèle organoïde à partir de tissu DF de troisièmes molaires (dents de sagesse) extraites de patients adolescents19.
Nous décrivons ici le protocole pour développer des cultures organoïdes épithéliales à partir de la dent humaine adulte (c.-à-d. à partir du DF des troisièmes molaires) (Figure 1A). Les organoïdes résultants expriment des marqueurs de tige associés à ERM tout en étant extensibles à long terme. Curieusement, contrairement à la plupart des autres modèles organoïdes, l’EGF généralement nécessaire est redondant pour un développement et une croissance organoïdes robustes. Fait intéressant, les organoïdes de la tige présentent des propriétés de différenciation des améloblastes, imitant ainsi les caractéristiques et les processus ERM / DESC se produisant in vivo. Le nouveau modèle organoïde unique décrit ici permet d’explorer la biologie, la plasticité et la capacité de différenciation du DESC et ouvre la porte aux premiers pas vers des approches de régénération des dents.

<table><tbody><tr><td>1,5 mL Tube à centrifuger</td><td>Eppendorf</td><td>30120.086</td><td></td></tr><tr><td>15 mL Tube à centrifuger</td><td>Corning</td><td>430052</td><td></td></tr><tr><td>2-Mercaptoethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M-6250</td><td></td></tr><tr><td>Plaques à fond plat 48 puits</td><td>Corning</td><td>3548</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Tube à centrifuger</td><td>Corning</td><td>430290</td><td></td></tr><tr><td>A83-01</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td>SML0788</tr><tr><td>Agarose</td><td>Lonza</td><td>50004</td><td></td></tr><tr><td>Albumine bovine (qualité culture cellulaire)</td><td>Serva</td><td>47330.03</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps AMELX</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-365284</td><td></td></tr><tr><td>Amphotéricine B</td><td>Gibco</td><td>15200018</td><td></td></tr><tr><td>B27 (sans vitamine A)</td><td>Gibco</td><td>12587-010</td><td></td></tr><tr><td>Cassette</td><td>VWR</td><td></td><td></td>7202191</tr><tr><td>Catalase du foie bovin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C100</td><td></td></tr><tr><td>CD44</td><td>anticorps Abcam</td><td>ab34485</td><td></td></tr><tr><td>Passoire cellulaire, 40 & micro ; m</td><td>Falcon</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>Toxine cholérique</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C8052</td><td></td></tr><tr><td>Acide citrique</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C0759</td><td></td></tr><tr><td>CK14</td><td>anticorps Thermo Fisher Scientific</td><td>MA5-11599</td><td></td></tr><tr><td>Colgénase IV</td><td>Gibco</td><td>17104-019</td><td></td></tr><tr><td>Verre de couverture</td><td>VWR</td><td>6310146</td><td></td></tr><tr><td>Cryobox</td><td>Thermo Scientific</td><td>5100-0001</td><td></td></tr><tr><td>Cryovial</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>375353</td><td></td></tr><tr><td>Diméthylsulfoxyde (DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Dispase II</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D4693</td><td></td></tr><tr><td>DMEM 1:1 F12 sans Fe</td><td>Invitrogen</td><td>074-90715A</td><td></td></tr><tr><td>DMEM en poudre haute teneur en glucose</td><td>Gibco</td><td>52100039</td><td></td></tr><tr><td>Dnase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5025-15KU</td><td></td></tr><tr><td>Sérum d’âne</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9663 - 10ML</td><td></td></tr><tr><td>Station d’encastrement, 220 à 240 Vac</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12587976</td><td></td></tr><tr><td>Éthanol absolu, &ge ; 99,8 % (EtOH)</td><td>Fisher Chemical</td><td>E/0650DF/15</td><td></td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin (FBS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F7524</td><td></td></tr><tr><td>FGF10</td><td>Peprotech</td><td>100-26</td><td></td></tr><tr><td>FGF2 (= FGF de base)</td><td>R& D Systems</td><td>234-FSE-025</td><td></td></tr><tr><td>FGF8</td><td>Peprotech</td><td>AF-100-25</td><td></td></tr><tr><td>GenElute Mammaliam Total RNA Miniprep Kit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>RTN350-1KT</td><td>Comprend 1 % de &beta ;-mercaptoéthanol dissous dans un tampon de lyse</td></tr><tr><td>Pipette Pasteur en verre</td><td>Niko Mechanisms</td><td>170-40050</td><td></td></tr><tr><td>Glycine</td><td>VWR</td><td>101194M</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H4034</td><td></td></tr><tr><td>IGF-1</td><td>PeproTech</td><td>100-11</td><td></td></tr><tr><td>InSolution Y-27632 (inhibiteur de ROCK, RI)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>688001</td><td></td></tr><tr><td>Insuline du pancréas