La sensibilité de la membrane mitochondriale interne au Na+ révèle des pools de CoQ fonctionnels partiellement segmentés

Ce protocole met en évidence le rôle du sodium en tant que deuxième messager et montre également l’existence de pools d’ubiquinol partiellement différenciés. Cette technique démontre une approche extrêmement simple pour l’étude des pools d’ubiquinol qui nécessite par ailleurs des modèles cellulaires très spécifiques. Cette approche peut être utilisée pour l’étude du transfert d’électrons dans d’autres membranes, en particulier des enzymes dans les gouttes lipidiques.

Divisez les échantillons en quatre sous-échantillons de 20 microgrammes chacun et étiquetez-les A à D.Divisez les échantillons A et B en deux sous-échantillons de 10 microgrammes chacun et étiquetez-les comme A1, A2, B1 et B2. Préparez le tampon C1/C2 comme décrit dans le protocole texte et préchauffez à 37 degrés Celsius. Dans une cuvette d’un millilitre, ajouter chacun des sous-échantillons à 30 microlitres de cytochrome c et 10 microlitres de malonate. Ajouter un tampon C1/C2 pour porter le volume à 980 microlitres dans les cuvettes A1 et B1 et 979 microlitres dans A2 et B2. Ajouter 10 microlitres de chlorure de potassium à une molaire dans les cuvettes A1 et A2 et 10 microlitres de chlorure de sodium à une molaire dans B1 et B2. Ajouter un microlitre de roténone millimolaire dans les cuvettes A2 et B2. Juste avant la mesure, ajoutez 10 microlitres de NADH de 10 millimolaires dans toutes les cuvettes.