Isolement des lysats de protéines de cellules entières à partir de processus faciaux de souris et de cellules de mésenchyme palatales cultivées pour l’analyse des phosphoprotéines

Ce protocole peut être utilisé pour mieux comprendre la dynamique et les rôles des phosphoprotéines actives au cours du développement craniofacial des mammifères. Ce protocole surmonte la barrière commune de la déphosphorylation lors de l’isolement des protéines à partir de deux contextes physiologiquement pertinents, les processus faciaux de souris et les cellules de mésenchyme palatale embryonnaire de souris cultivées. Il est impératif d’agir rapidement tout en gardant tous les réactifs et matériaux sur la glace et d’utiliser des inhibiteurs de phosphatase dans tous les tampons de lyse pour maintenir l’intégrité des protéines phosphorylées.

Pour commencer, posez le corps de la souris sur une planche de dissection avec le côté ventral tourné vers le haut et vaporisez l’abdomen de la souris avec de l’éthanol à 70%. Ouvrez ensuite la cavité abdominale en pinçant et en soulevant la peau antérieure à l’ouverture vaginale avec une pince Semken droite. Ensuite, coupez la peau soulevée en couches sous-jacentes avec des ciseaux chirurgicaux à lame droite à un angle de 45 degrés de chaque côté pour générer une forme en V qui s’étend à chaque surface latérale à peu près à mi-chemin entre les quatre membres et les membres postérieurs.