Name: Lysat plasmatique riche en plaquettes pour le traitement des maladies de la surface oculaire (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-08-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 57 s
Description: Apprenez la préparation du lysat plasmatique riche en plaquettes pour traiter les maladies de la surface oculaire. Cette méthode standardisée garantit une forte concentration de facteurs de croissance et une conservation longue durée.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Les auteurs souhaitent remercier la « Casa del Dono di Reggio Emilia » pour avoir fourni des concentrés de plaquettes dérivés de donneurs.

Le PRP-L utilisé pour l’évaluation quantitative des facteurs de croissance a été recueilli dans le cadre d’une étude plus large sur la caractérisation des produits PRP à des fins régénératives, réalisée à l’AUSL-IRCCS di Reggio Emilia et approuvée par le comité d’éthique Area Vasta Emilia Nord le 10 janvier 2019 (protocole numéro 2019/0003319). Les donateurs ont donné leur consentement éclairé conformément à la Déclaration d’Helsinki. Aucune approbation éthique n’était nécessaire pour recueillir les données agrégées et anonymes du questionnaire sur l’indice des maladies de la surface oculaire (IDSO), qui est couramment utilisé par les cliniciens pour surveiller les symptômes du syndrome de l’œil sec. La figure 1A montre un aperçu du protocole suivi, tandis que les images de la figure 1B illustrent les principales étapes de la procédure.
1. Collecte de plasma riche en plaquettes (PRP)
<ol><li>Aphérèse PRP<ol><li>Pour ce protocole, sélectionnez les donneurs de plaquettes conformément aux lois italiennes: les donneurs de plaquettes doivent être âgés de 18 à 65 ans, avec des paramètres normaux de pression et de numération globulaire et une numération plaquettaire d’au moins 180 x 109 plaquettes / L23. Les donneurs admissibles ne peuvent pas prendre d’antiplaquettaires ou d’anticoagulants dans la semaine précédant le don.</li>
		<li>Effectuer plasma-plaquettes-aphérèse à l’aide d’un système automatisé de prélèvement sanguin, conformément aux instructions des fabricants et aux lois nationales23, pour obtenir 1 unité de plasma riche en plaquettes (PRP) à donneur unique. Recueillir le PRP dans la solution anticoagulante de citrate d’adénine Dextrose Solution A (ACD-A). NOTE: L’aphérèse plaquettaire est réalisée avec une procédure continue; Le temps de collecte est compris entre 40 min et 90 min. La quantité de DCA administrée aux donneurs et la durée des interventions dépendent des caractéristiques du donneur, p. ex. hématocrite et jauge d’aiguille.</li>
	</ol></li>
	<li>Caractéristiques des unités PRP REMARQUE: L’étape suivante est généralement effectuée automatiquement par le système automatisé de prélèvement sanguin pendant la procédure plasma-plaquet-aphérèse. Veuillez consulter le manuel d’instructions du fabricant.<ol><li>Resuspendre les unités PRP recueillies par aphérèse dans une quantité adéquate de solution de conservation avec la quantité minimale de plasma résiduel, nécessaire pour maintenir un pH > 6,4 pendant toute la durée de stockage, jusqu’à un volume final moyen de 180 mL net de la solution anticoagulante (environ 40 mL). NOTE: Selon la loi italienne, les contrôles de qualité doivent évaluer que la numération plaquettaire (PLT) est d’au moins 2,0 x 1011 PLT / unité, tandis que les leucocytes résiduels doivent être inférieurs à 1 x 106 cellules / unité.</li>
		<li>Conserver le PRP leucodéplé et irradié pendant 5 jours au maximum à 22 °C ± 2 °C sur un agitateur plaquettaire avant toute nouvelle manipulation23.</li>
	</ol></li>
	<li>Dilution du PRP<ol><li>Immédiatement avant de commencer la dilution du PRP, effectuer une numération PLT avec un hémocytomètre en utilisant l’échantillon prélevé dans le sac principal à travers une pointe perforante. NOTE: Effectuer les étapes suivantes de la stérilité sous une cagoule de classe II pour les risques biologiques. Portez un équipement de protection individuelle (blouse de laboratoire, gants et lunettes de protection) pendant la procédure.</li>
		<li>Diluer le PRP avec une quantité adéquate de NaCl stérile à 0,9 % jusqu’à une concentration finale de 0,32 x 10 9± 0,03 x 109 PLT/mL, ce qui simule la concentration moyenne de PLT dans le sang périphérique.</li>
		<li>Profitant d’un pic perçant pour les poches de sang, divisez le PRP dilué en sacs de collecte vides de 300 ml pour atteindre un volume net de 190 mL/sac.</li>
