Techniques de dissection et échantillonnage histologique du cœur dans des modèles de grands animaux pour les maladies cardiovasculaires

Les différences structurelles dans le cœur entre les espèces et les individus, ainsi que les divergences dans la littérature nécessitent une compréhension approfondie de l’anatomie du cœur et le respect d’une méthodologie stricte. Cette technique peut améliorer l’uniformité des observateurs et accroître la comparabilité et la reproductibilité de la recherche expérimentale sur les maladies cardiovasculaires. Une personne qui n’est pas familière avec cette technique peut avoir de la difficulté à identifier tous les composants du cœur.

Ma recommandation est de passer un peu de temps à se familiariser avec l’anatomie du cœur. Parce que l’anatomie complexe du cœur est difficile à comprendre, une présentation visuelle de la méthode est nécessaire. Pour commencer, pesez l’animal visé avant de le placer sur la table de nécropsie sur son côté gauche.

Ensuite, effectuez un examen externe du sujet en inspectant et en palpant la cutis et la muqueuse, en notant tous les changements de couleur, de consistance et de volume. Ensuite, à l’aide d’un couteau, faites une incision pointue de sept centimètres dans l’aisselle droite. Après avoir localisé la jonction coxofémorale, ouvrez la capsule avec un couteau et coupez le ligament de la tête du fémur.

Étendre l’incision cutanée dans l’aisselle crânienne à la symphyse mandibulaire et caudale au péronée. Retirez la peau avec le scalpel, en exposant la paroi thoracique et abdominale de la ligne médiane ventrale au niveau des processus transversaux vertébraux. Ensuite, à l’aide du scalpel et des pinces, créez un lambeau à travers la paroi abdominale, ventrocaudal à l’arc costal droit.

Ensuite, en suivant l’aspect caudale de l’hypochondre droit, ouvrez la cavité abdominale avec des ciseaux. Continuez à étendre l’incision caudale le long de la zone paralombaire droite jusqu’à la crête iliaque externe. Ensuite, étendez l’incision jusqu’à l’insertion pubienne de la linea alba et examinez brièvement les organes abdominaux in situ pour noter tout changement dans leur couleur, leur consistance, leur volume et leur position.

Ensuite, à l’aide du scalpel et des pinces, percez le diaphragme au point le plus élevé. Ensuite, à l’aide d’une pince coupe-os, retirez la cage thoracique droite en sectionnant d’abord le segment cartilagineux parasternal, puis le segment dorsal des côtes proximal aux articulations costo-vertébrales. Examinez le cœur in situ pour noter sa taille, sa couleur, sa position et ses connexions avec les tissus adjacents.

Recherchez également tout changement de consistance par palpation. Ensuite, à l’aide de ciseaux, ouvrez la cavité péricardique avec une coupe longitudinale de la base à l’apex du cœur. Examinez la cavité péricardique et l’épicarde pour tout changement de couleur, de consistance et de volume.

Ensuite, à l’aide de ciseaux, relâchez le cœur en sectionnant la veine cave supérieure d’au moins un centimètre au-dessus de l’entrée dans l’oreillette droite, préservant la crista terminalis et donnant les sections transversales de l’aorte, du tronc pulmonaire et des deux veines caves. Examiner le contour externe de l’organe, l’aspect de l’épicarde, celui du myocarde par la transparence de l’épicarde et l’aspect extérieur des gros vaisseaux. Pour effectuer la méthode d’entrée-sortie pour la dissection cardiaque, placez le cœur avec la face auriculaire vers le haut et, à l’aide de ciseaux et de pinces édentées, coupez largement de la veine cave caudale dans l’oreillette droite.

Après avoir coupé le cœur à l’appendice auriculaire droit pour exposer la crista terminalis ou le nœud sino-auriculaire, inspectez la valve tricuspide de la vue dorsale. Ensuite, en coupant une section de l’oreillette droite à la jonction entre le ventricule droit et le septum intraventriculaire, affichez la valve auriculo-ventriculaire droite. Ensuite, coupez la paroi libre du ventricule droit le long du septum intraventriculaire jusqu’à l’origine du tronc pulmonaire.