bovin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I6634</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps ITGA6</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HPA012696</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamine</td><td>Gibco</td><td>25030024</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel (à facteur de croissance réduit ; sans rouge de phénol)</td><td>Lame</td><td>de microscope 15505739</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Corning Thermo Fisher Scientific</td><td>J1800AMNZ</td><td></td></tr><tr><td>Millex-GV Unité de filtre à seringue, 0,22 &mu ; m</td><td>Millipore</td><td>SLGV033R</td><td></td></tr><tr><td>Minimum essentiel moyen aigle (&alpha ; MEM)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M4526</td><td></td></tr><tr><td>souris IgG (Alexa 555) anticorps secondaire</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-31570</td><td></td></tr><tr><td>N2</td><td>Gibco</td><td>17502-048</td><td></td></tr><tr><td>N-acétyl L-cystéine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7250</td><td></td></tr><tr><td>Nicotinamide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N0636</td><td></td></tr><tr><td>Noggin</td><td>PeproTech</td><td>120-10C</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps P63</td><td>Abcam</td><td>ab124762</td><td></td></tr><tr><td>Stylo Pap</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z377821-1EA</td><td>Stylo de marquage</td></tr><tr><td>Paraformaldéhyde (PFA), 16 %</td><td>Merck</td><td>8.18715</td><td></td></tr><tr><td>Pénicilline G sel de sodium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3032</td><td></td></tr><tr><td>Pénicilline-streptomycine (Pen/Streptomycine)</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Boîte</td> <td>de PétriCorning</td><td>353002</td><td></td></tr><tr><td>Pipette saline tamponnée au phosphate (PBS)</td><td>Gibco</td><td>10010-015</td><td></td></tr><tr><td>(P20, P200, P1000)</td><td>Eppendorf ou autres</td><td>2231300006</td><td></td></tr><tr><td>Pipette de transfert en plastique (3.5&nbsp ; mL)</td><td>Sarstedt</td><td>86.1171.001</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps secondaire IgG de lapin (Alexa 488)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A21206</td><td></td></tr><tr><td>RSPO1</td><td>PeproTech</td><td>120-38</td><td></td></tr><tr><td>SB202190 (p38i)</td><td>Biotechne (Tocris)</td><td>1264</td><td></td></tr><tr><td>Scalpel (lame chirurgicale)</td><td>Swann-Morton</td><td>207</td><td></td></tr><tr><td>SHH</td><td>R& D Systems</td><td>464-SH-200</td><td></td></tr><tr><td>Moules en silicone (Bloc chauffant)</td><td>VWR</td><td>720-1918</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de sodium (NaCl)</td><td>BDH</td><td>102415K</td><td></td></tr><tr><td>Hydrogénocarbonate de sodium (NaHCO3)</td><td>Merck</td><td>106329</td><td></td></tr><tr><td>Pyruvate de sodium (C3H3NaO3)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-5280</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps SOX2</td><td>Abcam</td><td>ab92494</td><td></td></tr><tr><td>StepOnePlus</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td></td><td>Système de PCR en temps réel</td></tr><tr><td>Stericup-GP, 0.22 &micro ; m</td><td>Millipore</td><td>SCGPU02RE</td><td></td></tr><tr><td>Steriflip-GP Unité de filtration supérieure pour tube de centrifugation stérile, 0,22 &mu ; m</td><td>Millipore</td><td>SCGP00525</td><td></td></tr><tr><td>Stérile 1000 &mu ; L pointes de pipette avec filtre</td><td>Greiner</td><td>740288</td><td></td></tr><tr><td>Stérile 20 &mu ; L pointes de pipette avec filtre</td><td>Greiner</td><td>774288</td><td></td></tr><tr><td>Stérile 200 &mu ; Pointes de pipette en L avec et sans filtre</td><td>Greiner</td><td>739288</td><td></td></tr><tr><td>Stérile H2O</td><td>Fresenius</td><td>B230531</td><td></td></tr><tr><td>Sel de sulfate de streptomycine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S6501</td><td></td></tr><tr><td>Superscript III supermix de synthèse premier brin</td><td>Invitrogen</td><td>11752-050</td><td>Kit de transcription inverse</td></tr><tr><td>Processeur de tissus</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td>12505356</tr><tr><td>Transferrin</td><td>Serva</td><td>36760.01</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>T8787-50ML</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE express</td><td>Gibco</td><td>12605-010</td><td></td></tr><tr><td>Vectashield support de montage+DAPI</td><td>Labconsult NV</td><td>H-1200</td><td>Milieu de montage anti-décoloration avec DAPI</td></tr><tr><td>WNT3a</td><td>Biotechne (Tocris)</td><td>5036-WN-500</td><td></td></tr><tr><td>Xylènes, 99 %, pour la biochimie et l’histologie</td><td>VWR</td><td>2,89,75,325</td><td></td></tr></tbody></table>