		<li>Utiliser une partie aliquote de PRP dilué résiduel (habituellement 1 mL) pour effectuer des contrôles de qualité évaluant les contaminations microbiennes possibles. Effectuer un essai de stérilité en suivant les instructions du fabricant dans un laboratoire de microbiologie (voir le tableau des matériaux). REMARQUE : Utilisez des flacons de culture spécifiques aux hémocultures aérobies, qui sont capables d’effectuer la culture qualitative et la récupération de micro-organismes aérobies (principalement des bactéries et des levures) à partir d’échantillons de sang de petit volume.</li>
		<li>Conservez les sacs de PRP dilués à −80 °C pendant un maximum de 2 mois avant la décongélation.</li>
	</ol></li>
</ol>2. Préparation de lysat plasmatique riche en plaquettes (PRP-L)
<ol><li>Décongélation<ol><li>Avant de commencer la procédure de décongélation, assurez-vous qu’un bain chaud est réglé à 37 °C. Mettez les sacs PRP dans le bain chaud et attendez jusqu’à ce qu’ils soient complètement décongelés.</li>
	</ol></li>
	<li>Collecte PRP-L<ol><li>Centrifuger les sacs PRP à 3000 x g pendant 30 min à température ambiante. NOTE: Les étapes suivantes doivent être effectuées en stérilité sous une hotte de classe II pour risque biologique.</li>
		<li>En exploitant la pointe perforante du sac de transfert, connectez le sac centrifugé avec un sac de transfert stérile vide de 300 mL. Transférez soigneusement le surnageant PRP-L, tout en évitant les débris, dans le nouveau sac. Dans la mesure du possible, utilisez une presse à sac.</li>
		<li>Scellez le tube de connexion de l’unité PRP-L avec un scellant à sacs.</li>
	</ol></li>
	<li>PRP-L aliquote REMARQUE : Une unité de départ contenant 190 ml de PRP (voir l’étape 1.3.3.) est suffisante pour remplir deux trousses de gouttes ophtalmiques (pour plus de détails sur les dispositifs médicaux spécifiques utilisés pour l’application et la conservation des gouttes ophtalmiques à partir de composants sanguins, voir le tableau des matériaux). Les trousses de gouttes ophtalmiques doivent être ouvertes sous une hotte de classe II avec les flacons entiers placés au-dessus de la seringue préconnectée et la flèche centrale du robinet d’arrêt pointant vers la gauche pour exclure le filtre antibactérien.<ol><li>Prélever 30 à 60 ml de PRP-L avec une seringue stérile et relier la seringue au raccord Luer/lock sur la ligne de remplissage.</li>
		<li>Selon les instructions du fabricant, tournez le robinet d’arrêt d’un demi-tour pour ouvrir la ligne entre la seringue contenant du PRP-L et la seringue préconnectée. Remplissez la seringue préconnectée avec du PRP-L.</li>
		<li>Débranchez la seringue PRP-L, fermez le capuchon du tube de la connexion luer/lock et faites pivoter le robinet d’arrêt dans sa position d’origine. Utilisez la seringue du kit de gouttes ophtalmiques pour remplir les flacons de PRP-L.</li>
		<li>Répétez la procédure des étapes 2.3.1.-2.3.3. jusqu’à ce que tous les flacons applicateurs soient remplis. Assurez-vous que chaque applicateur est correctement rempli, puis scellez-les individuellement avec un scellant à sacs.</li>
		<li>Répétez la procédure avec un nouveau kit de gouttes ophtalmiques.</li>
		<li>Utiliser une petite partie aliquote de PRP-L dilué résiduel pour évaluer la contamination microbienne possible (voir étape 1.3.4.). REMARQUE: Si le liquide atteint accidentellement le filtre antibactérien à l’extrémité de la chaîne, la seringue d’aspiration peut s’opposer à la résistance, entravant le remplissage. Pour continuer le cycle de remplissage, soulevez la section d’extrémité de la ficelle pour environ 5/6 aliquotes du filtre hydrophobe antibactérien à l’extrémité de la ficelle. Dans cette position, utilisez une nouvelle seringue stérile (d’un volume de 30 mL) qui a déjà été remplie d’air. Connectez le luer/lock femelle du filtre antibactérien et appuyez fort et à plusieurs reprises sur le piston de la seringue pour éliminer tous les résidus de composants sanguins et libérer la membrane du filtre antibactérien du liquide. Retirez la seringue et remplissez les flacons restants.</li>
	</ol></li>
	<li>Stockage PRP-L<ol><li>Étiquetez correctement chaque applicateur et mettez-les dans un sac en plastique. Étiquetez également le sac en plastique, en prenant soin de mettre en évidence le groupe sanguin du donneur.</li>
		<li>Conserver à −80 °C pendant un maximum de 24 mois avant l’affectation du patient, conformément à la loi italienne23 et aux directives24.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Dispense de PRP-L
<ol><li>Effectuer l’assignation du patient de préférence en faisant correspondre le groupe sanguin PRP-L. Livrer les flacons applicateurs de PRP-L à l’aide d’une glacière et s’assurer que chaque flacon d’applicateur contient 1,45 mL de PRP-L, ce qui correspond à environ 45 gouttes. Informez le patient que les flacons applicateurs peuvent être conservés au domicile du patient jusqu’à 1 mois à -15 °C.</li>
</ol>