Après avoir soigneusement examiné les valves auriculo-ventriculaires droites, y compris les tendinées chormales et les muscles papillaires, coupez les tendinées chordaires. Ensuite, placez les pinces le long du tronc pulmonaire et coupez le tronc longitudinalement pour examiner la voie d’écoulement pulmonaire, l’origine du tronc pulmonaire et les valves semi-lunaires. Pour inspecter la valve bicuspide de la vue dorsale, coupez l’oreillette gauche des veines pulmonaires à l’extrémité de l’oreillette gauche.

Ensuite, placez le cœur avec le septum interventriculaire tourné vers le bas et faites une grande incision dans la paroi libre ventriculaire de la base du ventricule à l’apex cardiaque. Ensuite, coupez la tendineae des cordes de la cuspide de la valve auriculo-ventriculaire gauche. Enfin, ouvrez l’aorte en plaçant une pince dans le tractus d’écoulement ventriculaire gauche.

Utilisez une solution saline pour enlever tous les caillots sanguins et peser le cœur. Pour prélever des échantillons pour l’histologie, faites d’abord deux coupes longitudinales parallèles, distantes d’environ cinq millimètres, avec un scalpel impliquant l’oreillette droite, la valve tricuspide et la paroi libre ventriculaire droite. Ensuite, faites deux coupes parallèles similaires impliquant l’oreillette gauche, la valve mitrale, le muscle papillaire dorsal et le ventricule gauche.

Dans le tiers supérieur dorsal du cœur, couper transversalement la base du cœur en suivant une ligne, y compris le septum interventriculaire, l’oreillette droite, l’aorte, la valve aortique et la valve tricuspide. Et faire deux coupes longitudinales parallèles impliquant la base de l’aorte et le septum interventriculaire. Ensuite, coupez l’atrium droit autour de la crista terminalis.

Pour obtenir six morceaux du nœud sino-auriculaire, faites plusieurs sections parallèles espacées d’environ trois à quatre millimètres, orientées transversalement sur l’axe longitudinal du crista. Ensuite, coupez les tissus obtenus dans des cassettes histologiques et immergez les tissus dans du formol tamponné à 10% neutre pendant au moins 48 heures. Pour échantillonner les artères coronaires, utilisez une pince et un scalpel pour disséquer les artères coronaires du sillon paraconal et fixez-les dans du formol tamponné à 10% neutre pendant la nuit.

Si nécessaire, décalcifier le tissu dans un mélange un-à-un d’acide formique à 8% et d’acide chlorhydrique. Ensuite, faites plusieurs coupes transversales espacées d’environ trois millimètres. Placez les sections dans une cassette histologique et mettez la cassette dans du formol tamponné à 10% neutre pour l’enrobage.

Après avoir fixé le cœur dans du formol tamponné à 10% neutre pendant au moins 48 heures, placez deux pinces à dissection droite édentées. Un à travers le cava crânien, l’oreillette droite, la valve tricuspide et le ventricule droit. Et l’autre par la veine pulmonaire, l’oreillette gauche, la valve mitrale et le ventricule gauche.

En utilisant l’espace entre les pinces comme guide, utilisez une lame de coupe pour couper de la base au sommet du cœur. À environ cinq millimètres de distance, coupez une autre section longitudinale du segment cardiaque qui comprend l’aorte. Ensuite, séparez complètement la base cardiaque de l’apex.

Après avoir placé chaque segment de tissu dans une cassette histologique, placer les cassettes dans du formol tamponné à 10% neutre jusqu’à l’incorporation. Ce protocole a permis une visualisation réussie des caractéristiques externes et des structures internes du cœur. En utilisant cette technique, des échantillons de tissus cardiaques pourraient être prélevés avec succès pour des études histologiques sur différents animaux comme les chiens et les chats.

Soyez toujours prudent lorsque vous relâchez le cœur, car cela pourrait endommager certaines structures d’intérêt. Et aussi, lors de la dissection, de la récolte et de l’encastrement du nœud sino-auriculaire. Bien que cette méthode ait été créée pour diagnostiquer la modélisation de l’arythmie, la cardiomyopathie hypertrophique, l’infarctus du myocarde et l’intoxication cardiaque, elle peut être utilisée pour diagnostiquer n’importe quelle maladie cardiaque.