Établir les organoïdes de la dent humaine comme un outil puissant pour la recherche mécaniste et la thérapie régénérative

Establishing Organoids from Human Tooth as a Powerful Tool Toward Mechanistic Research and Regenerative Therapy

Les dents sont d’une importance clé dans la vie non seulement pour la mastication des aliments et la parole, mais aussi pour le bien-être psychologique. Les connaissances sur le développement des dents humaines et la biologie sont rares. En particulier, on ne sait pas grand-chose sur les cellules souches épithéliales de la dent et leur fonction. Nous avons réussi à développer un nouveau modèle organoïde à partir de tissu dentaire humain (c.-à-d. follicule dentaire, isolé à partir de dents de sagesse extraites). Les organoïdes sont extensibles de manière robuste et à long terme et récapitulent le compartiment proposé des cellules souches épithéliales de la dent humaine en termes d’expression des marqueurs ainsi que d’activité fonctionnelle. En particulier, les organoïdes sont capables de déployer un processus de différenciation des améloblastes comme cela se produit in vivo au cours de l’amélogenèse. Ce modèle organoïde unique fournira un outil puissant pour étudier non seulement le développement des dents humaines, mais aussi la pathologie dentaire, et pourrait ouvrir la voie à une thérapie régénérative des dents. Remplacer les dents perdues par une dent biologique basée sur ce nouveau modèle organoïde pourrait être une alternative attrayante à l’implantation standard actuelle de matériaux synthétiques.

Développement organoïde dentaire Nous fournissons un protocole détaillé pour établir des cultures organoïdes à partir de tissu DF humain acquis à la suite d’une extraction de dents de sagesse (Figure 1A). Le DF isolé est dissocié enzymatiquement et mécaniquement. Les cellules obtenues sont cultivées dans le BMM dans des milieux qui ont été définis empiriquement pour un développement et une croissance organoïdes optimaux (milieu organoïde de la dent; TOM)...

Nous présentons un protocole pour développer des cultures organoïdes épithéliales à partir de dents humaines. Les organoïdes sont solidement extensibles et récapitulent les cellules souches épithéliales de la dent, y compris leur capacité de différenciation des améloblastes. Le modèle organoïde unique fournit un outil prometteur pour étudier la biologie dentaire humaine (cellules souches) avec des perspectives pour les approches régénératrices des dents.

Teeth are of key importance in life not only for food mastication and speech but also for psychological well-being. Knowledge on human tooth development ...