<ol><li>Everts, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet-rich+plasma+and+platelet+gel%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Extra-Corporeal+Technology%22%5BJournal%5D)">Platelet-rich plasma and platelet gel: A review.</a> The Journal of Extra-Corporeal Technology. 38 (2), 174(2006).</li>
<li>Giannaccare, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+derived+eye+drops+for+the+treatment+of+cornea+and+ocular+surface+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion+and+Apheresis+Science%22%5BJournal%5D)">Blood derived eye drops for the treatment of cornea and ocular surface diseases.</a> Transfusion and Apheresis Science. 56 (4), 595-604 (2017).</li>
<li>Bernabei, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-based+treatments+for+severe+dry+eye+disease%3A+The+need+of+a+consensus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Medicine%22%5BJournal%5D)">Blood-based treatments for severe dry eye disease: The need of a consensus.</a> Journal of Clinical Medicine. 8 (9), 1478(2019).</li>
<li>Findlay, Q., Reid, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dry+eye+disease%3A+When+to+treat+and+when+to+refer%5BTitle%5D)+AND+%22Australian+Prescriber%22%5BJournal%5D)">Dry eye disease: When to treat and when to refer.</a> Australian Prescriber. 41 (5), 160-163 (2018).</li>
<li>Clayton, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dry+eye%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Dry eye.</a> New England Journal of Medicine. 378 (23), 2212-2223 (2018).</li>
<li>Jones, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TFOS+DEWS+II+management+and+therapy+report%5BTitle%5D)+AND+%22The+Ocular+Surface%22%5BJournal%5D)">TFOS DEWS II management and therapy report.</a> The Ocular Surface. 15 (3), 575-628 (2017).</li>
<li>Holland, E. J., Darvish, M., Nichols, K. K., Jones, L., Karpecki, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+topical+ophthalmic+drugs+in+the+treatment+of+dry+eye+disease%3A+A+systematic+literature+review%5BTitle%5D)+AND+%22The+Ocular+Surface%22%5BJournal%5D)">Efficacy of topical ophthalmic drugs in the treatment of dry eye disease: A systematic literature review.</a> The Ocular Surface. 17 (3), 412-423 (2019).</li>
<li>Shih, K. C., Lun, C. N., Jhanji, V., Thong, B. Y. H., Tong, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+review+of+randomized+controlled+trials+in+the+treatment+of+dry+eye+disease+in+Sjogren+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Inflammation%22%5BJournal%5D)">Systematic review of randomized controlled trials in the treatment of dry eye disease in Sjogren syndrome.</a> Journal of Inflammation. 14, 26(2017).</li>
<li>Rusciano, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+dry+eye+lactoferrin+and+lactobionic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmic+Research%22%5BJournal%5D)">Age-related dry eye lactoferrin and lactobionic acid.</a> Ophthalmic Research. 60 (2), 94-99 (2018).</li>
<li>Craig, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TFOS+DEWS+II+definition+and+classification+report%5BTitle%5D)+AND+%22The+Ocular+Surface%22%5BJournal%5D)">TFOS DEWS II definition and classification report.</a> The Ocular Surface. 15 (3), 276-283 (2017).</li>
<li>Drew, V. J., Tseng, C. L., Seghatchian, J., Burnouf, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reflections+on+dry+eye+syndrome+treatment%3A+Therapeutic+role+of+blood+products%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">Reflections on dry eye syndrome treatment: Therapeutic role of blood products.</a> Frontiers in Medicine. 5, 33(2018).</li>
<li>Giannaccare, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+derived+eye+drops+for+the+treatment+of+cornea+and+ocular+surface+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion+and+Apheresis+Science%22%5BJournal%5D)">Blood derived eye drops for the treatment of cornea and ocular surface diseases.</a> Transfusion and Apheresis Science. 56 (4), 595-604 (2017).</li>
<li>Acebes-Huerta, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet-derived+bio-products%3A+Classification+update%2C+applications%2C+concerns+and+new+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion+and+Apheresis+Science%22%5BJournal%5D)">Platelet-derived bio-products: Classification update, applications, concerns and new perspectives.</a> Transfusion and Apheresis Science. 59 (1), 102716(2020).</li>
<li>Quartieri, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolomics+comparison+of+cord+and+peripheral+blood-derived+serum+eye+drops+for+the+treatment+of+dry+eye+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion+and+Apheresis+Science%22%5BJournal%5D)">Metabolomics comparison of cord and peripheral blood-derived serum eye drops for the treatment of dry eye disease.</a> Transfusion and Apheresis Science. 60 (4), 103155(2021).</li>
<li>Badami, K. G., McKellar, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allogeneic+serum+eye+drops%3A+Time+these+became+the+norm%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Allogeneic serum eye drops: Time these became the norm.</a> British Journal of Ophthalmology. 96 (8), 1151-1152 (2012).</li>
<li>Hwang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+clinical+efficacies+of+autologous+serum+eye+drops+in+patients+with+primary+and+secondary+Sj%C3%B6gren+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">Comparison of clinical efficacies of autologous serum eye drops in patients with primary and secondary Sjögren syndrome.</a> Cornea. 33 (7), 663-667 (2014).</li>
<li>Chiang, C. C., Lin, J. M., Chen, W. L., Tsai, Y. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allogeneic+serum+eye+drops+for+the+treatment+of+severe+dry+eye+in+patients+with+chronic+graft-versus-host+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">Allogeneic serum eye drops for the treatment of severe dry eye in patients with chronic graft-versus-host disease.</a> Cornea. 26 (7), 861-863 (2007).</li>
<li>Jonsdottir-Buch, S. M., Lieder, R., Sigurjonsson, O. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+lysates+produced+from+expired+platelet+concentrates+support+growth+and+osteogenic+differentiation+of+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Platelet lysates produced from expired platelet concentrates support growth and osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells.</a> PLoS One. 8 (7), 68984(2013).</li>
<li>Altaie, A., Owston, H., Jones, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+platelet+lysate+for+bone+regeneration+-+Are+we+ready+for+clinical+translation%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Use of platelet lysate for bone regeneration - Are we ready for clinical translation.</a> World Journal of Stem Cells. 8 (2), 47-55 (2016).</li>
<li>Vesaluoma, M., Teppo, A. M., Grönhagen-Riska, C., Tervo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet-derived+growth+factor-BB+%28PDGF-BB%29+in+tear+fluid%3A+A+potential+modulator+of+corneal+wound+healing+following+photorefractive+keratectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Platelet-derived growth factor-BB (PDGF-BB) in tear fluid: A potential modulator of corneal wound healing following photorefractive keratectomy.</a> Current Eye Research. 16 (8), 825-831 (1997).</li>
<li>Zheng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+transforming+growth+factor+%CE%B2+activity+in+normal+and+dry+eye+human+tears+by+CCL-185+cell+bioassay%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the transforming growth factor β activity in normal and dry eye human tears by CCL-185 cell bioassay.</a> Cornea. 29 (9), 1048(2010).</li>
<li>Zamani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+therapeutic+approaches+in+utilizing+platelet+lysate+in+regenerative+medicine%3A+Are+we+ready+for+clinical+use%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Novel therapeutic approaches in utilizing platelet lysate in regenerative medicine: Are we ready for clinical use.</a> Journal of Cellular Physiology. 234 (10), 17172-17186 (2019).</li>
<li>Ministro della Salute. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disposizioni+relative+ai+requisiti+di+qualit%C3%A0+e+sicurezza+del+sangue+e+degli+emocomponenti%5BTitle%5D)+AND+%22Italian+Ministry+of+Health%22%5BJournal%5D)">Disposizioni relative ai requisiti di qualità e sicurezza del sangue e degli emocomponenti.</a> Italian Ministry of Health. , DECRETO 2 Novembre 2015 (2015).</li>
<li>Aprili, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Raccomandazioni+SIMTI+sugli+emocomponenti+per+uso+non+trasfusionale%5BTitle%5D)+AND+%22Societ%C3%A0+Italiana+di+Medicina+Trasfusionale+e+Immunoematologia%22%5BJournal%5D)">Raccomandazioni SIMTI sugli emocomponenti per uso non trasfusionale.</a> Società Italiana di Medicina Trasfusionale e Immunoematologia. , (2012).</li>
<li>Schiroli, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+two+alternative+procedures+to+obtain+packed+red+blood+cells+for+%CE%B2-thalassemia+major+transfusion+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">Comparison of two alternative procedures to obtain packed red blood cells for β-thalassemia major transfusion therapy.</a> Biomolecules. 11 (11), 1638(2021).</li>
<li>Pulcini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apheresis+platelet+rich-plasma+for+regenerative+medicine%3A+An+in+vitro+study+on+osteogenic+potential%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Science%22%5BJournal%5D)">Apheresis platelet rich-plasma for regenerative medicine: An in vitro study on osteogenic potential.</a> International Journal of Molecular Science. 22 (16), 8764(2021).</li>
<li>Ohashi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presence+of+epidermal+growth+factor+in+human+tears%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Presence of epidermal growth factor in human tears.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 30 (8), 1879-1882 (1989).</li>
<li>Vitale, S., Goodman, L. A., Reed, G. F., Smith, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+NEI-VFQ+and+OSDI+questionnaires+in+patients+with+Sj%C3%B6gren%27s+syndrome-related+dry+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Health+Quality+of+Life+Outcomes%22%5BJournal%5D)">Comparison of the NEI-VFQ and OSDI questionnaires in patients with Sjögren's syndrome-related dry eye.</a> Health Quality of Life Outcomes. 2, 44(2004).</li>
<li>Schiffman, R. M., Christianson, M. D., Jacobsen, G., Hirsch, J. D., Reis, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reliability+and+validity+of+the+Ocular+Surface+Disease+Index%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Reliability and validity of the Ocular Surface Disease Index.</a> Archives of Ophthalmology. 118 (5), 615-621 (2000).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristics+of+platelet+lysate+compared+to+autologous+and+allogeneic+serum+eye+drops%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Vision+Science+and+Technology%22%5BJournal%5D)">Characteristics of platelet lysate compared to autologous and allogeneic serum eye drops.</a> Translational Vision Science and Technology. 9 (4), 24(2020).</li>
<li>Henschler, R., Gabriel, C., Schallmoser, K., Burnouf, T., Koh, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+platelet+lysate+current+standards+and+future+developments%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Human platelet lysate current standards and future developments.</a> Transfusion. 59 (4), 1407-1413 (2019).</li>
<li>Samarkanova, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+evaluation+of+allogeneic+eye+drops+from+cord+blood+platelet+lysate%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Transfusion%22%5BJournal%5D)">Clinical evaluation of allogeneic eye drops from cord blood platelet lysate.</a> Blood Transfusion. 19 (4), 347-356 (2021).</li>
<li>Strunk, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((International+Forum+on+GMP-grade+human+platelet+lysate+for+cell+propagation%3A+Summary%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sanguinis%22%5BJournal%5D)">International Forum on GMP-grade human platelet lysate for cell propagation: Summary.</a> Vox Sanguinis. 113 (1), 80-87 (2018).</li>
<li>Schiroli, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+COVID-19+outbreak+on+the+Transfusion+Medicine+Unit+of+a+Northern+Italy+Hospital+and+Cancer+Centre%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sanguinis%22%5BJournal%5D)">The impact of COVID-19 outbreak on the Transfusion Medicine Unit of a Northern Italy Hospital and Cancer Centre.</a> Vox Sanguinis. 117 (2), 235-242 (2021).</li>
<li>Klatte-Schulz, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+different+platelet+lysates+and+platelet+rich+preparations+to+stimulate+tendon+cell+biology%3A+An+in+vitro+study%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Science%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of different platelet lysates and platelet rich preparations to stimulate tendon cell biology: An in vitro study.</a> International Journal of Molecular Science. 19 (1), 212(2018).</li>
<li>Fea, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+autologous+platelet+lysate+eye+drops%3A+An+in+vivo+confocal+microscopy+study%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">The effect of autologous platelet lysate eye drops: An in vivo confocal microscopy study.</a> BioMed Research International. 2016, 8406832(2016).</li>
<li>Abu-Ameerh, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+lysate+promotes+re-epithelialization+of+persistent+epithelial+defects%3A+A+pilot+study%5BTitle%5D)+AND+%22International+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Platelet lysate promotes re-epithelialization of persistent epithelial defects: A pilot study.</a> International Ophthalmology. 39 (7), 1483-1490 (2019).</li>
<li>Geremicca, W., Fonte, C., Vecchio, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+components+for+topical+use+in+tissue+regeneration%3A+evaluation+of+corneal+lesions+treated+with+platelet+lysate+and+considerations+on+repair+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Transfusion%22%5BJournal%5D)">Blood components for topical use in tissue regeneration: evaluation of corneal lesions treated with platelet lysate and considerations on repair mechanisms.</a> Blood Transfusion. 8 (2), 107-112 (2010).</li>
<li>De Paiva, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+TGF-%CE%B2+signaling+improves+ocular+surface+epithelial+disease+in+experimental+autoimmune+keratoconjunctivitis+sicca%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Disruption of TGF-β signaling improves ocular surface epithelial disease in experimental autoimmune keratoconjunctivitis sicca.</a> PLoS One. 6 (12), 29017(2011).</li>
</ol>