Ce nouveau modèle organoïde dérivé d’une dent humaine fournit le premier outil puissant pour déchiffrer la biologie des cellules souches dentaires humaines avec des perspectives d’applications régénératrices dentaires. À l’heure actuelle, ce modèle organoïde dentaire est le seul outil disponible pour développer et développer de manière fiable et robuste les cellules souches épithéliales des dents humaines. Ce protocole organoïde peut être appliqué pour établir des modèles de recherche, non seulement à partir de dents saines, mais aussi malades telles que les tumeurs dentaires et l’impact bactérien.L’exploration de tels modèles de maladies pourrait permettre de découvrir de nouvelles cibles thérapeutiques. Ce modèle organoïde est très utile pour déchiffrer le processus de formation de l’émail dans la dent humaine et peut permettre la construction de parties dentaires telles que l’émail à des fins génératives. Lara Hemeryck, doctorante dans mon groupe de recherche, fera la démonstration de la procédure.Pour commencer, collectez les troisièmes molaires avec les follicules dentaires associés dans le milieu de collecte placé sur la glace et transférez le contenu des tubes dans une boîte de Pétri. Tenez la dent avec une pince à épiler et isolez soigneusement les follicules dentaires à l’aide d’une lame chirurgicale. Lavez le sang restant des follicules dentaires en plaçant brièvement les tissus des follicules dentaires dans le premier puits d’éthanol à 70% pendant 20 secondes, puis transférez-le dans la plaque d’éthanol de mort suivante pendant 20 secondes et plus loin dans le troisième puits d’éthanol.Continuez à le rincer trois fois dans des puits salins tamponnés au phosphate, puis rincez les follicules dentaires dans les trois puits de milieu de collecte des follicules dentaires restants pendant un maximum de 20 minutes au total. Transférer les follicules dentaires rincés dans une nouvelle boîte de Pétri. Coupez un petit morceau de l’un des follicules dentaires pour une fixation au paraformaldéhyde et conservez-le dans un tube de microcentrifugation contenant 500 microlitres de milieu de collecte pendant un maximum de six heures.Hachez le reste des follicules dentaires en petits morceaux et transférez-les dans un tube de 15 millilitres contenant quatre millilitres de milieu de dissociation préavertissé, puis incubez le tube à 37 degrés Celsius pendant deux heures au bain-marie. Toutes les 15 minutes, pipettez le milieu de dissociation des follicules dentaires et mélangez de haut en bas à l’aide d’une pipette en verre pour accélérer la désintégration des tissus. Lorsque des morceaux de follicules dentaires ne sont plus observés, procédez à la dissociation à l’aide d’une pipette Pasteur rétrécie et polie au feu.En attendant, préparez 10 millilitres de milieu A contenant 100 microlitres de DNase et ajoutez cinq millilitres de ce milieu à chaque tube avec des follicules dentaires dissociés. Incuber pendant une minute à température ambiante. Rincez le filtre avec un millilitre de milieu A.Combinez les plusieurs tubes de follicules dentaires dissociés d’un patient à cette étape et centrifugez la suspension cellulaire filtrée à 200 fois g pendant 10 minutes à 4 degrés Celsius.Retirez le surnageant. Remettre la pastille dans un millilitre de milieu défini sans sérum et transférer la suspension cellulaire dans un tube de microcentrifugation de 1,5 millilitre. Calculez la concentration cellulaire à l’aide d’un compteur cellulaire automatisé et calculez le nombre de puits qui peuvent être ensemencés.Le mélange final est composé d’une suspension cellulaire et d’une matrice de membrane basale dans un rapport de 30 à 70. Retirez la quantité appropriée de surnageant et remettez-la en suspension lentement pour obtenir un rapport de 70 à 30 de matrice de membrane basale glacée à la suspension cellulaire pour le placage. Une fois remis en suspension dans la matrice de la membrane basale, gardez le tube de microcentrifugeuse sur la glace pour éviter la solidification de la matrice de la membrane basale.Pipettez les 20 microlitres de gouttelettes de matrice de membrane basale au centre de la plaque de culture préchauffée de 48 puits. Retournez la plaque à l’envers et placez-la pour la solidifier dans un incubateur à 1,9% de dioxyde de carbone à 37 degrés Celsius pendant 20 minutes. Ajouter l’inhibiteur de kinase rho-associé et l’amphotéricine B au milieu organoïde de la dent et préchauffer le milieu dans