Les auteurs ne déclarent aucun conflit d’intérêts.

Ces dernières années, l’utilisation clinique de produits à base de plaquettes pour les pathologies de surface oculaire a augmenté, mais leur diffusion est entravée par le manque de robustesse scientifique. Cela est principalement dû à la grande hétérogénéité des sources de donneurs et des protocoles de préparation, qui ne sont souvent pas entièrement divulgués ou ne sont pas spécifiquement conçus aux fins pour lesquelles ils sont dispensés. En particulier, les informations sur les produits à base de plaquettes recueillie...

Les produits dérivés du sang sont largement utilisés dans le soin des plaies1, la chirurgie maxillo-faciale et orthopédique et pour le traitement de différentes maladies de la surface oculaire2 telles que la sécheresse oculaire (DED)3. Dans la DED, l’homéostasie du film lacrymal est altérée en raison du fonctionnement anormal de différents facteurs impliqués dans la production de larmes et l’intégrité de la surface oculaire 4,5.
La DED est caractérisée par une hétérogénéité dans les causes et la gravité 6,7,8 et peut être une conséquence de différents facteurs comme le vieillissement, le sexe9, les lentilles de contact, les médicaments topiques ou systémiques 10, ou des conditions préexistantes comme le syndrome de Gougerot-Sjögren 10. Malgré des symptômes bénins, la DED affecte des millions de personnes dans le monde, ce qui a un impact sur leur qualité de vie et sur le système de santé6.
De nombreux traitements ont été rapportés pour cette pathologie, mais il n’y a toujours pas de consensus sur la solution la plus efficace12. À ce jour, les larmes artificielles sont la première ligne de traitement visant à restaurer la composition aqueuse du film lacrymal, bien que ces substituts ne contiennent pas les principaux solutés biologiquement actifs des larmes naturelles 6,11. Les produits à base de plaquettes sont considérés comme une alternative valable12,13 aux larmes artificielles, bien que leur efficacité clinique, leurs recommandations d’utilisation et leurs méthodes de préparation fassent encore l’objet de débats3.
Les produits sanguins partagent avec les larmes une composition similaire en termes de métabolites14, protéines, lipides, vitamines, ions, facteurs de croissance (GF), composés antioxydants 11 et osmolarité (300 mOsm/L)11. Grâce à l’activité synergique de leurs composants, ils favorisent la régénération de l’épithélium cornéen, inhibent la libération de cytokines inflammatoires et augmentent le nombre de cellules caliciformes et l’expression des mucines dans la conjonctive 2,3.
Jusqu’à présent, l’hétérogénéité des produits ophtalmiques à base de sang a été documentée dans la littérature; Ces produits peuvent être classés selon l’origine du donneur de sang, c’est-à-dire autologue ou allogénique, ainsi que la source de sang, c’est-à-dire le sang périphérique, le sang de cordon, le sérum ou les plaquettes.
Bien que les produits autologues aient été les plus répandus3, les produits allogéniques deviennent maintenant le choix préféré, car ils garantissent des normes d’efficacité et de sécurité plus élevées 15, ainsi qu’une réduction significative des coûts16,17. Des études antérieures ont en effet prouvé que les produits sanguins obtenus à partir de patients atteints de maladies auto-immunes et/ou systémiques peuvent présenter une altération de la qualité et de la fonctionnalité 6,16,17. Malgré le fait que les gouttes ophtalmiques à base de sérum soient les plus répandues, les produits à base de plaquettes se sont récemment affirmés comme une alternative valable, car ils peuvent être facilement préparés tout en maintenant des niveaux d’efficacitésignificatifs 3,11. Les produits à base de plaquettes actuellement disponibles peuvent être divisés en plasma riche en plaquettes (PRP), en lysat de plasma riche en plaquettes (PRP-L) et en plasma riche en facteurs de croissance (PRGF)3.
Parmi eux, le PRP-L a l’avantage d’être un produit surgelé longue conservation. Le PRP-L peut être préparé à partir d’aphérèse, de couches leucocytaires ou même de plaquettes expirant (PLT)18,19, ce qui réduit précieusement leur gaspillage. Les aliquotes peuvent être conservées pendant des mois dans les centres de transfusion sanguine à -80 °C ou même au domicile des patients à -15 °C pendant des périodes plus courtes.
Les PRP-L sont hautement enrichis en GF, dont il a été prouvé qu’ils stimulent la régénération de la surface oculaire 12,20,21. Néanmoins, il n’y a que peu d’études cliniques rapportées dans ce domaine, et toutes ont utilisé des sources autologues 3,22. Le PRP-L doit encore faire l’objet d’une validation et d’une caractérisation plus poussées avant de pouvoir être utilisé systématiquement pour le traitement des maladies de la surface oculaire, car il n’existe pas de lignes directrices normalisées pour sa préparation, sa distribution et son entreposage3.
Ici, un protocole détaillé est partagé pour la production de PRP-L utilisé à l’unité de médecine transfusionnelle de l’AUSL-IRCCS di Reggio Emilia, en Italie, et la dispensation aux patients atteints de DED. Notre objectif est d’aider la communauté scientifique à développer des méthodes de préparation standard, qui peuvent augmenter l’homogénéité et la cohérence des études et des approches cliniques mondiales.

<table><tbody><tr><td>Equipments</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CompoSeal Mobilea II</td><td>Fresenius Kabi, Allemagne</td><td></td><td>scelleuse de sacs</td></tr><tr><td>HeraSafe hood</td><td>Heraeus Instruments, Allemagne</td><td></td><td>Classe II Hotte antirisque biologique</td></tr><tr><td>MCS+ 9000 Mobile Platelet Collection System</td><td>Haemonetics, Italie</td><td></td><td>Équipement automatisé de collecte de plasma et de composants multicomposants pour le don de plaquettes, de globules rouges, de plasma ou de composants sanguins combinés</td></tr><tr><td>Agitateur de plaquettes, PF396i</td><td>Helmer, États-Unis</td><td></td><td>Agitateur de plaquettes</td></tr><tr><td>Raycell Irradiateur de sang à rayons X</td><td>MDS Nordion, Canada</td><td></td><td>Irradiateur de sang à rayons X</td></tr><tr><td>ROTIXA 50RS</td><td>Hettich Zentrifugen, Allemagne</td><td></td><td>Intrigout à grande vitesse</td></tr><tr><td>Sysmex XS-1000i</td><td>Sysmex Europe GMBH, Allemagne</td><td></td><td>hémocytomètre pour la numération plaquettaire</td></tr><tr><td>Bain chaud, WB-M15</td><td>Falc Instruments, Italie</td><td></td><td>Bain chaud</td></tr><tr><td>Matériaux</fort></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ACD-A solution anticoagulante A</td><td>Fenwal Inc., USA</td><td>DIN 00788139</td><td>solution anticoagulante pour l’aphérèse plaquettaire (1000 ml)</td></tr><tr><td>BD BACTEC Peds Plus/F Flacons de culture</td><td>BD Biosciences, États-Unis</td><td>BD 442020</td><td>Essai de stérilité</td></tr><tr><td>BD BACTEC Peds Plus/F Flacons de culture</td><td>BD Biosciences, États-Unis</td><td>442020</td><td>Au moins 2 flacons pour l’essai de stérilité</td></tr><tr><td>BD Luer Lok Seringue</td><td>BD Plastipack, États-Unis</td><td>300865</td><td>Au moins 4 seringues stériles (50 ml)</td></tr><tr><td>Bio-Plex Human Cancer Panel 1 BioRad</td><td>Laboratories, États-Unis</td><td>171AC500M</td><td>Panel standard pour l’évaluation des</td></tr> <tr><td>isoformes PDGFBio-Plex Human Cancer Panel 2</td><td>BioRad Laboratories, USA</td><td>171AC600M</td><td>Panel standard pour l’évaluation EGF</td></tr><tr><td>Bio-Plex MAGPIX Multiplex Reader</td><td>BioRad Laboratories, USA</td><td>Magpix</td><td>Cet instrument permet plusieurs immunoessais à l’aide de billes magnétiques fonctionnalisées.</td></tr><tr><td>Bio-Plex Pro TGF-b</td><td>Assay BioRad Laboratories, USA</td><td>10024984</td><td>Ensemble et normes pour l’évaluation des isoformes du TGFb</td></tr><tr><td>BioRet</td><td>ARIES s.r.l., Italie</td><td>A2DH0020</td><td>Au moins 4 pointes de perçage pour poches de sang</td></tr><tr><td>Tube de prélèvement sanguin</td><td>BD Vacutainer, États-Unis</td><td>367835</td><td>1 tube, nécessaire pour effectuer la numération</td></tr> <tr><td>plaquettaireKit de gouttes ophtalmiques. COL Medical Device pour l’application et la conservation de gouttes ophtalmiques à partir d’hémocomposants</td><td>Biomed Device s.r.l., Italie</td><td>COLC50</td><td>Kit de gouttes ophtalmiques. Au moins 2 kits pour chaque unité PRP collectée</td></tr><tr><td>Cancer humain PDGF-AB/BB Set 1x96well</td><td>BioRad Laboratories, USA</td><td>171BC511</td><td>Set pour l’évaluation des isoformes PDGF</td></tr><tr><td>Cancer humain2 EGF Set 1x96well</td><td>BioRad Laboratories, USA</td><td>171BC603M</td><td>Set pour l’évaluation EGF</td></tr><tr><td>NaCl 0,9 % solution stérile</td><td>Baxter S.p.A., Italy</td><td>B05BB01</td><td>1000 ml</td></tr><tr><td>Questionnaire OSDI</td><td>Allergan Inc., USA</td><td>OSDI</td><td>Questionnaire sur l’indice des maladies de la surface oculaire</td></tr><tr><td>Pointe de piercing</td><td>BioRet ARIES s.r.l., Italie</td><td>BS051004</td><td>Spike</td></tr><tr><td>Platelet Additive Solution A+ T-PAS+</td><td>TERUMO BCT Inc., Italie</td><td>40842</td><td>solution de conservation pour concentrés de plaquettes (1000 ml)</td></tr><tr><td>Logiciel Excel</td><td>Microsoft, USA</td><td>Excel Logiciel d’analyse</td><td>de données</td></tr><tr><td>Teruflex Sac de transfert 1000 ml</td><td>TERUMO BCT Inc., Italie</td><td>BB*T100BM</td><td>1 pour dilution PRP</td></tr><tr><td>Teruflex Sac de transfert 300 ml</td><td>TERUMO BCT Inc., Italie</td><td>BB*030CM</td><td>Au moins 6 pour chaque unité PRP prélevée</td></tr></tbody></table>