un bain-marie de 37 degrés Celsius.Prenez la plaque de 48 puits de l’incubateur. Placez-le à la verticale et ajoutez 250 microlitres du milieu préaverti préparé à chaque puits avec une gouttelette de matrice de membrane basale contenant les cellules et retournez la plaque à l’incubateur de dioxyde de carbone. Pour rafraîchir le support, inclinez la plaque à un angle de 45 degrés.Retirez doucement le milieu précédent, tout en évitant de toucher la gouttelette de la matrice de la membrane basale et ajoutez 250 microlitres de nouveau milieu organoïde dentaire préavertis tous les deux à trois jours. Pour effectuer le passage des organoïdes, retirez le milieu des puits avec des organoïdes et mettez en commun jusqu’à quatre puits confluents. Pour recueillir les organoïdes, ajoutez 400 microlitres de milieu défini sans sérum glacé par puits directement sur la gouttelette de matrice membranaire et pipetez à plusieurs reprises le milieu de haut en bas jusqu’à ce que la gouttelette entière soit délogée.Si les puits sont regroupés, transférez les 400 microlitres du premier puits au suivant pour déloger les organoïdes contenant des gouttelettes. Transférer l’ensemble organoïde délogé dans un tube de microcentrifugation de 1,5 microlitre et répéter l’ajout d’un milieu défini sans sérum jusqu’à ce que toutes les structures organoïdes soient collectées dans les puits. Centrifugez-le à 200 fois g pendant cinq minutes à 4 degrés Celsius.Retirez le surnageant du tube de centrifugeuse et remettez en suspension la pastille dans une aliquote préaverdie de TrypLE Express. Ajouter 400 microlitres de milieu défini sans sérum glacé pour inactiver l’enzyme et centrifuger à 200 fois g pendant cinq minutes à 4 degrés Celsius. Retirez le surnageant.Pré-enduire une pointe avec un milieu défini sans sérum glacé et re-suspendre la pastille organoïde à l’état stérile. Remettez la pastille dans 200 microlitres de sérum glacé sans milieu défini pour la méthode à faible passage. Poussez l’embout de la pipette complètement vidé contre le fond du tube de microcentrifugation pour réduire son diamètre.Pipette de haut en bas pendant cinq minutes pour perturber mécaniquement les organoïdes. Pour la méthode de passage plus élevé, remettez en suspension la pastille dans 700 microlitres de milieu défini sans sérum glacé avec une pointe P1000. Ajoutez une pointe P200 à cette pointe P1000 et pré-enrobez avec un milieu défini sans sérum glacé.Empêchez la formation de bulles d’air en ajustant le réglage du volume de la pipette. Aspirez au moins 90% du volume moyen avec des organoïdes et pipette de haut en bas pendant cinq minutes pour perturber mécaniquement les organoïdes. Les organoïdes se développent généralement deux semaines après l’ensemencement des cellules folliculaires dentaires.Les organoïdes sont extensibles à long terme jusqu’à 11 passages. L’ensemencement d’environ 20 000 cellules par gouttelette de matrice de membrane basale donne une densité optimale d’organoïdes, tandis que l’ensemencement d’un nombre plus élevé de cellules conduit à une excroissance organoïde sous-optimale avec des organoïdes similaires à une densité trop élevée en raison d’un espace insuffisant pour se développer. Les organoïdes développés montrent un aspect dense et contiennent des cellules présentant un rapport nucléocytoplasmique élevé.De plus, les organoïdes expriment le marqueur ERM cytokératine 14 confirmant leur origine épithéliale et d’autres marqueurs ERM proposés, tels que P63, CD44 et intégrine alpha-6. Les organoïdes expriment SOX2, un marqueur DESC bien connu chez la souris. Fait intéressant, le composant principal de la matrice de l’émail, l’amélogénine, est également exprimé dans les organoïdes.Les organoïdes conservent leur phénotype de tige ERMM pendant le passage, comme le montre l’expression stable des marqueurs. Pour une croissance optimale des organoïdes à long terme, il est essentiel d’utiliser les méthodes de passage recommandées ou les méthodes de passage bas ou les méthodes de passage supérieur. Une fois formés, les organoïdes peuvent être utilisés pour examiner plus avant le processus d’amélogenèse et le dépôt de matrice d’émail actuellement pas atteint dans la recherche en dentisterie.Cette technique permet d’explorer la biologie des cellules souches épithéliales dentaires, le processus de formation de l’émail et l’interaction avec le mésenchyme dentaire, une interaction essentielle à la formation correcte des dents.