lysat plasmatique riche en plaquettes pour le traitement des maladies de la surface oculaire

Platelet-Rich Plasma Lysate for Treatment of Eye Surface Diseases

Diverses maladies de la surface oculaire sont traitées avec des gouttes oculaires dérivées du sang. Leur utilisation a été introduite dans la pratique clinique en raison de leur teneur en métabolites et en facteurs de croissance, ce qui favorise la régénération de la surface oculaire. Les gouttes ophtalmiques à base de sang peuvent être préparées à partir de différentes sources (c.-à-d. don de sang total ou d’aphérèse plaquettaire), ainsi qu’avec différents protocoles (p. ex. différentes dilutions et cycles de congélation et de décongélation). Cette variabilité entrave la standardisation des protocoles cliniques et, par conséquent, l’évaluation de leur efficacité clinique. Le détail et le partage des procédures méthodologiques peuvent contribuer à la définition de lignes directrices communes. Au cours des dernières années, les produits allogéniques se sont diffusés comme alternative aux traitements autologues car ils garantissent des normes d’efficacité plus élevées; parmi eux, les gouttes ophtalmiques au lysat plasma riche en plaquettes (PRP-L) sont préparées selon des procédures de fabrication simples. Dans l’unité de médecine transfusionnelle de l’AUSL-IRCCS di Reggio Emilia, en Italie, le PRP-L est obtenu par don d’aphérèse plaquettaire. Ce produit est initialement dilué à 0,3 x 10 9 plaquettes/mL (à partir d’une concentration moyenne de 1 x 10 9 plaquettes/mL) dans0,9% de NaCl. Les plaquettes diluées sont congelées/décongelées et, par la suite, centrifugées pour éliminer les débris. Le volume final est divisé en aliquotes de 1,45 mL et stocké à −80 °C. Avant d’être délivrés aux patients, les gouttes oculaires sont testées pour la stérilité. Les patients peuvent conserver les lysats plaquettaires à -15 °C jusqu’à 1 mois. La composition du facteur de croissance est également évaluée à partir d’aliquotes choisies au hasard, et les valeurs moyennes sont rapportées ici.

La raison d’être de l’utilisation de gouttes ophtalmiques dérivées du sérum (qui est le produit sanguin le plus fréquemment utilisé pour le traitement des maladies de la surface oculaire) réside dans leur teneur en GF, qui sont presque entièrement dérivés des plaquettes circulantes. Le PRP contient un nombre significativement plus élevé de plaquettes (et, par conséquent, de GF dérivés des plaquettes) par rapport au sérum sanguin périphérique, allant de 0,15 x 10 9-0,45 x 109 PLT/mL. Selon la législa...

Les lysats plaquettaires représentent un outil émergent pour le traitement des maladies de la surface oculaire. Ici, nous proposons une méthode pour la préparation, la distribution, le stockage et la caractérisation du lysat plaquettaire prélevé sur des donneurs de plaquettes.

Lysat plasmatique riche en plaquettes pour le traitement des maladies de la surface oculaire

Various ocular surface diseases are treated with blood-derived eye drops. Their use has been introduced in clinical practice because of their metabolite ...

PRP Lysat est un produit émergent à base de plaquettes pour le traitement des maladies de la surface oculaire. Ici, nous voulons partager et détailler notre protocole de production pour couvrir le développement de directives méthodologiques communes. Les produits halogéniques se sont diffusés comme alternative aux traitements autologues.Puisqu’ils garantissent des normes d’efficacité plus élevées. Le lysat PRP contient une forte concentration de facteurs de croissance. Sa production est peu coûteuse et simple et il peut être stocké pendant une longue période de temps.L’utilisation de produits sanguins pour le traitement des maladies des yeux ou du visage est largement documentée dans la littérature. Néanmoins, leurs demandes n’ont toujours pas trouvé de consensus. L’une des raisons est la variabilité des méthodes utilisées pour leur production.Notre objectif est de partager notre protocole afin de développer des méthodologies communes. Pour commencer, effectuez une numération plaquettaire avec un cystomètre hémologique en utilisant l’échantillon prélevé dans le sac principal à travers une pointe perçante. Diluer le plasma riche en plaquettes avec une quantité adéquate de chlorure d

platelet-rich-plasma-lysate-for-treatment-of-eye-surface-diseases

Research

Recherche

JoVE Journal

Medicine

Médecine

Homme lysat plaquettaire est une riche source de facteurs de croissance et d'un supplément puissant dans la culture cellulaire. Ce protocole présente le processus de préparation d'un grand bassin de lysat plaquettaire humaine en commençant à partir du plasma riche en plaquettes, effectuant plusieurs cycles gel-dégel et d'épuiser les fragments de plaquettes.

Préparation du Pooled lysat plaquettaire humain (pHPL) comme un supplément efficace pour animaux sans sérum humain cultures de cellules souches

Cette vidéo montre la préparation d’un plasma riche en plaquettes (PRP) de haute qualité par le dépistage de la numération plaquettaire, la collecte et la centrifugation du sang et l’isolement des plaquettes. Ce PRP est utilisé dans des applications thérapeutiques pour la régénération et la cicatrisation des tissus.

Préparation de plasma riche en plaquettes à partir de sang périphérique humain

Implant associée à l'infection est une complication clinique importante. Cette étude décrit une approche basée sur plasma riche en plaquettes (PRP) pour prévenir les infections associées aux implants, présente le protocole pour la préparation de PRP avec la concentration de plaquettes constante, et rend compte des propriétés nouvellement identifiés antimicrobiennes de PRP et les protocoles connexes pour examiner de telles propriétés...

PRP comme une nouvelle approche pour prévenir l&#39;infection: Préparation et<em&gt; In vitro</em&gt; Propriétés antimicrobiennes de PRP

Leucocyte-Plaquettaire Rich Fibrin (L-PRF) représente une préparation de concentrés de plaquettes autologues approuvée par la FDA qui possède une architecture de fibrine unique, des plaquettes enrichies et des facteurs de croissance abondants. Ici, nous présentons un protocole pour la génération de L-PRF au fauteuil et évaluons ses propriétés mécaniques, y compris les essais uniaxiaux et les essais de résistance à la rétention des sutures.

Caractérisation de leuco-plaquettaire Rich fibrine, un roman biomatériaux

L’arthrose du genou est fréquemment observé dans le département orthopédique. Nous présentons en détail le procédé de traitement de l’arthrose du genou tout avec injection de plasma riche en plaquettes, y compris la préparation, des procédures et l’évaluation.

Préparation, procédures et l’évaluation de l’Injection de Plasma riche en plaquettes dans le traitement de l’arthrose du genou

Ce protocole présente un dispositif qui produit du PRP pour stimuler l’expansion in vitro des cellules dans un système de culture de fibroblastes 100% autologue.

Production de plasma autologue riche en plaquettes pour stimuler l’expansion in vitro des fibroblastes humains

Le primate non humain (PSN) est un modèle idéal pour étudier les thérapies cellulaires rétiniennes humaines en raison des similitudes anatomiques et génétiques. Ce manuscrit décrit une méthode de transplantation sous-maculaire de cellules épithéliales pigmentaires rétiniennes dans l’œil NHP et des stratégies pour prévenir les complications peropératoires associées à la manipulation maculaire.

Transplantation d’épithélium pigmentaire rétinien dans un modèle de primate non humain pour les maladies dégénératives de la rétine

Cet article décrit un protocole visant à simplifier le processus et à rendre la préparation du sérum conditionné autologue (ACS) moins coûteuse. Aucune seringues spéciales ou perles de verre revêtues en surface n’est nécessaire. De plus, l’ACS modifié (mACS) présente des avantages concurrentiels par rapport au sérum autologue conventionnel dans la cicatrisation des plaies cornéennes des yeux murins ex vivo.

Production de sérum conditionné autologue modifié et évaluation ex vivo de son potentiel de guérison dans l’épithélium cornéen murin

La formation de plaquettes procoagulantes a été corrélée à un risque accru de thrombose. Voici un protocole précis d’isolement des plaquettes lavées du sang humain, destiné à quantifier l’exposition à la phosphatidylsérine et la libération de microvésicules, qui sont des caractéristiques distinctives des plaquettes procoagulantes.

Caractérisation des plaquettes procoagulantes par mesure de l’exposition à la phosphatidylsérine et de la libération de microvésicules à partir de plaquettes humaines purifiées

Le plasma riche en plaquettes (PRP) est utilisé dans le traitement des troubles musculo-squelettiques équins. Différentes techniques permettent d’obtenir du PRP avec des concentrations variables en plaquettes et en leucocytes. Cet article décrit une méthode pour obtenir du PRP à partir de sang de cheval.

Une méthode simple à double tube de centrifugation pour obtenir du plasma riche en plaquettes à partir de sang équin

Apprenez la préparation du lysat plasmatique riche en plaquettes pour traiter les maladies de la surface oculaire. Cette méthode standardisée garantit une forte concentration de facteurs de croissance et une conservation longue durée.

Lysat plasmatique riche en plaquettes pour le traitement des maladies de la surface oculaire

Explorer plus de vidéos