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Research

Recherche

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologie du développement

L'incisive de la souris en croissance continue fournit un modèle pour l'étude de renouvellement des tissus dentaires à partir de cellules souches épithéliales dentaires (DESCs). Un système solide de façon cohérente et fiable obtention de ces cellules de l'incisive et leur expansion in vitro est rapporté ici.

Isolement et culture des cellules souches épithéliales dentaire de l&#39;adulte de souris Incisive

Ce protocole décrit le génie génétique transitoire dentaire des cellules souches extraites du follicule dentaire humaine. La stratégie appliquée modification non viraux peut-être devenir une base pour l’amélioration des produits thérapeutiques des cellules souches.

Isolement, caractérisation et axée sur les micro-ARN de la Modification génétique des cellules souches humaines follicule dentaire

Nous décrivons l’isolement, la dispersion et le placage des cellules primaires de pulpe dentaire (DP) avec les neurones trigéminaux (TG) cultivés au-dessus des filtres transwell. Les réponses cellulaires des cellules DP peuvent être analysées avec l’immunofluorescence ou l’analyse d’ARN/protéine. L’immunofluorescence des marqueurs neuronaux avec la microscopie confocale permet l’analyse des réponses de excroissance neurite.

Une méthode de co-culture pour étudier la croissance de la neurite en réponse aux signaux dentaires de paracrine de pulpe

La méthode de culture d’organes de type Trowell a été utilisée pour démêler les réseaux de signalisation complexes qui régissent le développement des dents et, plus récemment, pour étudier la régulation impliquée dans les cellules souches de l’incisive de souris en croissance continue. Les modèles animaux fluorescents-rapporteurs et les méthodes d’imagerie en direct facilitent les analyses approfondies des cellules souches dentaires et de leur microenvironnement de niche spécifique.

Utilisation de la culture d’organes de type Trowell pour étudier la régulation des cellules souches dentaires

Ce protocole présente une méthode pour la culture et la croissance 3D de cellules de type améloblaste en microgravité afin de maintenir leur forme allongée et polarisée ainsi que l’expression protéique spécifique de l’émail. Les conditions de culture pour la culture de constructions d’ingénierie parodontale et d’organes pulmonaires en microgravité sont également décrites.

Propagation de cellules et d’organes dentaires et respiratoires en microgravité

Le follicule dentaire contient une population épithéliale et des cellules mésenchymateuses. La population épithéliale a été sélectionnée parmi la population hétérogène de cellules folliculaires dentaires en fournissant un milieu de culture distinct. Les cellules épithéliales ont survécu et ont formé des colonies dans un milieu sans sérum.

Isolement des cellules épithéliales du follicule dentaire humain

Ce protocole décrit les étapes clés pour générer et caractériser les organoïdes 3D murins oraux-œsophagiens qui représentent les lésions de carcinome épidermoïde normal, prénéoplasique et épidermoïde induites par cancérogenèse chimique.

Modélisation du carcinome épidermoïde bucco-œsophagien dans les organoïdes 3D

L’imagerie en direct ex vivo est une technique puissante pour étudier les processus dynamiques des mouvements et des interactions cellulaires dans les tissus vivants. Nous présentons ici un protocole qui met en œuvre la microscopie à deux photons pour suivre en direct les cellules épithéliales dentaires dans des incisives de souris adultes entières en culture.

Utilisation de l’imagerie en direct ex vivo pour étudier les divisions et les mouvements cellulaires au cours du renouvellement dentaire de la souris

Ce protocole présente une méthode de génération d’organoïdes vasculaires à l’aide de cellules souches pluripotentes humaines.

Génération d’organoïdes vasculaires à partir de cellules souches pluripotentes induites par l’homme

Un exemple de thérapie génique adénovirale dans les cornées cultivées d’organes diabétiques humains est présenté vers la normalisation du retard de cicatrisation des plaies et une expression nettement réduite des marqueurs des cellules souches épithéliales dans ces cornées. Il décrit également l’optimisation de ce processus dans les cultures épithéliales limbiques enrichies en cellules souches.

Adénovirus thérapie génique diabétique Kératopathie: Effets sur la cicatrisation des plaies et des cellules souches Marker Expression dans Human cornées Organ-culture et de cellules épithéliales limbiques

Découvrez la culture d'organoides dentaires humains pour étudier la biologie des cellules souches épithéliales et la formation de l'émail. Ce modèle robuste permet d'explorer la régénération dentaire et les cibles thérapeutiques.

Établir les organoïdes de la dent humaine comme un outil puissant pour la recherche mécaniste et la thérapie régénérative

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